全 文 ：白花丹参总丹参酮抗血栓闭塞性脉管炎的实验研究
朱海林1，张大伟2，孙隆儒1* ，程艳娜1，吴 凯2
( 1. 山东大学药学院，山东 济南 250012; 2. 山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011)
摘要 目的:探讨白花丹参总丹参酮对血栓闭塞性脉管炎大鼠模型的治疗作用。方法: 应用 LC /UV /MS 对白
花丹参总丹参酮的主要成分定性分析。采用大鼠股动脉注射月桂酸溶液造成血栓闭塞性脉管炎模型，观察用药前
后大鼠的体征、病理变化以及血清中 TXB2、6-K-PGF1α、ET含量。结果:白花丹参总丹参酮类化合物能明显减轻模
型大鼠患肢病变程度和范围，减轻炎症反应，减少血管内血栓形成范围，并能降低血清中 TXB2、ET 含量，升高 6-K-
PGF1α含量。结论:白花丹参总丹参酮对血栓闭塞性脉炎大鼠模型具有较好的治疗作用，其作用机理与增强血管的
抗血栓功能，减轻血管壁炎症反应有关。
关键词 血栓闭塞性脉管炎;白花丹参;总丹参酮;血栓素;内皮素
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 05-0780-04
收稿日期: 2011-09-28
基金项目:山东省自然科学基金( 2009ZRB019UX)
作者简介:朱海林( 1986-) ，女，在读硕士研究生，主要从事中药及天然药物活性成分的研究; Tel: 18764168368，E-mail: hailin8609 @
126. com。
* 通讯作者:孙隆儒，Tel: 0531-88382012，E-mail: sunlr@ sdu. edu. cn。
血栓闭塞性脉管炎( Throm Boangitiso Bliterans，
TAO) 是一种特发的、非动脉粥样硬化性、阻塞性周
围血管疾病，主要累及肢体中小动脉和静脉，以下肢
多见。其临床特点为患肢皮肤发凉、间歇性跛行，严
重者有肢端溃疡或坏死，是我国慢性周围血管病中
较常见的病种。白花丹参( Salvia miltiorrhiza Bunge
f. alba) 是唇形科植物丹参的变型，主产于山东，根
入药。除具有丹参的作用和用途外，临床发现白花
丹参对治疗 TAO具有独特疗效〔1〕，为了探讨白花丹
参治疗 TAO的有效物质及其机理，本文从体征、病
理变化及血清中 TXB2、6-K-PGF1α、ET 等方面观察
了白花丹参总丹参酮对 TAO大鼠模型的影响。
1 材料
1. 1 实验动物 Wistar 雄性大白鼠 60 只，体质量
280 ～ 300 g，由山东大学实验动物中心提供。
1. 2 药品与试剂 白花丹参总丹参酮提取物( 由
本实验室制备) 、LCMS-2020 色谱仪( 岛津公司) 、乙
腈( 色谱纯) 、冰乙酸( 分析纯) 、通塞脉片( 江苏南星
药业有限责任公司) ，批号: Z32020535、月桂酸 ( 国
药集团化学试剂有限公司) ，批号: F200909284; 血
栓素 B2、6-酮-前列腺素 F1α、ET 酶免试剂盒( RD 公
司) ，批号: 20110501A。
1. 3 LC /UV /MS图谱的获取 取白花丹参总丹
参酮提取物约 5 mg，精密称定，置 5 mL 容量瓶中，
甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过即得。参照文
献〔2〕采用 Agilent Eclipse XDB-C18柱( 250 mm × 4. 6
mm i. d，5 μm) 色谱柱; 以乙腈为流动相 A 相，以
0. 1%乙酸水溶液为流动相 B。线性梯度洗脱时间
程序为 0 min，20%A; 20 min，60%A; 50 min，80%A;
流速 0. 8 mL /min; UV 检测波长 270 nm; 进样量 10
μL。
2 方法
2. 1 造模与分组 60 只大鼠随机为假手术组( 6
只) 、模型组( 10 只) 、通塞脉片阳性对照组( 10 只) 、
白花丹参高剂量组( 11 只) 、中剂量组( 12 只) 和低
剂量组( 11 只) 。参照文献方法〔3〕稍加改进，制作
TAO模型:将大鼠用 10%水合氯醛 3 mL /kg 腹腔注
射麻醉，右下肢股内侧剪毛。酒精皮肤消毒，纵行切
