全 文 ：中国药师 0 25年第 8卷第 1期 9 7 0
40g m
·
L
一 ’ ,在上述选择的电泳条件下测定 , 以冬凌草甲素
的峰面积与内标峰面积的比值 ( Y ) 与对照品浓度 ( x , m g’
L
一 ’ )进行线性回归得回归方程 : Y 二 5 . 0 12 x lo 一 ’ X + 0 . 0 3 ,
r = 0
. 卯9 1 ,线性范围为 5 0 一 40 m g · L 一 ’ 。
l上 l从让0 2 4 6一乙 0 2 4 6 5
1
. 冬凌草甲素 2 . 苯甲酸 ( 内标 )
A
. 冬凌草甲素对照品 + 内标 B . 样品
图 1 冬凌草甲紊对照品 、 内标与样品的电泳图
2
.
4 重复性试验
精密吸取供试品溶液 ,平行进样 6 次 ,将峰面积代入回
归方程 , 测得含量 尺SD 二 3 . 13 % ( n 二 6 ) 。
2
.
5 稳定性试验
取供试品溶液放置 1 , 2 , 4 , 8 , 24 h ,分别测定含量 (尺5刀
二
2
.
4 3% )
。
2
.
6 加样回收试验
将冬凌草甲素对照品分别加人到已知含量的冬凌草样
品溶液中 ,按 “ 2 . 2 . 3 ” 项下方法制备 , 测定回收率 ,结果平均
回收率为9 . 5% , RS 刀 3 . 9% 。
2
.
7 样品测定
照 “ 2 . 2 . 3 ” 项下制备 , 按拟定方法用内标法计算出样品
中冬凌草甲素的含量 , 结果见表 1 。
表 1 样品中冬凌革甲紊的含t 测定结果 ( m澎片 )
编号 冬凌草甲素含量 平均含量
1 3
.
3 0 1
2 2
.
9 32 3
.
11 8
3 3
.
1 20
3 讨论
3
.
1 缓冲溶液浓度时分离的影响
缓冲溶液的浓度不仅影响毛细管内表面的 ez at 电势 ,
还影响溶液的粘度系数及分析物的扩散系数 ,最终影响分析
物的分辨率和迁移时间 。 改变磷酸盐缓冲溶液的浓度使其
依次为 20 , 30 , 40 m m o l . L 一 ` ,当缓冲液浓度增加时 ,电流增
加 ,焦耳热增加 ,使基线不稳 ,选最佳浓度为 20 m m ol · L 一 ’ 。
3
.
2 缓冲液 p H 的影响
改变磷酸盐缓冲液 ( 2 0 m m ol · L 一 ’ ) 的 p H 值 ( 6 . 0 , 8 . 0 ,
10
.
0 )
,当 pH 值为6 . 0时 ,冬凌草甲素与周围峰不能完全分
离 ;当 p H 大于8 . 0时 ,冬凌草甲素峰与内标峰及其后小峰重
叠 ,综合考虑 ,最佳 p H值为8 . 0 。
3
.
3 运行电压对分离的影响
考察不同的运行电压 (巧 , 18 , 25 kV )对分离的影响 ,发
现当电压为 18 kV 时 ,分离效果最佳 ,故选择运行电压为 18
k V
。
3
.
4 提取所选溶剂为乙醚 ,这是考虑到制剂中的有效成分
冬凌草甲素在乙醚中有较好的溶解度 ,提取后的乙醚又易除
去川 ,再者用乙醚提出的杂质少 。 本实验中 ,作者曾用 20
mm ol
·
L
一 ’磷酸盐为缓冲液 ,纯甲醇溶解样品 ,上机测定 ,结
果冬凌草甲素不出峰 , 可能是由于冬凌草甲素是脂溶性药
物 ,在进人毛细管时 ,析出结晶 ; 故将磷酸盐缓冲盐中加人
10% 甲醇 ,样品用甲醇 一水 ( :9 1) 溶解 ,结果较满意。
参 考 文 献
鲁彦毫 ,吴卫新 , 白丽 . H LP C 法测定冬凌草片中冬凌草甲素的含盆【J j .
