全 文 ：第 二 军 医 大 学 学 报
Ae a d J Sec MI I Med U
l 一 iv
I卯 I :l 双) 5:叫9 ~ 5 42 9 4 4
野胡萝 卜籽挥发油碳氢部位对 S D 大鼠体内和体外的潜在致
畸胎作用 *
蔡东联
邹 影
印 木 泉 毕 洁 王 静 (训练部特殊毒理学教研室 , 2伽)4 3 3)
(江苏省职业病防治研究所毒理室 , 南京 , 2 10 0 38)
提要 用体外原代胚胎细胞培养和体内传统致畸胎 试验研究 了野胡萝 卜籽挥发油碳氢部位的潜在致畸胎
作用 。 体内试验检查 了 7 只 孕鼠和 703 只胎鼠 。 挥发油体外试验浓度为 刃 、 】o 和 150 产纸 ,m l, 体内试验为
62 5
.
0
,
3 12
.
5 和 156 . 3 m郭kg , 分别用生理盐水和维生素 A 作为阴性和阳性对照 结果表 明 , 在 体外挥发
油对大鼠胚胎 中脑和肢芽细胞的分化无抑制作用 ; 体内亦无毋体 毒性 、 胚胎 毒性 , 对胎鼠亦无致畸胎作
用 , 也不影响其生长发育 。 两种试验均提示挥发油对 S D 大鼠无致畸胎作用 , 月.两种方法的结果 是 · 致
的
关键词 野胡萝 卜籽挥发油 ; 大鼠 ; 致畸试验
S tu d ies o n ht e T er a to g e in e oP te
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SP r a g u少D a w ley R a t s l’n Vi l r o a n d
o f ht e V o l a itl e 以1 o f 及之〔 ,u s e `述r o l L 、 S 。以1 i n
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A比 tr ac t hT e t e r a t o ge n i e P o t e n t i a l e价 e t s o f t h e v o l a t i le ( , 11 o f 加 u e哪 c a r o r L . s e d we r e s t一: d ie 、 1 11、
SP r a g u于D a w l e y r a t s 诚 th 1 v i rr o e m b yr o 一i d b r ia n a dn lim b b u d ce ll s c u l t u r e a n d i, 7 `,i 一, o e ( ) n v e n * 1( ) xl ` : i
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野 胡萝 卜籽以 “ 南鹤虱 ” 之 名 入 药 , 医
书史籍 载其 有 解痉 、 扩张 冠 状 动 脉的 功
能, 并可治痢疾 ; 其醇 提取物对 已孕 或未
孕的猫和豚鼠 子宫 有收 缩作 用 ! ’ l 。 挥发 油
碳氢部位 62 5 . o mg k/ g 皮 下注射即 可 使 妊
今国家计 划生育委员会资 助研究项目的一部分
娠母猴流产 , 对 小鼠 和大 鼠均 有 中止妊娠
的作用 。 为评价野 胡萝 卜籽挥发油碳氢 部
位 (简称挥发 汕 )的 致 畸胎 作 用 , 参 照 新
药审批规定 , 我们用 体外 胚胎细 胞 培养和
体内传统致畸试验 的方法 , 对 挥发 油的潜
4 50
第 二军医 大学学报 19 1二21 ( 5)
在致畸胎作用进 行 r 研究 , 同时对体 内和
体外致畸胎的方法进 行 了比较 。
1 材料和方法
In 测试样品 由华东化工学院制药教研
室提供的挥发 油样 品为浅 黄色 油状 液体 ,
比 币 0 . g j g /n l l , 不溶 f l 水 , 溶 于乙醇 。
1
.
2 试验动物 本校实验动物中心提供的
已 交配的 ` S D 雌 性大 鼠 , 以查见 阴栓 之 日
作为妊娠的第 0 天 (口户。
{
.
3 试验方法
1
.
3
.
