全 文 ：药物鉴定 2 0 0 6 年第 15 卷第 15 期
白花丹参中丹酚酸 B 等成分的图谱鉴别及含量测定
张红波 ’ ,郭 凯 2 ,任启明 `
( 1
. 山东省莱芜市药品检验所 , 山东 莱芜 27 n 0 ;0 2 . 山东省莱芜市人民医院麻醉科 , 山东 莱芜 2 71 10 0)
摘要 : 目的 测定主产于山 东莱芜的 白花丹参中丹酚酸 B 等成分 , 以使之得 以 推广使用 。 方法 采用高效液相色谱法 , 色谱柱 为 H yP e sr il
B D s
一
e
,: 柱 (2 5 0 m m x 4 m m , 5 林m ) , 流动相为 甲醉 一 乙睛 一 水 一 36 % 乙酸 (3 3 : 12 : 55 : 0 . 8 ) , 流速为 一 0 m L / m i n ,检钡j波长为 2 50 n m ,柱
温为室温 。结果 样品的回收率高 ,含量高于 3 . 0% 。结论 白花丹参的指纹图谱与药典中紫花丹参的指纹图谱基本一致 , 可以作为丹参的来源 。
关键词 : 白花丹参 ; 紫花丹参 ;丹酚酸 ;B 高效液相色谱法
中图分类号 : 2R 8 4 . 1 ; 2R 82 . 7 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1 006 一 4 93 1 (20 06 ) 15 一 0 04 6 一 0 1
白花丹参来源为唇形科植物丹参 as 俪。 m ilt io hr ha B un ge af lb 。 精密度试验 : 精密吸取和庄乡产丹参样品 (批号为 2 00 4 1 007)
C
.
Y
.
W
u et H
.
W iL 的干燥根及根茎 , 主产于山东的莱芜 、泰安 、临 溶液 10 林L ,按上述色谱条件重复进样 6 次 , 测得丹酚酸 B 的峰面
沂 , 以莱芜产量最大 (仅和庄 1个乡的年产量就在 20 吨以上 ) 。 2 002 积 尺SD 为 0 . 38 % 。
年版 《山东省中药材标准》规定了其脂溶性成分丹参酮 n A 的含量测 稳定性试验 : 精密吸取对照品溶液 10 协L , 按照上述色谱条件 ,
定法 川 , 但因其为丹参的变种而未被 《中国药典 》收载 , 销售困难 。笔 每隔 l h 进样 1次 , 连续测定 10 次 。结果表明样品在 s h 内稳定 ,
者采用高效液相色谱法 (H P L C 法 )测定了其水溶性成分丹酚酸 B R SD 二 0 . 犯% 。
的含量并与紫花丹参药材作对照 , 证明了二者所含成分相同 , 且 重现性试验 :取和庄乡产丹参样品 , 按上述供试品溶液的制备
H P LC 法准确 、简便 、易行 。 方法平行制备 5 份溶液 ,进样测定 。结果的 RSD 为 0 . 87 % 。
1 仪器与试药 加样回收试验 :取和庄乡产丹参样品 (批号为 2 0 04 1 00 7) 5 份 ,
H PI 10 型高效液相色谱系统 (美国 A isl en )t , 包括 1G 3 12 A 二
元泵 , 1G 3 15 A 光电二极管阵列检测器 , H P Che m st iat on 色谱数据工
作站 ; A E 2 4 O型电子分析天平 。丹参样品 (从市场购得 ) , 丹酚酸 B 对
照品 (批号为 1 1 1 5 6 2 一 2 0 030 2) 和紫花丹参对照药材 (批号为 9 23 -
2 0 0 0 06) 均由中国药品生物制品检定所提供 ; 乙睛 、 甲醇为色谱纯 ;
水为重蒸馏水 ;其他试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : Hy p e sr il B D s 一 e : : 柱 (2 5 0 nu x 4 m m , 5 协m ) : 流动相 :
甲醇 一 乙睛 一水 一 3 6% 乙酸 (3 3 : 12 : 5 5 : 0 . 8 ) ;流速 : 1 . 0 m L / m in ;
检测波长 : 280 n m ;柱温 : 室温 ;进样量 : 10 卜L 。理论塔板数按丹酚酸
B 计算不低于 3 5 0 。在此色谱条件下的色谱图见图 1 。
枷 俪一 t / m i n L es - 一以一 - 占- -= 七1 0 20 10 2 0公/ m i n 名/ m i nA . 供试品溶液 B .图 1 B1 . 丹酚酸 B对照药材溶液高效液相 色谱图 C , 对照品溶液
2
.