中国药事 , 2X() l , 15 ( l ) : 4 7
冀春茹 ,冯卫生 ,胡润淮 ,等 . H p鱿 法测定冬凌草掂片中冬凌草甲素的含
量仁J J . 中国现代应用药学杂志 , 19 99 , l6( 5 ) : 35
袁坷 ,胡润淮 , 张庆岭 , 等 . 冬凌草不同提取工艺的研究 【J〕. 中草药 ,
19 7
, 28 ( 7 )
:
4() 5
( 2以” 一 10 2 2 收稿 2加5扔功 修回 )
高效液相色谱法测定复方六月雪颗粒中齐墩果酸的含量
李江 (桂林医学院附属医院药剂科 广西桂林 541 0 1) 张士军 黄忠仕 蒋伟哲 林军 黄仁彬 (广西 医科
大学药理 学教研 室 )
摘 要 目的 : 建立高效液相色谱法测定复方六月雪颗拉中齐墩果酸含童的方法 。 方法 : 色语柱为 sy m et ry C l ,柱 , 流 动相
为甲醉一乙睛一水一冰醋酸 ( 72 : 13 : 巧 : 0 . 4 ) , 检测波长为 21 0 n m 。 结果 : 线性范围0 . 21 一 6 . 39 哪 , r 二 0 . 9 9 8 。 平均加样回收率
10 1
.
5%
, 双5刀 二 3 . 2% ( n 二 6 ) 。 结论 : 方法 简便 ,灵敏 、 准确 , 建立的方法可用于复方六 月雪顺拉的质量控制 。
关键词 高效液相色谙法 ; 齐墩果酸 ; 复方六月雪颖拉 ;含量浏定
中图分类号 : 9R 27 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8 ( 岭g X (2X() 5 ) n ( 四0 7习3
决et n . i n a t i o n o f o le a n o il e A ic d in C o m po un d L i u y u e x u e G r a n u le s by B P L C
U Jian g ( D
e part m
e n t o f hP amr
a e y
,
ht e A if li a ted H
o s p i回 Of G u il in M e d i e al COl e ge , uG i li n , uG an gx i 5 4 1加 l , P . R . C h i n a ) ; Zhan g
基金项目 :广西科学研究与技术开发项目 (项目编号桂科攻 03 2 0 24 一 l)
作者简介 :李江 ( 19 70 一 ) ,男 ,四川金堂人 , 主管药师 , 硕士学位 , 主要从事中药新药研制研发和医院药学的研究工作。 eT l : ( 07 73 ) 2 8 825 肠
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o lO群 , uG a l l gx i Mde i e al U n iv e sr i ty )
A B ST R A C T O句ce 柱v e : OT e s abt li s h a H P忧 met hdo fo r e o n t e n t d e temr in at i o n Of o le a n o li e ac id in e o m po u n d il u四 e xu e gr a n u le s
.
M e t b do
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0
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4 ) an d ht
e det e e t i o n w va
e le n加 w as 2 10 n m . R“ u lt : hT e l i n e ar anr g e w as 0 . 2 1石 . 3 9 卜 g ( r = 0 . 999 98 ) . hT e a v e r a g e er e o v e巧 w a s
10 1
.
5% (月5刀 = 3 . 2% ) . C on d us i o n : hT e me ht do 15 s im p l e a n d s e n s it iv e
.
I t
e a n
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e u s e d fo r th e q u al it y e o n t or l Of e o m卯 u n d li u yu e x -
u e gr a n u l e s
.
K E Y WO R D S H PCL
; o l e an
o li e a e i d : C o m卯 u dn li u y u e x u e g r a n u le s : C o n t e n t D e t e nur n a t io n
复方六月雪颗粒是本课题组根据广西民间验方开发研
制的一种纯中药复方制剂 , 由白花蛇舌草 、桅子花根 、 半枝
莲 、天胡姜 、垂盆草 、 六月雪等六味药材提取加工而成 ,具有
清热解毒 、 利湿退黄的功效 , 主要用于治疗急性黄疽性乙型
肝炎的湿热黄疽等证 。 根据目前资料 ,处方中的君药白花蛇
舌草和臣药桅子花根均含有治疗肝炎的有效成分一齐墩果
酸〔` 〕 ,故作者采用高效液相色谱法测定复方六月雪颗粒中的
齐墩果酸含量 ,作为该药品质量控制的指标。
, 仪器与试药
1
.
