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秦岭柴胡提取物保肝作用的实验研究



全 文 :宫内膜细胞ER表达下降,子宫内膜细胞趋于凋亡、变性,最终
诱发病变内膜的脱落,实现了利用中药祛除增生过长的子宫内
膜,为ADUB的临床治疗提供了一种新途径。
参考文献
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(收稿2012-03-15;修回2012-07-10)
秦岭柴胡提取物保肝作用的实验研究*
卫 昊 卫伟光△ 刘 清 孟建国 王 登  陕西中医学院药学院(咸阳712046)
 摘 要 目的:探讨两种产地秦岭柴胡不同提取物对CC4 致急性肝损伤小鼠的保护作用。方法:取
小鼠108只,分9组,分别灌胃两种产地秦岭柴胡的水提物、65%乙醇提取物、95%乙醇提取
物,连续给药7d,除空白组外,各组小鼠腹腔注射CC4 大豆油溶液造模,16h后眼静脉采血,
测定血清中ALT、AST活性;同时测定肝匀浆中 MDA含量和SOD活性。结果:不同产地
秦岭柴胡的水提组、65%醇提组、95%醇提组均能不同程度降低CC4 模型小鼠血清 ALT、
AST活性,降低肝脏 MDA 的含量,增强SOD活力,其中以东太白产秦岭柴胡65%醇提物
作用最强(P<0.01,P<0.05)。结论:其对肝损伤具有较明显的保护作用。
*陕西省教育厅科学研究计划项目(2010JK499);咸阳市科技发
展计划项目[2010-K14-02(5)]
△西安植物园(西安710061)
 主题词 柴胡/药理学 @秦岭柴胡 保肝作用 动物实验 大鼠
 【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1000-7369(2012)10-1432-02
  秦岭柴胡(B.longicayle wal.es DC.var.giradiwolff)又名
金柴胡,为伞形科柴胡属高山珍稀的药用植物,多年生草本,主
产秦岭太白山、光头山及佛坪等地[1],具有发表祛风、清肝利
胆、清心火、通经之功效,主治感冒、虚劳骨蒸、月经不调、肝气
不舒、黄疸等症,其在疗效上与柴胡不完全一致。本实验在对
柴胡皂苷类成分含量检测研究的基础上,主要对其保肝降酶药
理作用进行研究,并初步优选提取工艺与最佳药材来源。
1 材 料 1.1 实验药物 秦岭柴胡:1号药材样品采
自东太白山(陕西眉县)海拔3400~3500m处;2号药材样品
购于太白县草药店,采自西太白山(陕西太白县)海拔3400m
左右处。上述样品经陕西中医学院生药教研室王西芳教授鉴
定均为伞形科柴胡属秦岭柴胡,全草入药。联苯双酯滴丸:浙
江万邦药业股份有限公司生产,批号:110910。
1.2 实验试剂 四氯化碳:天津天力化学试剂有限公司,
批号:20120108。MDA测试盒:南京建成生物工程研究所,批
号:20120508。SOD试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号:
30120505。考马斯亮兰蛋白测定的试剂盒:南京建成生物工程
研究所,批号:20120515。
1.3 实验动物 昆明种小鼠,体重(20±2)g,雌雄各半,
由西安交通大学医学院实验动物中心提供。SCXK(陕)2007-
001。
1.4 实验器材 紫外分光光度计UV1102,上海天美科学
仪器有限公司。电子天平BT224S,赛多利斯科学仪器(北京)
有限公司。微量进样器YLS-7A,宁波市镇海三爱仪器厂。电
热恒温水箱 HH.W21.420,天津市森斯特仪器有限公司。
2 方 法  2.1 药材供试品制备 称取秦岭柴胡1号、
2号样品各250g,分别以水、65%乙醇、95%乙醇为溶剂回流提
取2次,第一次加14倍量,第二次加10倍量,每次2h,过滤,合
并滤液,回收乙醇并浓缩定容至1000mL即得。
2.2 分组和给药 取昆明种小鼠108只,按体重随机分
成9组,每组12只,雌雄各半。分别为空白对照组、CCl4 模型
组、联苯双酯滴丸阳性组(150mg/kg)、秦岭柴胡1号样品水
提组,1号样品65%醇提组,1号样品95%醇提组,秦岭柴胡2
号样品水提组,2号样品65%醇提组,2号样品95%醇提组。
灌胃给药,剂量为5g/kg。模型组和空白组分别灌胃给予同体
积生理盐水。每天1次,连续给药7d,末次给药1h后,腹腔注
射0.1%CCl4 大豆油溶液10mL/kg;空白组腹腔注射等容量的
大豆油溶液,禁食不禁水。
2.3 指标 造模16h后,摘取眼球取血,冷冻离心(3000r/
min)10min后,取血清检测ALT、AST活性[2]。采血后,快速处
2341 陕西中医2012年第33卷第10期
死小鼠,取肝右叶组织约0.15g,在冰生理盐水中漂洗,滤纸拭
干,置于匀浆器中,加生理盐水在冰水浴中制成10%肝组织匀
浆。冷冻离心,取上清冷藏,待测[3,4]。按照试剂盒说明配制考
马斯亮蓝蛋白测定试剂、MDA测试试剂、SOD测试试剂:用紫
外分光光度计分别在595nm、550nm、532nm波长下检测组织
蛋白、SOD、MDA。
2.4统计学方法  各组数据以珚x±s表示,以组间t检验
进行统计学处理。
3 结 果 3.1 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠血清