2 溶液配制
精密称取丹酚酸 B 对照品 2 . 52 m g ,置 10 m L 量瓶中 ,用水定容至
刻度 , 摇匀 ,作为对照品溶液。取紫花丹参对照药材 (过 3 号筛 )0 . 2 9 ,
精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,加人水 巧 m L ,称定 ,超声处理 30 m in ,放
冷 ,再称质量 , 用水补足减失的质量 ,摇匀 ,过 0 . 45 卜m 的微孔滤膜 ,
取续滤液 , 即得对照药材溶液 。取白花丹参粉末 (批号为 20 04 10 07 ,
过 3 号筛 )0 . 2 9 ,按对照药材溶液的制法制成供试品溶液 。
2
.
3 方法学考察
线性关系考察 :精密吸取对照品溶液 2 , 5 , 10 , 巧 , 20 , 25 卜L , 注
人液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰面积 , 以峰面积积分值为纵
坐标 、丹酚酸 B 进样量为横坐标绘制标准曲线 ,计算出回归方程
Y = 一 6 . 12 7 x 10 4 X + 8
.
4 3 5 x 1 0 ,
, r = 0
.
99 9 7
。结果表明丹 酚酸 B
进样量在 0 . 5 2 ~ 5 . 36 林g 范围内与峰面积积分值的线性关系良好 。
每份 0 . 05 9 ,精密称 表 1 丹酚酸加样回收试验结果 ( 。 二 6)
定 , 置 50 m L 锥形瓶 松转蜿) 加入量(闭 衅创阉 毗荆%) 到%) sDR %( )
中 , 加 人 浓 度 为 。· 421 0 292 0· 708 98· 3
0
·
2 0 3 2 m g / m L 对照 0 · 42 1 0 J 286 0 702 98 . 3
品溶液 g m L , 按 2 . 2 0滩21 0 1 412 0· 825 98 · 1 95 . 4 0 . 4
项下对照药材制备方 04 21 04 24 。· 83 98 3
法中自“ 加水 15 m L ” 0· 42 1 0· 675 1 . 091 99 . 3
起操作。结果见表 l 。 0· 421 。· 689 1· 103 99· 0
2
.
4 样品含量测定
分别取 6 批样品 (批号为和庄乡 20 04 1 0 0 7 , 2 0 050 2 1 6 , 见马乡
200 5 0 4 1 1
,
2 0 0 505 1 3
,苗山镇 20 05 0 7 2 4 , 2 00 5 10 15 ) ,依法制成供试品
溶液 ,精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 林L , 分别注人液相色
谱仪 ,依照上述色谱条件测定峰面积 ,按外标法计算丹酚酸 B 的含
量 , 结果分别为 3 . 8% , 4 . 6% , 4 . 5% , 4 . 8% , 4 . 3% , 4 . 7% 。
3 讨论
3
.
1 试验中也曾采用了 2005 年版《中国药典 (一部 ) 》中丹参项下
丹酚酸 B 测定中的色谱条件 「2 , ,但由于样品成分较多 , 分离度差 ,
经调整改用文中所述方法 ,结果色谱峰分离度好 。
3
.
2 试验中同时测定了白花丹参样品中丹参酮 1 * 的含量 。丹参酮
压和丹酚酸 B 的含量均高于 2 0 05 年版《中国药典 (一部 )》中的规定。
3
.
3 制备样品时 ,溶剂的提取曾分别采用过甲醇煮沸 1 . s h 提
取 、水煮沸 1. s h 提取 、 甲醇超声 l h 提取 、水超声 l h 提取 4 种方
法 3l[ , 比较 4 份样品的峰面积 , 结果以采用水超声的方法最好 。
3
.
4 曾分别加入 5 倍量 、 10 倍量 、 巧 倍量 ( g / m )L 的水作为提取
溶剂进行提取 ,最后确定用 巧 倍量溶剂 。
参考文献 :
【1 山 东省药品监督管理局 . 山 东省中药材标准【M ] . 山 东 : 山 东友谊 出版
社 , 2 0 0 2 : 6 6 .
「2] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 (一部 ) 【M ] . 北京 : 化学工 业出
版社 , 20 0 5 : 5 2 .
【31 国家中医药管理局 . 中华本草 (第 7 册 ) 【M I . 上海 : 上海科学技术出版
社 , 19 9 9 : 16 9 .
(收稿 日期 : 2 00 5 一 12 一 19 ;修回 日期 : 20 06 一 0 2 一 2 8 )
4 6 中国药业 hc in a hP a rj ” a ce “谕 a 扮