1 仪器
美国 W at e sr 1525 并联双泵 , w at e sr 24 87 双波长紫外检
测器 , w at e sr B er ez e 色谱工作站 , T U 一 18 0 sP C 紫外可见分
光光度计 (北京普析通用仪器公司 ) , F AZX( 又 电子天平 (上
海精密科学仪器有限公司 ) 。
1
.
2 试药
齐墩果酸对照品 ( 中国药品生物制品检定所 , 批号 : 07 09
一
98 03
,供含量测定用 ) , 乙睛 (天津四友 , 色谱纯 ) , 其余试
剂均为分析纯 ,所用药材购于南宁市药材公司 ,复方六月雪
颗粒 ( 20 岁袋 ) 由本课题组 自行制备。
2 方法与结果
2
.
1 色语条件
色谱柱 W aet sr s y m m e t叮 C : : ( 4 . 6 m m x 1 50 m m , 5 林m ) ;
流动相 : 甲醇一乙睛 一水一冰醋酸 ( 72 : 13 : 巧 : 0 . 4 ) , 检测波长
21 0
n m ;流速 1 . 0 耐 · m in 一 ’ ;柱温 35 ℃ 。 此条件下齐墩果酸
色谱峰的保留时间为 13 . 78 m in ,理论塔板数为 8 767 ,分离
度为 1 . 58 ,拖尾因子为0 . 91 。
2
.
2 线性 关系考察
精密称取齐墩果酸对照品适量用 甲醇溶解制成 1 . 06 5
m g 对照品溶液 。 精密量取对照品溶液 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 5 , 1 . 0 ,
2
.
0
,
3
.
o ml
,分别置于 10 耐 容量瓶中 , 甲醇定容摇匀 ,进样
20 闪测定 。 以进样量 ( X ,此 )对峰面积 ( Y )进行线性回归 。
回归方程为 : Y 二 3 . 85 x 10 , x 十 3 . 41 , ; = 0 . 9 9 8 ,线性范围
0
.
2 1 一 6
.
39 协g 。
2
.
3 复方六月雪颗拉供试品溶液的制备
取复方六月雪颗粒样品约 5 9 , 研细 ,精密称定 ,置烧瓶
内加 50 耐 无水乙醇水浴加热 90 一 95 ℃回流提取 l h ,过滤 ,
用 20 ml 无水乙醇洗涤容器和残渣 ,过滤后合并 ,滤液水浴
蒸干 ,用氯仿 50 血 和水 10 耐分次交替溶解转移至 25 0 耐
分液漏斗内 ,加人饱和氯化钠溶液 20 inl ,振荡萃取 10 m in ,
分取氯仿层 ,同法再用氯仿 20 ml 萃取提取 1 次 ,合并氯仿
液 ,用水萃取洗涤 2 次 ,每次 10 时 (每次另加饱和抓化钠溶
液 20 m l ) ,分取氯仿层 ,水浴蒸干 ,用流动相溶解后连残渣一
井转移至 25 inl 容量瓶中定容 ,振摇 30 m in 后过滤 ,取续滤
液过 0 . 45 林m 微孔滤膜后进样 20 闪测定峰面积 ,代人回归
方程计算齐墩果酸的进样量 ,换算成复方六月雪颗粒中齐墩
果酸的含量 。
2
.
4 方法的专一性考察
按处方制备不含白花蛇舌草 、桅子花根药材的阴性对照
样品 ,按 2 . 3 项下方法制备阴性对照溶液 ,分别取齐墩果酸
对照品溶液 、 复方六月雪颗粒供试品溶液和阴性对照溶液
20 闪进样测定色谱图 (如图 1 、 2 、 3 ) 。 结果表明 , 在齐墩果
酸出峰处 ( b 峰 ) ,阴性对照溶液对样品的测定无干扰 。
2
.
