全 文 ： 药品质量控制
高效液相色谱法测定
白花丹参中总丹参酮和丹参酮 ⅡA含量*
齐永秀1 ,李　香 2 ,万建建 2 ,曹明亮 1 ,高允生 1 ,夏作理 1
(泰山医学院 1.药学院;2. 2003级药学专升本班 ,泰安　271016)
[摘　要 ] 　目的　采用高效液相色谱 (H PLC)法对白花丹参总丹参酮和丹参酮Ⅱ A含量进行分析。方法　采用乙
醇超声提取法提取白花丹参中脂溶性成分 , HPLC法进行测定 , 色谱柱为W ate rs symm e try sh ieLd RP18(105 mm ×3. 9 mm ,
5 μm);测定总丹参酮以甲醇-水 (90： 10)为流动相 , 测定丹参酮 Ⅱ A 以乙腈-水 (75： 25)为流动相 , 流速均为
0. 8 m L m in-1;检测波长 270 nm。结果　总丹参酮在 0. 075 ～ 0. 750μg mL-1浓度内与峰面积线性关系良好 , 线性方程
为 A =5. 88×106C - 1. 99×105 , r=0. 999 4(n =5), 丹参酮Ⅱ A在 7. 5 ～ 50. 00 μg mL-1内线性关系良好 ,线性方程为A =
7. 8×104C - 5. 41×104 , r=0. 999 4(n=5)。结论　建立的 HPLC法灵敏度高 ,方法准确 ,测定结果重现性好。白花丹参
中含有丰富的总丹参酮和丹参酮ⅡA。
[关键词 ] 　白花丹参;总丹参酮;丹参酮Ⅱ A;色谱法 ,高压液相
[中图分类号 ] 　R283. 4;R927. 2　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2007)07-0796-03
Determ ination of Tota lTansh inone and TanshinoneⅡA in Sa lviaM iltiorrh iza Bge. f.
A lba by HPLC
Q I Yong-xiu1 , LI X iang2 , WAN Jian-jian2 , CAO M ing-liang1 , GAO Yun-sheng1 , XIA Zuo-li1 (1. School of
Pharmacy , 2. TheC lass 2003P romoted from the Tra in ing School forMedicine to theR egularMedical College,
Ta ishanMedical College, Ta ian 271016, China)
ABSTRACT　Object ive　To determ ine to tal tanshinone and tansh inoneⅡ A in Sa lvia m iltiorrh iza bge. f. a lba by HPLC.
　Methods　U ltrasonic ex traction w ith 90% e thano lw as used to ex tract the lipid so luble component in Salvia m iltiorrh iza bge. f.
a lba. The liquid chrom atography was ca rried out by using w aters symm etry shie ld RP18 co lumn(150 mm ×3. 9 mm , 5μm)w ith
detec tion w ave length at 270 nm. The m ob ile phase was 90% m ethano l in de te rm ining the to tal tansh inone, 75% acetonitrile in
dete rm in ing the tansh inoneⅡ A . The flow ra te w as 0. 8 mL m in-1. 　R esults　There w as a good linear rela tionship w ithin the
range o f 0. 075 -0. 750 m g mL-1( tota l tansh inone) and 7. 5 - 50. 0 μg mL - 1( tansh inoneⅡ A) (r=0. 999 4, n =5 ). 　
Conc lu sion　The me thod is sim ple, rapid, se lective and sensitive. T ota l tansh inone and tanshinoneⅡ A are rich in Sa lv ia
m iltiorrhiza bge. f. alba.