开约 1. 5 cm切口，游离股动脉，用动脉夹阻断血流，
假手术组于动脉夹下方远心端注入 0. 2 mL 生理盐
水，其余大鼠注入 0. 2 mL月桂酸。各组均于注射月
桂酸后 15 min 去掉动脉夹，缝合皮肤，观察结果。
各组均于手术前灌胃给药，通塞脉片对照组给通塞
脉片 0. 66 g /kg，高剂量组给白花丹参总丹参酮提取
物 40 g /kg( 相当于生药浓度) ，中剂量组给白花丹
参总丹参酮提取物 20 g /kg，低剂量组给白花丹参总
丹参酮提取物 10 g /kg。假手术组和模型组均给予
等容量羧甲基纤维素钠溶液，1 次 /d，连续 1 w。
2. 2 大鼠体征变化 大体观察大鼠患肢皮肤颜
色、温度、患肢有无肿胀、有无坏疽及坏疽的程度、跛
行状况。参照王军等〔4〕采用的分级标准分级，Ⅰ
级:病变局限于趾甲部; Ⅱ级: 病变局限于趾部; Ⅲ
级:病变局限于足爪部; Ⅴ级: 病变局限于膝关节以
下; V级:病变发展到膝关节以上。
2. 3 常规病理标本的制备 全部送检的截肢标本
解剖出月桂酸注射处以下部位的动脉、静脉主干，
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.05.016
4%多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片、常规 HE 染色，
观察血管平滑肌、纤维组织病变情况。同时分别对
动脉壁炎性细胞浸润、纤维增生等情况进行观察。
2. 4 血浆 TXB2、6-K-PGF1α、ET检测 采用酶联免
疫法测定，具体步骤参照说明书。
2. 5 统计学处理 实验数据用 珋x ± s 表示，计数等
级资料采用秩和检验，计量资料采用 SPSS 17. 0 软
件进行单因素方差分析处理。
3 结果
3. 1 白花丹参总丹参酮 LC /UV /MS 图谱获取
按“1. 3”项下色谱条件，对白花丹参总丹参酮的主
要成分进行分析，所得到紫外吸收色谱图( 图 1-A)
与总离子流色谱图( 图 1-B) 基本吻合。应用 ESI-MS
技术，对总离子流色谱图中的各色谱峰经质谱扫描后
得到一级质谱图，按各色谱峰的质谱图与文献核
对〔5〕，对相应的化合物进行了结构推测，结果见表 1。
图 1 白花丹参总丹参酮液质联用色谱图
A. 紫外吸收色谱图 B. 总离子流色谱图
表 1 白花丹参总丹参酮提取物中
9 种化合物一级质谱信息
NO tR /min
［M + H］+ /
( m/z) 推测物质
〔5〕
1 27. 50 279 15，16-二氢丹参酮 I
2 27. 84 297 1-oxomiltirone
3 29. 30 281 trijuganone B
4 29. 80 339 未知
5 33. 93 297 隐丹参酮
6 34. 74 277 丹参酮 I
7 38. 11 279 1，2-二氢丹参酮 I
8 43. 43 295 丹参酮 IIA
9 45. 92 283 次丹参酮
3. 2 体征变化 大鼠经股动脉注入月桂酸造模
后，各鼠患肢皮肤温度降低，约 5 min 后足爪部开始
出现不同程度的苍白，肿胀。次日造模成功的大鼠
均出现造模肢体缺血表现、跛行或拖曳现象、肢体青
紫颜色加深并逐渐向上发展。一周内有部分大鼠出
现肢端糜烂、溃疡及炎症反应，有脓液渗出，恶臭味，
少数大鼠出现患侧坏疽部分脱落，患肢的胫后肌群
出现严重坏死。模型组的病变最严重，通塞脉片组
与中、高剂量给药组的病变最轻，与模型组比较有显
著性差异( P ＜ 0. 05 ) ，低剂量组与模型组比较没有
显著性差异，见表 2。
3. 3 病理学观察结果 假手术组股动脉均呈通畅
状态，内膜光滑完整，无剥离和脱落现象，血管内无
血栓形成，无炎性细胞浸润; TAO 模型大鼠股动脉
内均有不同程度的血栓形成。对于模型组，在低倍
镜下观察，表现为动脉壁增厚，动脉管腔内发生血栓
性闭塞，未见再通，内膜大部分脱落，外膜炎性细胞
浸润较其他组别明显，伴行静脉内亦有血栓形成; 在
高倍镜下观察，内皮细胞部分发生水肿、变性、坏死或
脱失。通塞脉片组与中、高剂量给药组的血栓范围均
减少，管腔较规则，血管及周围组织少量炎性细胞的
浸润，炎症反应减轻。低剂量组动脉壁增厚，炎性细
胞浸润及血栓形成较严重，效果不明显。见图 2。
表 2 白花丹参总丹参酮对 TAO大鼠局部体征变化的影响
