全 文 ：第４０卷　第６期
２０１２年６月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４０ Ｎｏ．６
Ｊｕｎ．２０１２
网络出版时间：２０１２－０５－２２　１６：３６
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１２０５２２．１６３６．０３３．ｈｔｍｌ
羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究
＊
顾地周，陆　爽，巴春影，李媛媛
（通化师范学院 生物系，吉林 通化１３４００２）
［摘　要］　 【目的】建立羊踯躅嫩叶离体培养及植株高效再生体系。【方法】以羊踯躅新生嫩叶为外植体，筛选
嫩叶愈伤组织诱导、再分化及生根培养基，并以再生植株茎节为试材，建立高效植株再生体系。【结果】最适合羊踯躅
嫩叶愈伤组织诱导的培养基为１／２ＤＲ＋２．４０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．８０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，诱导率为９９．５％；愈伤组织再分化的最
佳培养基为１／２ＤＲ＋２．９０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．０１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．７５ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，分化率为９９．７％；适宜生根的培养基为
１／４ＤＲ＋０．０６ｍｇ／Ｌ　ＺＴ＋０．０２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，生根率达９９．０％。利用再生植株茎节的快繁结果表明，在２８ｄ的培养
周期内，每节段平均增殖达５倍以上。【结论】成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、再分化芽苗和植株高效再生体
系，可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。
［关键词］　羊踯躅；离体培养；愈伤组织；植株再生体系；均匀设计
［中图分类号］　Ｑ９４３．１ ［文献标识码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１２）０６－０１８９－０６
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ
ＧＵ　Ｄｉ－ｚｈｏｕ，ＬＵ　Ｓｈｕａｎｇ，ＢＡ　Ｃｈｕｎ－ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｙｕａｎ－ｙｕａｎ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｏｎｇｈｕａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｏｎｇｈｕａ，Ｊｉｌｉｎ１３４００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔｌｅｔ
ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ （Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ
（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍｓ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｃａｌｕｓ
ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ，ａｎｄ　ｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｅｆｆｉ－
ｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｐｌａｎｔｌｅｔ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　１／２ＤＲ＋２．４０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．８０
ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｕｉｔ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｆｒｏｍ　ｎｅｗ　ｌｅａｖｅｓ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｗａｓ　９９．５％；１／２ＤＲ＋２．９０
ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．０１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．７５ｍｇ／Ｌ　ＫＴ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｗａｓ　９９．７％；１／４ＤＲ＋０．０６ｍｇ／Ｌ　ＺＴ＋０．０２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ，ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ
９９．０％；Ｅａｃｈ　ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ｏｎｅ　ｎｏｄｅ　ｗａｓ　ｃｕｔ　ｆｒｏｍ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｏｒ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ａ　５－
ｆｏｌｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｗｉｔｈｉｎ　２８ｄａｙｓ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄ－
ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ
ｏｆ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｓａｔｉｓｆｙ　ｔｈｅ　ｎｅｅｄ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｓｔｒａｌｉｚｅｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃａｌｕｓ；ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｕｎｉｆｏｒｍ
ｄｅｓｉｇｎ
＊ ［收稿日期］　２０１１－１２－１２
［基金项目］　吉林省科技厅资助项目“杜鹃花属植物种质资源保护研究”（２００７０５Ｃ０５）
［作者简介］　顾地周（１９７３－），男，吉林通化人，讲师，主要从事珍稀濒危植物和药用植物研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｄｉｚｈｏｕ＠１６３．ｃｏｍ
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2012.06.020
　　羊踯躅（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ）
又名闹羊花、黄杜鹃、黄色映山红，隶属杜鹃花科杜
鹃花属羊踯躅亚属落叶灌木，主要分布于江苏、浙
江、江西、福建、湖南、湖北、河南、四川、贵州等地的
山坡、石缝、灌木丛中，是珍稀濒危药用植物。羊踯
躅花中含有毒性成分木毒素和石楠素，叶中含黄酮
类、杜鹃花毒素、煤地衣酸甲酯，有镇痛、驱风、除湿、
麻醉功效，可治风湿顽痹、伤折疼痛、皮肤顽癣等症，
对粮食害虫、蔬菜害虫也有一定的防治效果，可用于
开发植物源农药。羊踯躅还可被引种驯化为露地栽
培的园艺观赏植物，是杜鹃育种的重要种质资源。
利用种子、扦插、嫁接及压条等常规繁殖方法存在萌
发率、生根率和移栽成活率极低等问题，使羊踯躅的
开发及利用受到极大限制。目前，已有关于羊踯躅
及其同属植物离体培养的研究［１－６］，但尚未见关于羊
踯躅高效快繁体系的报道。因此，本研究利用植物
组织培养方法，以羊踯躅新生嫩叶为材料，筛选羊踯
躅嫩叶愈伤组织诱导及分化和生根的适宜培养基，
建立羊踯躅离体培养和高效的植株再生体系，以期
为羊踯躅的工厂化育苗提供参考。
１　材料与方法
１．１　外植体材料的来源及处理
羊踯躅枝条由江苏省农业科学研究院提供，将
其枝条茎尖剪除后在实验室内水培促腋芽萌发。待
腋芽萌发出鲜嫩叶片后将嫩叶剪下，在超净工作台
上用体积分数７０％酒精涮洗１０ｓ，用次氯酸钠（质
量浓度为３％）溶液浸泡６ｍｉｎ，无菌水冲洗８次，无
菌滤纸吸干表面水分后，切割成１．００ｃｍ左右的叶
块作为外植体备用。
１．２　羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导培养基的筛选
以１／２ＤＲ为基本培养基［７］，内含蔗糖３０ｇ／Ｌ、
琼脂粉６．８ｇ／Ｌ，再附加不同质量浓度的２ｉｐ（经预
试验确定为１．８０～２．３０ｍｇ／Ｌ）和 ＮＡＡ（经预试验
确定为０．１０～０．５０ｍｇ／Ｌ），调节ｐＨ为５．５，将外植
体在（２５±２）℃、光照强度１　０００ｌｘ、光照周期１０
ｈ／ｄ条件下培养。为了提高羊踯躅嫩叶愈伤组织诱
导的速度和诱导率，采用均匀设计法［８－１０］，每处理１０
个外植体，重复３次，选用Ｕ１０（１０２）均匀表，考察２ｉｐ
和ＮＡＡ不同质量浓度交叉配比对愈伤组织诱导率
的影响。嫩叶培养４５ｄ后统计诱导率，筛选最适合
羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的培养基。
１．３　羊踯躅嫩叶愈伤组织再分化培养基的筛选
以１／２ＤＲ为培养基，内含蔗糖３０ｇ／Ｌ、琼脂粉
６．５ｇ／Ｌ，并附加不同质量浓度的２ｉｐ（经预试验确定
为２．００～２．７０ｍｇ／Ｌ）、ＮＡＡ（经预试验确定为
０．０２～０．０５ｍｇ／Ｌ）和ＫＴ（经预试验确定为１．００～
１．５０ｍｇ／Ｌ），调节ｐＨ 为５．６，将愈伤组织置于
（２６±２）℃、光照强度１　２００ｌｘ、光照周期１２ｈ／ｄ条
件下培养。选用Ｕ１２（１２３）均匀表，每处理接种１０块
愈伤组织块，重复３次，考察２ｉｐ、ＮＡＡ和 ＫＴ不同
质量浓度交叉配比对分化率的影响。愈伤组织培养