KEY WORDS　Sa lv ia m iltiorrh iza bge. f. a lba;To ta l tanshinone;TanshinoneⅡ A;H PLC
　　白花丹参 (Salvia m iltiorrhiza bge. f. a lba)为唇形
科植物丹参 (Salvia m iltiorrhiza bge)的白花变型 ,主要
分布于山东境内 ,其他地区较为少见 ,属珍稀濒危药用
植物[ 1] 。通常以根部入药 ,味苦 , 性微寒 ,具有活血化
瘀 、通经镇痛 、清热安神的功效 [ 2] 。研究表明 ,丹参能
改善心功能 ,改善血液流变性 ,调节前列环素 (PG I2) /
血栓烷素 A2(TXA2)平衡 ,调节脂质代谢 ,抑制血管平
[收稿日期 ] 　2006-09-06
[基金项目 ] 　 *山东省教育厅科研基金资助项目 (基金
编号:J04E07);泰安市科技发展计划项目 (基金编号:2005-
12);泰山医学院重点科研基金项目(基金编号:2005-05)
[作者简介 ] 　齐永秀(1968 -), 女 , 湖北京山人 , 副教授 ,
硕士 , 从事药物分析与药动学研究。电话:0538 - 6229751, E-
m ail:yxqi@ tsm c. edu. cn。
滑肌细胞 SMC增殖迁移等 [ 3] ,在心脑血管疾病的防治
中应用甚广 。白花丹参除具有丹参的生物活性和用途
外 ,对治疗血栓性脉管炎具有独特疗效 [ 4] 。本研究建
立高效液相色谱 (HPLC)法测定总丹参酮和丹参酮 Ⅱ
A ,并对其在白花丹参中的含量进行了分析 ,为白花丹
参药用价值的进一步开发提供实验依据。
1　仪器与试剂　
W ate rs600高效液相色谱仪 ,W ate rs2996二极管阵
列检测器 , ;循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有
限公司 );KQ3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);台式离心机(上海安亭科学仪器厂制造 );
电子分析天平(上海恒平科学设备有限公司);恒温水
浴锅(北京市医疗设备厂)。丹参酮 ⅡA对照品 (购于
中国药品生物制品检定所 );甲醇和乙腈 (色谱纯 );纯
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化水。白花丹参于秋季采自泰山东麓(经泰山医学院
苏延友教授鉴定 ),用水洗去浮土 ,再用去离子水冲洗
2或 3次 ,于 60 ～ 70℃条件下烘干 ,粉碎备用。
2　方法与结果　
2. 1　色谱条件　W aters symme try shie ldTM RP18色谱柱
(105mm ×3. 9 mm , 5 μm),测定总丹参酮采用甲醇-
水为流动相 ,丹参酮 ⅡA采用流动相乙腈-水 =75：
25 ,流速 0. 8mL m in-1 ,检测波长 270 nm。
2. 2　溶液的配制　
2. 2. 1　贮备液的配制　精密称取丹参酮 ⅡA对照品
2. 5mg,用甲醇溶解并定容至 50mL容量瓶中 ,得丹参
酮 ⅡA贮备液 ,浓度为 50μg mL-1。
2. 2. 2　标准溶液的配制　精密量取丹参酮 ⅡA储备
液 1. 5, 2. 5, 5. 0, 7. 5和 10. 0 mL置于 10mL容量瓶
中 ,用甲醇定容至刻度 ,浓度分别为 7. 5 , 12. 5, 25. 0,
37. 5和 50. 0 μg mL-1。
2. 2. 3　样品溶液的制备　丹参脂溶性成分的提取:称
取白花丹参 20 g,粉碎 ,过孔径 (150. 0±6. 6) μm(100
目 )筛 ,精密称取 3份粉末各 1 g,分别置于 10mL刻度
试管中 ,用 90%乙醇 10 mL浸泡 6 h后超声 30 m in,抽
滤 ,滤液用乙醇定容于 50 mL容量瓶中 , 取上清液
3 000 r m in-1离心 10 m in ,用孔径为 0. 45 μm的微孔
滤膜过滤。
2. 3　流动相的选择　
2. 3. 1　总丹参酮流动相的选择　选取甲醇-水配比为
60：40, 70：30, 80：20, 90：10和 100：0 5个不同流
动相系统 , 取上述 “ 2. 2. 2”项下 50 μg mL-1的丹参酮
标准溶液和 “2. 2. 3”项下样品溶液 , 15 μL进样 ,记录
色谱图 。由色谱图可知 ,随甲醇比例增加 ,丹参酮保留
时间缩短 ,且峰形越好 ,在甲醇-水 (100：0)时 ,丹参酮
保留时间为 2. 1 m in,色谱峰与丹参样品中其他成分色
谱峰较难分离 ,因此选择测定总丹参酮的流动相为甲
醇-水 =90：10,总丹参酮色谱峰与干扰物质色谱峰分
离完全 ,总丹参酮保留时间为 4. 1 m in,峰形较好。丹
参酮标准溶液与样品溶液的色谱图见图 1。