5 精密度试验
以同一对照品溶液重复进样 5 次 ,计算齐墩果酸峰面积
的人5刀为0 . 82 % ,表明仪器精密度良好。
苏`凶-a
灯m m
b
. 齐墩果酸 a , c . 未知成分
图 , 复方六月 , 顺粒供试品的 H P L C色谱圈
圈 2
12
.
5 18乃
口m in
齐墩果酸对照品的 HPCL 色谱图
艺Z一a
卜州寸ē c
6
.
9
圈 3
灯幻 l i n
阴性对服溶液的 HP LC色讲圈
2
.
6 稳定性试验
取同一供试品溶液分别在 0 , 1 , 2 , 4 , 6 , s h 进样测定 ,计
算齐墩果酸峰面积的 月5刀 为1 . 56 % ,表明供试品溶液在 s h
以内稳定 。
2
.
7 重复性试验
取同一批号样品 ,按 “ 2 . 3 ” 项下方法分别制备 5 份供试
液 ,依法测定 , 测得该批号样 品的齐墩果酸含量平均值为
0
.
13 6 8 m g
·
g
一 ’ 沐5刀 为3 . 30 % , 表明方法的重复性良好 。
中国药师0 25 年第 8卷第1 期90 9
2
.
8加样回收率试验
精密称定上述已知含量的同一批号样品 6份 (每份约5
g)
,分别精密加人已知浓度的齐墩果酸对照品溶液 ( 1 . 06 5 5
m g
·而 一 ’ )0 . 5 , 1 . 0 , 2 . 0 m l ,按 2 . 3 项下方法制备 , 进样 加 林l
测定峰面积 ,代入回归方程计算样品中的齐墩果酸含量 。
表 1 加样回收率试验结果 ( n 二 6)
编号 样品称量
( g )
样品含量 加人量
( mg )
测得量
( mg )
回收率
(% )
98
.
37
98
.
03
1 {巧 . 6 3
10 2
. 叭】
l tX】. 2 1
10 2
.
6 9
平均回收率
(% )
尺S D
( % )
5 03 29
5
,
0 154
5
.
0 17 5
5
.
024 1
5
.
0 132
5
.
0 1 83
0
.
5 33 1
.
2 13
0
.
5 33 1
.
20 8
1
.
(陌石 1 . 823
1
. 肠5 1 . 784
2
.
13 1 2
.
82 1
2
.
13 1 2
.
875
10 1
.
5 3
.
高 l ’ 倒 。 本文通过在流动相中加人乙睛来调整选择因子 ,通
过专一性考察验证了此流动相条件下阴性对照液在齐墩果
酸出峰处的干扰峰不再存在。 作者研究了甲醇 、 乙睛 、 水的
各种配比 ,如甲醇一乙睛 一水 ( 6:5 2 :0 巧 ) , 甲醇 一乙睛 一水 ( 7 :2 13
: 巧 ) , 甲醇 一乙睛一水 ( 7 :0 14 : 16) 等 , 通过色谱系统适用性参
数等分析 , 以甲醇一乙睛 一水 (7 2 : 13 : 巧 )较好 。
冰醋酸为离子抑制剂 ,可明显改善峰形 ,认为0 . 4% 的浓
度比较合适 。不仅可以显著改善峰形 , 且流动相的 P H 值在
3
.