４０ｄ后统计分化率，同时筛选最适合羊踯躅愈伤组
织芽苗分化的培养基。
１．４　羊踯躅植株再生体系的建立
以１／４ＤＲ为培养基，内含蔗糖１５ｇ／Ｌ、琼脂粉
７．５ｇ／Ｌ，并附加不同质量浓度的ＺＴ（经预试验确定
为０．０１～０．０５ ｍｇ／Ｌ）、ＩＡＡ（经预试验确定为
０．１０～０．３０ ｍｇ／Ｌ）和 ＮＡＡ（经预试验确定为
０．０５～０．２０ｍｇ／Ｌ），调节ｐＨ为５．４，将愈伤组织再
分化的芽苗在（２０±２）℃、光照强度８００ｌｘ、光照周
期８ｈ／ｄ条件下培养。为了提高羊踯躅愈伤组织再
分化芽苗的生根速度和生根率，采用均匀设计法，选
用Ｕ１０（１０３）均匀表，每处理接种１０个芽苗，重复３
次，考察ＺＴ、ＩＡＡ和 ＮＡＡ不同质量浓度交叉配比
对生根率的影响。芽苗培养３５ｄ后统计生根率，筛
选最适合羊踯躅芽苗生根的培养基。
采取节增殖方式对羊踯躅进行高效快繁［１１－１２］，
待生根的苗伸长至３．００ｃｍ以上时，在超净工作台
上打开培养瓶，将生根的苗留１或２片叶剪下苗干，
并切割成含１或２片叶的小段转接到附加 ＧＡ３
（１．００ｍｇ／Ｌ）的生根培养基中，进行腋芽萌发伸长
和生根培养，待芽苗生根和腋芽萌发后，统计并计算
每瓶中每段茎节的增殖倍数。
１．５　数据处理与分析
数据分析处理应用均匀设计软件（Ｕｎｉｆｏｒｍ　Ｄｅ－
ｓｉｇｎ　３．０Ｖ）进行。
２　结果与分析
２．１　２ｉｐ和ＮＡＡ不同质量浓度配比对羊踯躅嫩叶
愈伤组织诱导的影响
基本培养基上附加不同质量浓度２ｉｐ和 ＮＡＡ
对羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的影响如表１所示，关
于２ｉｐ（Ｘ１）和ＮＡＡ（Ｘ２）与诱导率（Ｙ１）关系的回归
分析结果见表２。由表１和表２可知，２ｉｐ和 ＮＡＡ
对羊踯躅愈伤组织的诱导率均有显著影响，二者的
最佳质量浓度分别为２．３０和０．５０ｍｇ／Ｌ。
０９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４０卷
表１　羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导培养基筛选的Ｕ１０（１０２）均匀设计试验结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｕ１０（１０２）ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｆｏｒ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｎｅｗ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ
编号
Ｎｏ．
因素／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｆａｃｔｏｒ
２ｉｐ
（Ｘ１）
ＮＡＡ
（Ｘ２）
诱导率／％
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
（Ｙ１）
编号
Ｎｏ．
因素／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｆａｃｔｏｒ
２ｉｐ
（Ｘ１）
ＮＡＡ
（Ｘ２）
诱导率／％
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
（Ｙ１）
１　 １．８０　 ０．４０　 ６４．５　 ６　 ２．３０　 ０．２０　 ９２．１
２　 １．９０　 ０．３０　 ７８．８　 ７　 ２．００　 ０．５０　 ８２．６
３　 ２．００　 ０．１０　 ７０．６　 ８　 ２．１０　 ０．１０　 ７２．０
４　 ２．１０　 ０．５０　 ８１．７　 ９　 ２．２０　 ０．３０　 ８６．５
５　 ２．２０　 ０．２０　 ８５．０　 １０　 ２．３０　 ０．４０　 ９６．１
表２　羊踯躅嫩叶离体培养和植株再生各阶段试验因素的回归分析
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｌｅａｆ　ｏｆ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｓｔａｇｅｓ
培养阶段
Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｔａｇｅｓ
回归方程
Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ
样本容量（Ｎ）
Ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｚｅｓ
检验值（Ｆｔ）
Ｔｅｓｔ　ｖａｌｕｅ
临界值
Ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｖａｌｕｅ
愈伤组织诱导
Ｃａｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
Ｙ１＝－３９．０＋５３．９　Ｘ１＋２４．２　Ｘ２ １０　 １９．９０　 Ｆ（０．０５，２，７）＝４．７３７
芽苗再分化
Ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
Ｙ２＝３６．２＋１８．０Ｘ１－３２０　Ｘ２＋１２．０Ｘ３ １２　 ２４．９２　 Ｆ（０．０５，３，８）＝４．０６６
生根培养