1 休 外胚胎细 胞培 养致畸试验 交 配
后 第 14 或 15 天的 S D 大鼠处 死后 取 出 胚
卜 存 无菌操作的 条件 卜, 取胚 胎 的 中脑 和
极 芬 川. 纠 以 0 2 5% 的 胰 酶消 化 成 单细
i电 海}, )戊 5 \ 10勺m l 悬液 : 以 2 0 # l 滴 成 l
个微 {J l , 梦毖 个培 养 i兀l 件1 滴 6 个 二 然 后 在
3 7 〔 , 5% C 。 , , 10 0% R H 的 条件下 培养 3 h
以贴壁 ; 再加 入含 10 % 胎牛血清的 19 9 培
养基及受试物 、 挥发油试验浓度为 50 , 10 0
和 150 声, g /m l , 阴性对照用生理 盐水 , 阳性
对照 用维生素 A (V A )】# g/ 间 。 在 上述 条 件
厂静止 培 养 s d 后取 出 , 用 10 % 甲醛 固
定 ; 染色 中脑 细胞 用苏 木精染液 , 肢 芽细
胞 用 1% 阿利新 蓝 ( lA d a n bl u e) 液 。 在 显
微镜 下计数 侮个微 团 内的细 胞集落 数 ; 根
据梅个微团中分化 的细 胞 集落数 与 受试物
浓度绘制曲线 , 由此找 出分化抑制作 用达
对 照值 50 % 时的浓 度 , 即 50 % 的 分 化 抑
制浓度 ( IC S ( , ) 。
1
.
.3 2 体内一传统致畸胎试验 已交配的 S D
雌性大鼠按体 重随机分组 , 设 1/ 8 , 1/ 16 和
l / 32 L D S`
)
( 即 6 2 5 . 0 , 32 1 . 5 和 1 56 . 3 mg /k g )组 , 以及 阴性和 阳性对照组 , 分 别用 生理
盐水和 V A 作为 阴性对 照和 阳性对 照物 ,
v A 用 100 0 00 IU/ 只 ; 除 阳性 对照 一F孕 期
第 9 天 一 次灌 胃给药 外 , 其余 各组均 分别
存 第 6 , 9 和 12 天时 共 3 次 皮 下注 射 给
药 二 于第 2 0 天时处死母鼠 , 取出胚胎 , 检查
着床 数 、 活 胎数 、 死胎 数 及吸收 胎数 , 同
时测量每个活胎 鼠的 身 长 、 尾 长及 体重 ,
拜进行外观 、 胜器和 骨 胳畸形 的检 查 。 观
察的指标包 括 母体 效 应 、 胚 胎毒性 、 胎鼠
生长发育的影响和致 畸胎 效应 。
2 结 果
2
.
1 体 外胚胎细胞培养致畸试验 挥发油
对 S D 大 鼠胚胎 的 中脑和肢 芽细 胞抑 制分
化作用的结果见表 1 。
表 1 野胡萝 卜籽挥发油碳氢部位对 S D 大鼠
胚胎细胞抑制分化的 效应
aT b
.
I EI 触e st of t映 ihn iib ot yr 山fe er nt ia 6 on of
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* * P < 0 0 1
e o m p a er d 期 th n e攀 t iv e e o n t r o l
经方 差分析表 明 , 挥发油各剂量组的中
脑和肢芽细胞生 长的 集落 数 与阴性对 照组
无显著差异 , 而阳性 对照 组 与阴性 对照及
各给 药组均 有 显著性 (尸 < .0 00 1) 挥 发汕
的 I c , ) > 150 # g/ 司 , 而 V A 为 l 月g/ m l
.2 2 体 内传统致 畸胎 试验 挥发 油对 S D
大 鼠 体 内致 畸 胎 作 用 的 结 果见 表 2 和 表
3
。 实验 中共检查怀孕母鼠 7 7 只 , 胎鼠 703
只。
2
.
2
.
1 母体效 应 挥发油 对怀 孕 母鼠体重
没有影响 , 各组 妊娠 第 1 天时 的体 重和第
20 天时的母体增 重 , 经方 差分 析均 无 显著
性差异 。
.2 .2 2 胚胎效 应` 挥发 油对 孕鼠着 床前后
的胚胎毒性影响 (表 2 ) 。
数据经 才检验 表 明 , 挥 发油各 剂量组
的着床数 、 活 胎数 、 吸收 胎 数及窝 平均活
胎数与阴性组均无显著性差异 ( P > 0 . 0 5 ) ,
而阳性对照组与 阴性对照 组及 挥发 油各剂
第二军 医大学学报 ! 9 91 ; 12 ( 5) 4 5 !