组别 n /只 剂量 /( g /kg)
病变分级
0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
假手术组 6 － 6 0 0 0 0 0*
模型组 10 － 0 1 2 2 5 0
通塞脉片组 10 0. 66 4 2 3 1 0 0*
白花丹参总丹参酮高剂量组 11 40 6 3 1 1 0 0*
白花丹参总丹参酮中剂量组 12 20 5 4 2 1 0 0*
白花丹参总丹参酮低剂量组 11 10 1 1 1 4 4 0
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05
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图 2 白花丹参总丹参酮对血栓闭塞性脉管炎大鼠组织病理学的影响( HE，×200)
A. 假手术组 B. 模型组 C. 通塞脉片组 D. 白花丹参总丹参酮高剂量组
E. 白花丹参总丹参酮中剂量组 F. 白花丹参总丹参酮白花丹参低剂量组
3. 4 对 TAO 大鼠血清 TXB2、6-K-PGF1α、ET 的影
响 与假手术组比较，模型组血清中 6-K-PGF1α含量
降低，TXB2、ET 显著升高( P ＜ 0. 05 ) ; 与模型组相
比，通塞脉片组及白花丹参总丹参酮高、中剂量组
6-K-PGF1α含量显著升高，TXB2、ET含量与模型组降
低( P ＜ 0. 05) 。低剂量组 TXB2 含量显著降低( P ＜
0. 05) ，但 6-K-PGF1α及 ET 的含量改变不明显。见
表 3。
表 3 白花丹参总丹参酮对 TAO大鼠血清 TXB2、6-K-PGF1α、ET的影响
组别 n /只 剂量 /( g /kg)
TXB2 /
( pg /mL)
6-K-PGF1α
( pg /mL)
ET /
( pg /mL)
假手术组 6 － 218. 99 ± 47. 09* 454. 24 ± 62. 94* 12. 02 ± 1. 56*
模型组 10 － 424. 19 ± 101. 13 267. 14 ± 88. 49 28. 96 ± 20. 11
通塞脉片组 10 0. 66 254. 86 ± 38. 74* 361. 50 ± 79. 44* 16. 71 ± 3. 06
白花丹参总丹参酮高剂量组 11 40 244. 12 ± 53. 66* 397. 42 ± 70. 10* 15. 8 ± 1. 84*
白花丹参总丹参酮中剂量组 12 20 250. 49 ± 74. 72* 366. 31 ± 110. 82* 17. 01 ± 2. 69*
白花丹参总丹参酮低剂量组 11 10 324. 11 ± 57. 02* 296. 64 ± 46. 32 20. 61 ± 4. 82
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05
4 讨论
目前，TAO 的发病机制尚未完全阐明，但血管
内皮细胞( Vascular Endothelial Cell，VEC) 功能受损
是其重要的一个方面〔6〕。内皮素 ET、血栓素 TXA2
及前列环素 PGI2 等是由 VEC 直接合成分泌或经
VEC转化的生物活性物质，这些物质与血栓的形成
密切相关〔7〕。丹参酮对心血管系统具有广泛的作
用，主要表现为对血管内皮细胞的保护作用。体内
外实验证明，丹参酮具有抑制炎症的作用，这种作用
可能与丹参酮抑制炎症细胞内细胞因子的产生有
关，同时与抑制花生四烯酸的代谢也有关系〔8〕。丹
参酮ⅡA 可降低全血血小板粘附分子 CD41 和
CD62P的表达，从而起到抗血栓形成和血小板聚集
的作用〔9〕。本实验研究发现造模后均有不同程度
的血栓形成，TXB2、ET 含量显著升高，6-K-PGF1α含
量降低。TXA2、PGI2 系统的失衡及 ET 含量的升高
加重和促进了 TAO的形成和发展，这些因子既反应
血小板的聚集情况，更可反应血管内皮的抗血栓功
能。造模大鼠经白花丹参总丹参酮治疗后，中、高剂
量组与模型组比较，血清中 6-K-PGF1α含量显著升
高，TXB2、ET含量降低，炎症反应减轻，体征变化改
善，血栓范围减少，表明对大鼠的血栓闭塞性脉管炎
具有一定的治疗作用。其作用机理与改善血管的抗