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｙ３＝７９．６＋３６０　Ｘ１－２８．２　Ｘ３ １０　 ８５．００ Ｆ（０．０５，２，７）＝４．７３７
　　注：显著性水平α＝０．０５。
Ｎｏｔｅ：Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｌｅｖｅｌα＝０．０５．
　　经计算，２ｉｐ和ＮＡＡ对诱导率的贡献率分别为
９５．１％和１５．４％，可见２ｉｐ对愈伤组织诱导率的影
响远大于ＮＡＡ，又因２ｉｐ和 ＮＡＡ均与诱导率呈正
相关，因此推测２ｉｐ质量浓度高于２．３０ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ
质量浓度高于０．５０ｍｇ／Ｌ时诱导率更高。为验证
此推断，另设２ｉｐ质量浓度为２．３０，２．３５，２．４０，
２．４５，２．５０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ为０．５０，０．５５，０．６０，０．６５，
０．７０，０．７５，０．８０，０．８５，０．９０，０．９５，１．００ｍｇ／Ｌ共
１１个处理（根据均匀设计法试验原理，以水平数最
大的项为最低水平数选择均匀设计表，水平数小于
最大项的进行重复，下同），将１．００ｃｍ左右的叶块
接种到附加不同质量浓度２ｉｐ和ＮＡＡ的１／２ＤＲ培
养基上培养，结果如图１所示。培养１０ｄ时，叶块开
始增厚（图１ａ）；继续培养至２５ｄ时，叶块逐渐增厚变
形，在叶块表面出现绿色的愈伤组织；培养至４５ｄ，叶
块完全转变为绿色偏黄的愈伤组织（图１ｂ）。试验结
果显示，２ｉｐ质量浓度为２．４０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．８０
ｍｇ／Ｌ时愈伤组织诱导率最高，诱导率达９９．５％。因
此，确定羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的最佳培养基为
１／２ＤＲ＋２．４０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．８０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ。
图１　羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导培养的形态观察
ａ．培养１０ｄ；ｂ．培养４５ｄ
Ｆｉｇ．１　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｌｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｅｗ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ
ａ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　１０ｄ；ｂ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　４５ｄ
２．２　２ｉｐ、ＮＡＡ和ＫＴ不同质量浓度配比对羊踯躅
愈伤组织芽苗再分化的影响
培养基上附加不同质量浓度２ｉｐ、ＮＡＡ、ＫＴ对
羊踯躅愈伤组织芽苗再分化的影响如表３所示，关
于２ｉｐ（Ｘ１）、ＮＡＡ（Ｘ２）、ＫＴ（Ｘ３）与分化率（Ｙ２）关系
的回归分析结果见表２。
１９１第６期 顾地周 ，等：羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究
表３　羊踯躅愈伤组织再分化芽苗培养基筛选的Ｕ１２（１２３）均匀设计试验结果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｕ１２（１２３）ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｆｏｒ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ
ｃａｌｕｓ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ
编号
Ｎｏ．
因素／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｆａｃｔｏｒｓ
２ｉｐ
（Ｘ１）
ＮＡＡ
（Ｘ２）
ＫＴ
（Ｘ３）
分化率／％
Ｒａｔｅ　ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
（Ｙ２）
１　 ２．００　 ０．０４　 １．２０　 ７４．２
２　 ２．１０　 ０．０５　 １．５０　 ８０．４
３　 ２．２０　 ０．０５　 １．３０　 ７０．７
４　 ２．３０　 ０．０４　 １．００　 ７８．６
５　 ２．４０　 ０．０５　 １．１０　 ７５．０
６　 ２．５０　 ０．０３　 １．４０　 ８５．２
７　 ２．６０　 ０．０４　 １．４０　 ８８．６
８　 ２．７０　 ０．０２　 １．１０　 ９２．８
９　 ２．４０　 ０．０３　 １．００　 ８２．０
１０　 ２．５０　 ０．０２　 １．３０　 ８９．０
１１　 ２．６０　 ０．０２　 １．５０　 ９４．６
１２　 ２．７０　 ０．０３　 １．２０　 ９１．３
　　由表２和表３可知，２ｉｐ、ＮＡＡ和ＫＴ对羊踯躅
嫩叶愈伤组织的芽苗再分化率均有显著影响，三者