量组均有显著性 (尸 < 0 . 0 5或 尸 < .0 0 1 ) 。 `
.2 .2 3 对胎 鼠生 长发育 的影响 挥发 油 对
胎鼠的身长 、 体 重和 尾长等 生 长发 育指标
均未见不 良影 响 , 各 剂量 组与 阴性对 照均
无显著性差异 ( P > 0 . 05 ) , 阳性对照组与其 他
各组亦未见显著性差异 ( 尸 > 0 . 0 5 ) 。
.2 .2 4 对胎鼠的致 畸胎 效应 挥发 油对 胎
鼠的外观 、 内脏和 骨胳畸 形学 检查 结 果见
表 3 。
表 2 野胡萝 卜籽挥发油碳氢部位对 S D 大鼠胚胎的毒性效应
aT b
.
Z E 月他c t s o f t h e e m b r y o t o劝 c iyt o f the v o la山 e 0 11 o f D a u c哪 c a ,·口 r L . 珊 d
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表 3 野胡萝 卜籽挥发油碳氢部位对胎鼠的致畸学效应
T a b
.
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实验 结果经 统 计学处 理 , 挥发 汕 的 致 验 , },没 有发现 挥发 油 对 S D 大鼠胚 胎的
畸效应的结果 与阴性 对照 无 撇著 矛性差 异 ;
而阳 性物 V A 则 显示 出 明显的致 畸效 应 ,
胎鼠的畸 形表现 有露 脑 、 无眼球 、 鳄 裂 、
多种肋骨畸 形及椎体 融 合 等 、 畸 形率高 达
28
.
4 7%
, 有畸胎 孕鼠数达 70 . 59 % 。
3 讨 论
用 体 外和体 内致畸 试验 的 方法 , 对挥
发油的潜在致 畸 作 川进 幸J一 厂评价 。 体外 试
脑和肢 茅细 胞有抑制其分化的们: 川 、 l ( ’ , 一
1 50 拼g 厂m l 砌认 为 l ( 、 、 一、 5 `) l `g 厂, 11一的 化
合物有致畸 们川 、 多 l () l g/’ lt 的 化 合物 先
致畸性 {一 } 谁、 ’夕华` },朽了发护l}1 5 ( ) 一 15 () 声,g /:们 l {J、 }
均 无抑制 分 化的 作川 故 .弓汰 为挥 发汕 存
体外试驮 , 1, 权 破 ,闷 ! }致畸 胎作 川 灾验 所
取的 中脑 和肢 茅细 胞 、 是 lfI : lfr 器 官 形成 期
具有高度 分 化作 ljI 的细 饱 司一 分 另{1分 化 为
神经 龙细胞和软 什细 胞 如 叹化 介物抑 制
4 5 2 第二军医 大学 `赞报 19 91 ;1 2 ()5
左些细胞的 分化 , 在胚胎 出生时 , 则 可能
戈现为 中枢神经系统或骨 胳 系统的畸 形 l3] 。
午休 外试验 的 基 础 卜 , 体 内 试 验 的 结 果
·
{与之验证 。 实验 中所 川的 动物品 系而体
人l试验 至少要 7 5 只受 孕大鼠 , 实验周 期长
{ {不经济 。 作为筛选致 畸物的方法 , 体 外
式验在国外 已 ) . ` 为使用 , 欧洲药 学工 业联
盟已认 可此法 作为常规实验方 法 。 在本研
究 ,11 , 我们用挥发油 、 生理 盐水 、 V A 这 3
种化合物进行 了体 内和体 外试验的 对 比 ,
结果是 一致 的 , 表 明体 外和 体 内试验有很
好的相关 , 可以 替代体 内试验对 化合物的
致畸作用进行筛选试验 。
本挥发 油的 中止妊 娠的 作用 在大 鼠 、
小鼠和猴等 动物实验 中已经得 到 证实 , 与
其他同 类化 合物相 比 , 具有 用量 少 、 作 用
快 、 使川方 便 、 安全 及 副 作 用 小等 特 点 。
在以前的试验 中 , 我们用 A m e s 试验 、 微核
试验和体外 染色体 畸变试验检测 了挥发 油
的致突变性 , 结果均为 阴性 , 表 明其无致
突变作用 。 可以认 为与 本研究的 结果是 一
致的 , 因为突变发 生在 体细胞可 能导致 癌
症发生 . 而发生在 生殖 细胞 上的 突变则 可
能引起显性致死 或畸 胎 口 作 为一 种有 前途