血栓功能、对血管内皮细胞的保护作用有关，为白花
丹参治疗血栓闭塞性脉管炎的临床应用提供实验依
据。
参 考 文 献
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闭塞性脉管炎模型的治疗作用［J］. 中药材，2008，31
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金钮扣止咳、化痰及平喘作用的研究
冯承恩1，黄庆芳1，房志坚1* ，梅全喜2
( 1. 广东药学院中山校区，广东 中山 528458; 2. 广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山 528400)
摘要 目的:研究金钮扣水提物及醇提物止咳、化痰及平喘作用。方法: 采用豚鼠枸橼酸引咳法、小鼠气管酚
红法、豚鼠组胺和乙酰胆碱致喘法，观察金纽扣水、醇提物低、中、高剂量( 4. 28、8. 56、17. 12 g /kg) 的止咳、化痰及平
喘作用。结果:水提物高剂量和醇提物中、高剂量均能延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数。水和醇提物中、高剂量均
能增加酚红分泌量。在平喘实验中，水、醇提物各剂量组的哮喘潜伏期与空白对照组比较，差异无统计学意义( P ＞
0. 05) 。结论:金纽扣水、醇提取物具有止咳和化痰疗效，均无平喘作用，但醇提取物止咳和化痰疗效优于水提取
物。
关键词 金钮扣;水茄;止咳;化痰;平喘
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 05-0783-03
收稿日期: 2011-09-21
基金项目:中山市华南现代中药城( 健康医药产业基地) 专项发展基金( 2007J2007)
作者简介:冯承恩( 1978-) ，女，硕士，实验师，主要从事药理学研究; Tel: 13711295657，E-mail: cefeng2006@ 126. com。
* 通讯作者:房志坚，E-mail: jian139@ tom. com。
金钮扣，别名一面针、山颠茄、刺茄或者小登
茄〔1〕。来源于茄科植物水茄( Solanum torvum Swar-
tz) 的干燥茎及根，有活血、散瘀、消肿、通经、止咳、
止痛等功效，该药味辛、性微凉，有小毒〔2〕。近年
来，金钮扣的研究主要集中在化学成分上，而对呼吸
系统方面的研究尚未见报道。本研究主要对金钮扣
进行止咳、化痰和平喘作用的药理研究，为临床应用
及合理开发资源利用提供依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 昆明小鼠及豚鼠，购自南方医科
大学实验动物中心，许可证号: SCXK ( 粤 ) 2006-
0015。由广州中医药大学中山附属医院动物实验室
饲养，室内温度控制在( 20 ± 2) ℃，湿度为 60%。
1. 2 药物 金钮扣由广东益和堂生产提供，经田
素英副教授鉴别为水茄的干燥茎; 取其茎部用蒸馏
水和 95%乙醇分别回流提取;浓缩得水提取物 90. 0
g( 提取率 6. 13% ) 及醇提取物 151. 5 g ( 提取率
5. 99% ) ，4 ℃下保存备用;氢溴酸右美沙芬片，广州
白云山光华制药股份有限公司，批号: 20100620; 氯
化铵，呼和浩特制药厂，批号: 20100112; 氨茶碱，天
津力生制药有限公司，批号: 061001; 其余所用试剂
均为分析纯。
1. 3 主要仪器 YLS-8A多功能诱咳引喘仪( 山东
省医学科学院设备站) ; UV1102 紫外 /可见分光光
度计( 上海天美科学仪器有限公司) 。
2 方法
2. 1 对豚鼠枸橼酸引咳的影响〔3〕筛选豚鼠 取体
质量 150 ～ 200 g 的豚鼠，置于诱咳引喘仪中，喷雾
17. 5%枸橼酸 1 min，以豚鼠出现响亮的咳嗽声为标
准，记录 5 min 内豚鼠的咳嗽次数，次数多于 10 次
的豚鼠为合格动物用于实验。取合格豚鼠 80 只，雌
雄各半，随机分为 8 组，每组 10 只，即对照组( 生理
·387·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 5 期 2012 年 5 月