最佳质量浓度分别为２．７０，０．０２和１．５０ｍｇ／Ｌ。经
计算，２ｉｐ、ＮＡＡ和ＫＴ对芽苗分化率的贡献率分别
为１６．２％，１３．３％和８．１５％，可见２ｉｐ对愈伤组织
芽苗再分化率的贡献大于ＮＡＡ和ＫＴ，又因２ｉｐ和
ＫＴ均与分化率呈正相关，ＮＡＡ与分化率呈负相
关，推测２ｉｐ和ＫＴ质量浓度分别高于２．７０和１．５０
ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ低于０．０２ｍｇ／Ｌ时，芽苗分化率更高。
为验证此推断，另设２ｉｐ质量浓度为２．７０，２．７５，
２．８０，２．８５，２．９０，２．９５，３．００ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ为０．００，
０．０１，０．０２ｍｇ／Ｌ，ＫＴ为１．５０，１．５５，１．６０，１．６５，
１．７０，１．７５，１．８０，１．８５，１．９０，１．９５，２．００ｍｇ／Ｌ，共
１１个处理，待嫩叶块完全脱分化形成愈伤组织后，
将愈伤组织切割成小块接种到添加不同浓度２ｉｐ、
ＮＡＡ和ＫＴ的１／２ＤＲ培养基上，培养１０ｄ后发
现，愈伤组织表面产生大量颗粒状小凸起；继续培养
至２０ｄ，颗粒状小凸起逐渐转变为锥状；培养至３０ｄ
时，锥状体生长并伸长为大量不定芽（图２ａ）；培养
至４０ｄ，不定芽长度可达１．００ｃｍ以上（图２ｂ）。研
究发现，２ｉｐ质量浓度为２．９０ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ为０．０１
ｍｇ／Ｌ、ＫＴ为１．７５ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织分化率最高，
可达９９．７％。可见，羊踯躅嫩叶愈伤组织芽苗再分
化的最佳培养基为１／２ＤＲ＋２．９０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．０１
ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．７５ｍｇ／Ｌ　ＫＴ。
图２　羊踯躅嫩叶愈伤组织芽苗再分化培养的形态观察
ａ．培养３０ｄ；ｂ．培养４０ｄ
Ｆｉｇ．２　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ
ｎｅｗ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ
ａ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　３０ｄ；ｂ．Ｃｕｌｔｕｒｅｄ　４０ｄ
２．３　ＺＴ、ＩＡＡ和 ＮＡＡ不同质量浓度配比对羊踯
躅再生芽苗生根的影响
培养基中附加不同质量浓度 ＺＴ（Ｘ１）、ＩＡＡ
（Ｘ２）和ＮＡＡ（Ｘ３）对羊踯躅再生芽生根的影响见表
４，关于３种激素与生根率（Ｙ３）关系的回归分析结果
见表２。
２９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４０卷
表４　羊踯躅再生芽苗生根培养基筛选的Ｕ１０（１０３）均匀设计试验结果
Ｔａｂｌｅ　４　Ｕ１０（１０３）ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｆｏｒ　ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ
编号
Ｎｏ．
因素／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｆａｃｔｏｒｓ
ＺＴ
（Ｘ１）
ＩＡＡ
（Ｘ２）
ＮＡＡ
（Ｘ３）
生根率／％
Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ
（Ｙ３）
１　 ０．０１　 ０．３０　 ０．１０　 ８２．０
２　 ０．０２　 ０．３０　 ０．１５　 ８２．４
３　 ０．０３　 ０．２５　 ０．２０　 ８５．５
４　 ０．０４　 ０．２５　 ０．１５　 ８８．３
５　 ０．０５　 ０．２０　 ０．１０　 ９５．９
６　 ０．０５　 ０．２０　 ０．１５　 ９４．３
７　 ０．０４　 ０．１５　 ０．２０　 ８７．６
８　 ０．０３　 ０．１５　 ０．０５　 ８７．３
９　 ０．０２　 ０．１０　 ０．０５　 ８５．４
１０　 ０．０１　 ０．１０　 ０．２０　 ７７．０
　　由表２和表４可知，ＺＴ和ＮＡＡ对羊踯躅嫩叶
愈伤组织分化的芽苗生根率有显著影响，ＩＡＡ对生
根率影响不显著。ＺＴ和 ＮＡＡ的最佳质量浓度均
为０．０５ｍｇ／Ｌ。经计算，ＺＴ和ＮＡＡ对芽苗生根的
贡献率分别为９４．５％和８．８２％，可见ＺＴ对再生芽
苗生根率的贡献远大于ＮＡＡ，因ＺＴ与生根率呈正
相关，ＮＡＡ与生根率呈负相关，推测ＺＴ质量浓度
高于０．０５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ低于０．０５ｍｇ／Ｌ时，芽苗生
根率更高。为验证此推断，另设 ＺＴ 质量浓度为
０．０５，０．０６，０．０７，０．０８，０．０９，０．１０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ为
０．００，０．０１，０．０２，０．０３，０．０４，０．０５ｍｇ／Ｌ共１２个处
理（为了试验结果的准确性，将水平数进行１次重
复），即待愈伤组织分化的芽苗长至１．５０ｃｍ左右