的 计划生 育新药 , 如果 使用 于临床 , 根据
本研究的结果可 以认为 在致畸胎 方 面是安
全的 。 阴性和阳性对照 组均 与体 外致畸试
验相同 。 体 内试验 的结果与体 外 试验是 一
致的 , 即挥 发油对 胎鼠 无致畸 胎作 用 , 也
未 见 毋体 毒 j性和 胚胎毒性 , 而阳 性物 V A
已显示出很强的致 畸胎 作用 , 表明在 同等
实验 条件 F , 本试验 的结 果是 可靠 的 。 试
验 中 V A 在 怀 孕的 9 天时 一次 给药 , 而 非
多次给 药 , 这样可以 减 少母体毒性 , 因母
体毒性的本 身 也会使 胎儿发 生畸 形 ; 实验
中母体增重及 胎鼠 生长发 育指标在 阳性对
照组 与其 他各组均 无差异 , 但胚 胎毒 性和
致畸胎 作用 已显示出来 l4] 。 因 此 , 无论 是
体外 短期 的致畸试验 , 还是体 内的传 统致
畸试验 , 挥发油均未显示出致畸胎作用 。
体外致 畸试 验包 括全 胚胎 、 器 官和 胚
胎细胞培 养等数 种方 法 , 本 实验 用胚 胎原
代细 胞培 养的 系统 。 与体 内致畸 胎试 验相
比 , 体外试验 周期 短 , 需要动物数少 , 通
常 2 、 3 只 动物即可提供 足够的 细胞 , 并能
直接检测 尿及 血清等 生物样品 , 而 不需要
对样品进行特殊处理 。 预测 的能 力达 90 %
以上 , 与体内试验有很好的相关性 l习 。
( 本 室 贫 清玉 、 陆 敦 、 夏 良福 、 赵 丽
军 , 新疆 军 区 总 医 院 王 河 川 , 海军 医 学研究
所赵可 明 等同 志 也 参加 了 本研 究 的 工作 ,
特 此致谢 ) 。
参 考 文 献
1
. 艺L苏新医 学院编 . 中药大辞典 ( {; ) . 上海 二 卜海科
学技术出版社 , 19 86 : 26 3 0 一2 6 3 1
2
.
F a u s t ll l a n S h o r t一 t e rm t
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19 8 8
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20 5: 3 5 5
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A n in v i , r o a s s a y
t e r a t o g e n s iw th e u lt u er s o f ar t e m b yr o m id b ar i n a n d
1im b b u d 沈 115 . T o 石 e o l A p p l p h a乒11a c o l , 19 84 二 76:
3 8 3
4
.
R o s a F W
,
W i lk A L
,
K e l se y F O
.
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o l o g y u Pd a t e:
V i t a im
n A e o n g e n e rs
.
T e r a t o lo g y 19 8 6 : 3 3 : 3 5 5
5
.
B ra u n A G
,
B t K豹l甘 C A , E n℃双 ” 1 D l , et 址
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a n t it a t iv e e o r r e s P o n d en ce b
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n t h e in v i、 ,0 a n d
in v i t r o a e t i vi t y o f t e ar t o ge
n i e a ge
n t s
.
P or e Na t l
A e a d S e i U S戌 19 8 2: 7 9 : 2 0 56
( 19 9于 1 1一3 0 收稿 ; 19 9 1一7` 2 2 修回 )