ALT、AST活性的影响 与模型组比较,各给药组均可降低
CCl4所致急性肝损伤小鼠血清中 ALT、AST 活性。其中秦岭
柴胡1号样品65%醇提组对血清ALT和AST活性降低最为显著
(P <0.05,P <0.01),其次是秦岭柴胡2号样品65%醇提组,提
示东太白秦岭柴胡65%醇提组保肝降酶作用最强。结果见表1。
表1 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的影响 (珚x±s,n=12)
组别 剂量 (g/kg) 肝脏指数(g/100g) ALT(U/L) AST(U/L)
空白组 - 3.27±0.41  115.25±69.37▲ 350.70±152.46▲
模型组 - 3.75±0.71  596.70±199.41  681.53±196.24
阳性对照组 0.15  3.77±0.60  341.37±208.12△ 554.19±260.21
1号样品水提液 5  3.78±0.43  302.46±191.94▲ 490.19±229.69
1号样品65%醇提液 5  3.74±0.45  244.55±164.95▲ 386.84±204.12△
1号样品95%醇提液 5  3.70±0.62  377.03±197.53  526.50±129.13
2号样品水提液 5  3.61±0.50  371.23±120.12△ 610.83±243.70
2号样品65%醇提液 5  3.71±0.55  266.64±195.18▲ 484.19±145.98△
2号样品95%醇提液 5  3.88±0.55  320.06±235.48△ 504.61±135.60
  注:与模型组相比,△P <0.05,▲P <0.01
  3.2 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA 和SOD
活性的影响 与模型组比较,各给药组均可不同程度使CCl4
致急性肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA水平降低,SOD活性增强,
秦岭柴胡1号样品即东太白产秦岭柴胡整体效果优于西太白
产秦岭柴胡。提取工艺方面,65%醇提组和水体组均可显著降
低 MDA水平,增加SOD活力(P<0.05,P <0.01),其中以
65%醇提组效果最好,说明东太白秦岭柴胡65%醇提物具有较
强的抗氧化及清除氧自由基的作用。结果见表2。
表2 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA和SOD活性的影响(珚x±s,n=12)
组别 剂量 (g/kg) 组织蛋白 (g/L) MDA(μmol·g
-1) SOD(kU·g-1))
空白组 - 1.231±0.238△ 11.24±5.69▲ 62.77±13.26▲
模型组 - 1.542±0.226  21.82±6.87  49.44±6.89
阳性对照组 0.15  1.321±0.230  13.85±4.76▲ 59.66±9.73△
1号样品水提液 5  1.135±0.228▲ 11.12±3.60▲ 56.61±5.82△
1号样品65%醇提液 5  1.495±0.211  13.92±4.55△ 70.53±13.21▲
1号样品95%醇提液 5  1.418±0.244  16.16±7.44  61.99±11.69▲
2号样品水提液 5  1.442±0.293  17.21±5.91  49.28±14.34
2号样品65%醇提液 5  1.366±0.241  10.09±4.12▲ 55.07±14.30△
2号样品95%醇提液 5  1.457±0.240  12.30±7.11△ 60.30±9.51▲
  注:与模型组相比,△P <0.05,▲P <0.01
  4讨 论  秦岭柴胡是陕西省重点保护的药用植物种类
之一,地区民间使用广泛,疗效显著,本实验结果显示两种产地
秦岭柴胡65%乙醇提取液保肝降酶作用较好,均可有效降低四
氯化碳致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性,保肝作用机理
可能与本要可明显增强SOD活性,降低 MDA含量有关。结合
柴胡皂苷含量测定结果可知,太白秦岭柴胡65%醇提组柴胡皂
苷a和柴胡皂苷d总和最高,由此可见秦岭柴胡的保肝作用可
能与柴胡皂苷含量有关。现将肝损伤各指标改善情况与柴胡
皂苷含量相关性分析如下。
表3 四氯化碳致肝损伤各指标与皂苷含量关系
相关性 ALT  AST  MDA  SOD
柴胡皂苷a  0.92  0.91  0.53  0.71
柴胡皂苷d  0.50  0.63  0.32  0.67
柴胡皂苷a+d  0.92  0.91  0.52  0.71
  由表3可知:ALT,AST活性与柴胡皂苷a含量线性关系
较明显,其余各指标线性不明显或线性波动比较大。由此可初
步推测,柴胡皂苷a的含量与秦岭柴胡的保肝作用相关性较高,
柴胡皂苷a的含量越高,秦岭柴胡保肝作用疗效越好。
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(收稿2012-02-28;修回2012-06-26)
3341陕西中医2012年第33卷第10期