时，将生长健壮的芽苗从愈伤组织上切下，转接到附
加不同质量浓度ＺＴ和ＮＡＡ的１／４ＤＲ培养基中，
培养８ｄ后，在靠近芽苗切口的茎部有微小颗粒出
现；继续培养至２０ｄ，微小颗粒逐渐变形为锥状；培
养至２７ｄ时锥状颗粒伸长为不定根；３５ｄ后可形成
３～５条不定根，并有侧根出现（图３ａ）。研究发现，
ＺＴ质量浓度为０．０６ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ为０．０２ｍｇ／Ｌ时
芽苗生根率最高，生根率可达９９．０％。可见，羊踯
躅再生芽苗生根的最佳培养基为１／４ＤＲ＋０．０６
ｍｇ／Ｌ　ＺＴ＋０．０２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ。
图３　羊踯躅再生芽苗生根培养的形态观察
ａ．出现侧根；ｂ．附加ＧＡ３后增殖培养
Ｆｉｇ．３　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｏｆ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ　ａｔ　ｖａｒｉｏｕｓ
ａ．Ｌａｔｅｒａｌ　ｒｏｏｔｓ　ａｐｐｅａｒｅｄ；ｂ．Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗｉｔｈ　ＧＡ３
　　在改良的生根培养基（１／４ＤＲ＋０．０６ｍｇ／Ｌ
ＺＴ＋０．０２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋１．００ｍｇ／Ｌ　ＧＡ３）上培养
２８ｄ后发现，羊踯躅每节段平均增殖５倍以上（图
３ｂ）。
３　结论与讨论
本研究成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、
再分化芽苗的培养体系和植株高效再生体系。培养
基１／２ＤＲ＋２．４０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ＋０．８０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ对
羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的效果最好，当２ｉｐ和
ＮＡＡ质量浓度分别超过２．４０和０．８０ｍｇ／Ｌ时，诱
导的愈伤组织颜色变白且质地变松软而失去分化能
力；当二者质量浓度分别低于１．８０和０．１０ｍｇ／Ｌ
时，愈伤组织诱导率均低于４８．０％。在１／２ＤＲ培
３９１第６期 顾地周 ，等：羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究
养基中附加２．９０ｍｇ／Ｌ　２ｉｐ、０．０１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ 和
１．７５ｍｇ／Ｌ　ＫＴ时，其对羊踯躅嫩叶愈伤组织再分
化的效果最佳，２ｉｐ质量浓度低于２．００和高于２．９０
ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织芽苗分化率均下降至５０．０％以
下，说明低质量浓度的２ｉｐ满足不了羊踯躅愈伤组
织芽苗分化的需要，而过多的２ｉｐ对愈伤组织芽苗
的分化有抑制作用。在培养基中添加适量的ＮＡＡ
有利于芽苗的生长。在培养基中附加１．７５ｍｇ／Ｌ
的ＫＴ，分化的芽苗较未附加ＫＴ时粗壮、长势好且
分化速度快，这与姜云天等［１３］对杜鹃花科植物细叶
杜香的快繁研究结果相似，说明每种植物对不同植
物生长调节物质均具有选择性［１４］，这是由植物自身
的基因型控制的，而基因型又决定于器官重建。添
加有０．０６ｍｇ／Ｌ　ＺＴ和０．０２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的１／４ＤＲ
培养基，适合用于羊踯躅芽苗的生根培养，当ＮＡＡ
质量浓度低于０．０２ｍｇ／Ｌ时，芽苗几乎不生根，高
于０．２０ｍｇ／Ｌ时，芽苗基部膨胀或产生愈伤组织，
继续培养，根则从膨胀部或愈伤组织上产生，这样的
苗在移栽时根易随愈伤组织从苗基部脱落，移栽成
活率极低，这与Ｄａｎｉｅｌｅ等［１５］的研究结果一致，可
能是根和苗茎部的纤维疏导组织连接错位所致；而
在生根培养基中附加１．００ｍｇ／Ｌ的ＧＡ３ 有助于腋
芽快速萌发和生长［１６］，有利于缩短生长周期，从而
提高了增殖倍数。王雯雯等［１７］在大字杜鹃的快繁
研究中也得到了相同结果。
目前，国外有许多野生杜鹃优良品种已通过人
工繁殖并驯化为园艺栽培种，我国野生杜鹃品种众
多，但人工繁殖及开发利用极少。羊踯躅是我国的
珍稀植物资源，至今尚未见推广应用，因此本研究结
果可为羊踯躅和其他野生杜鹃优良品种的开发利用
和工厂化育苗提供参考。
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４９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４０卷
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
）
（上接第１９４页）
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００２ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４０卷