6左右 ,符合 C I: 柱对流动相 P H 值的要求 。
在选择提取条件时 ,由于齐墩果酸为五环三菇类脂溶性
成分 ,在氯仿 、 乙醇中溶解性较好 ,但不溶于水 , 而辅料主要
为水溶性的蔗糖粉 , 由于齐墩果酸包裹在辅料中 ,脂溶性强
的溶剂很难从辅料中提取完全齐墩果酸 , 以无水乙醇的提取
结果稳定 ,重现性较好 。 同时也考察 了索氏提取 、超声提取
和加热回流提取的效果 ,而加热回流提取 hl 即可提取完全 ,
最终决定采用无水乙醇加热回流提取。 乙醇提取液原考虑
水浴蒸干后直接用流动相溶解进样 ,但结果发现色谱图中基
线受到的干扰非常大以至影响到对色谱峰的积分 ,因此必须
对样品进行纯化处理以减小杂质的干扰。 由于齐墩果酸在
氯仿中可溶而不溶于水 ,因此通过将乙醇提取液水浴蒸千后
用氯仿溶解 ,再用水萃取洗涤数次 , 以尽可能除去样品中的
水溶性杂质 ,减小干扰程度 。 从纯化处理后的效果来看 , 基
线受到的干扰基本消除 , 结果比较满意 。
丝68968
0
.
68 7
0
.
68 6
0
,
6 87
,.通,ù, 、4气6
2
.
9 样品的测定
按照上述方法进样 20 闪测定 5 批样品中齐墩果酸含
量 ,结果见表 2 。
表 2 样品测定结果
批号 齐墩果酸含量 ( m g’ g 一 ` )
0 3 09 0 8 0
.
1 32 1
0 3 10 2 5 0
.
14 6 2
0 3 120 2 0
.
14 5 8
以0 1 12 0 . 1 50 3
叫 0 30 6 0 . 1 39 2
3 讨论
以齐墩果酸对照品溶液在 19 0 一 4 X() n m 之间进行紫外
光谱扫描 ,齐墩果酸在 207 n m 处有最大吸收波长 ,但在 21 0
n m 以下 ,反相色谱中常用的流动相甲醇 、水和乙睛均存在吸
收干扰 , 因此文献中采用的检测波长二般多在 21 0 n m 以上 ,
考虑到 2 10 n m 最接近齐墩果酸的最大吸收波长 ,为增加检
测的灵敏度 , 本次研究决定采用 21 0 n m 为检测波长 。
目前大多数采用高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸
含量的实验研究没有进行专一性考察 , 因此测定结果严重偏
参 考 文 献
刘厚佳 ,胡晋红 ,孙莲娜 ,等 . 木瓜中齐墩果酸抗乙型肝炎病毒研究【J〕. 解
放军药学学报 , 2(X] 2 , 18 ( 5 ) : 27 2一 74
谢莹 ,杭太俊 ,程赞 ,等 . 高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸的
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王忠壮 ,陈淡 ,宋洪杰 ,等 . 太白嗯木中齐墩果酸的含量测定【J〕. 第二军医
大学学报 , 2X( 刃 , 2 1 ( 5 ) : 4 73 4 75
( 2X( 抖一 10 一 14 收稿 2X() 5拼一6 修回 )
山 麦 健 脾 口 服 液 总 有 机 酸 含 量 测 定
马彬 昌 ( 四川省皮肤病性病防治研究所 成都 61 0 31 ) 吴川彦 ( 成都市药品检验所 ) 胡兵 ( 武汉市药品检验
所 )
摘 要 目的 : 采用 离子交换层析法分离山麦健脾 口服液中的有机酸 , 用酸碱一电位滴定法浏定有机酸含童 。 方法 : 精密量取
样品5 . 0 耐 加至 73 2 型 阳离子交换树脂 (预先处理至中性 )用蒸馏水洗脱 , 流速 1 . o inl · m in 一 ’ , 收集洗脱液约 60 ml ,精密加入
氮氧化钠滴定液 ( 0 . 1 m ol · 1 一 ’ )巧 . o ml , 煮沸 5 m in 放冷至室温 , 照电位滴定法 , 盐酸滴定液滴定 ( 0 . 1 m of · L 一 ’ ) 。 结果 : 平均
回收率103 . 7% 沂 5刀 = 1 . 7% ( n 二 9 ) 。 结论 : 本方法准确 , 重复较好 。
关键词 有机酸 ; 离子 交换层析法 ; 山麦健脾 口服液
中图分类号 : 9R 27 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 10 8 ( 岭g X ( 20 5 ) 1 -() 9( 刃习3
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