图 1　丹参酮标准溶液与样品溶液的 HPLC图　
A. 标准溶液;B.样品溶液
2. 3. 2　丹参酮ⅡA流动相的选择　选取甲醇-水配比
为 90：10, 80：20, 75：25以及乙腈-水流动相 4个不
同流动相系统 ,取上述 “2. 2. 3”项下样品溶液 , 15 μL
进样 ,记录色谱图 ,由图分析可知 ,在甲醇-水 =90：10
条件下 ,在 4. 2 m in有与丹参酮 ⅡA一致的峰 ,但峰纯
度角大 ,此峰为混合峰;甲醇-水 =80：20条件下 ,保
留时间为 7. 76 m in的丹参酮 ⅡA色谱峰与干扰物未
完全分离;甲醇-水 =75：25条件时 ,在 12 ～ 14m in两
个色谱峰完全分开 , 丹参酮 Ⅱ A 的保留时间为
14. 3m in,但峰形不好;乙腈-水 =75：25的条件下 ,峰
对称性较好 ,分离情况较好 ,保留时间约 6. 5 m in的峰
为丹参酮ⅡA的吸收峰。
2. 4　系统适应性实验　取 “ 2. 2. 2”项下 3种标准溶
液和 “ 2. 2. 3”项下的样品溶液 ,在相应的色谱条件下 ,
进样 10 μL,记录色谱图 。按丹参酮 ⅡA色谱峰计算
理论塔板数为 2 055。当信噪比 S N/ =3时 ,丹参酮 Ⅱ
A的最低检出量为 5 ng。
2. 5　精密度实验 　取浓度分别为 7. 5, 25. 0,
50. 0μg mL-1丹参酮 ⅡA的标准溶液 ,分别在 1 d内
重复测定 3次 ,连续 5 d内重复测定 5次 ,以测定的丹
参酮 Ⅱ A浓度计算测定方法的精密度 , 结果日内
RSD≤0. 29%,日间 RSD≤1. 62%。
2. 6　线性关系考察　
2. 6. 1　总丹参酮标准曲线的建立　取 “ 2. 2. 2”项下
浓度分别为 7. 5, 12. 5, 25. 0, 37. 5 , 50 μg mL-1丹参酮
ⅡA标准溶液 ,在流动相甲醇-水 =90：10条件下 ,进
样 10 μL,以峰面积为横坐标 ,浓度为纵坐标 ,求得线
性回归方程 A总丹参酮 =5. 88×106C总丹参酮 - 1. 99×105 ,
r=0. 999 4。
2. 6. 2　丹参酮 Ⅱ A标准曲线的建立　取 “2. 2. 2”项
下浓度分别为 7. 5, 12. 5, 25. 0, 37. 5, 50. 0 μg mL-1丹
参酮ⅡA标准溶液 ,在流动相乙腈-水 =75：25条件
下 ,进样 10μL,以峰面积为横坐标 ,浓度为纵坐标 ,求
得线性回归方程 A丹参酮 =7. 8×104C丹参酮 - 5. 41×103 ,
r=0. 999 4。
2. 7　加样回收率实验　分别取已知含量的样品溶液 ,
精密加入相应的对照品溶液 ,依法测定 ,得总丹参酮平
均回收率分别为 99. 12%, RSD≤1. 07%(n =3);丹参
酮 ⅡA的平均回收率 98. 20%, RSD≤1. 52%(n=3)。
2. 8　样品的测定结果　取 “2. 2. 3”项下样品溶液 ,在
相应的色谱条件下进样 ,每份样品平行测定 3次 ,测定
结果如下表 1。
3　讨论　
本研究对测定总丹参酮和丹参酮 ⅡA的流动相配
797 医药导报 2007年 7月第 26卷第 7期
比及组成进行筛选 ,通过对 5种不同比例甲醇-水作流
动相时的总丹参酮色谱图的分析比较 ,以及对 4种不
同比例和组成作流动相的丹参酮ⅡA色谱图的分析比
较 ,选择测定总丹参酮的流动相为甲醇-水 (90：10),
测定丹参酮 ⅡA的流动相为乙腈-水(75：25),同时建
立灵敏度高 、方法准确 、测定结果重现性好的 HPLC测
定方法 。
表 1　白花丹参中总丹参酮和丹参酮Ⅱ A的测定结果　
样品 总丹参酮含量 /% RSD /%
丹参酮Ⅱ A
含量 /% RSD /%
1 0. 79 0. 96 0. 38 1. 15
2 0. 74 0. 15 0. 36 1. 50
3 0. 84 0. 85 0. 32 0. 95
　　采用乙醇溶液超声的提取方法提取白花丹参中丹
参酮 , HPLC 法测定白花丹参中总丹参酮含量为
0. 79%;丹参酮ⅡA含量为 0. 35%。文献 [ 5 ～ 6]报道
不同地区的丹参样品中 , 丹参酮 Ⅱ A含量一般为
0. 3%,表明白花丹参中含有丰富的丹参酮 ⅡA。
[参考文献 ]
[ 1] 　周凤琴 , 李建秀 , 张照荣.山东珍惜濒危野生药用植物的
调查研究 [ J] .中草药 , 1998, 29(1):46.
[ 2] 　刘陶进 , 黄耀洲.丹参成份制剂和质量控制研究概况 [ J] .
南京中医药大学学报 , 1998, 14(4):255.
[ 3] 　林　琦 , 陆金国.丹参抗动脉粥样硬化的研究进展 [ J] . 山
西中医 , 2002, 18(4):56.
[ 4] 　李志田 , 杨保津 ,马广恩 . 白花丹参化学成分的研究 [ J] .
药学学报 , 1991, 2(3):209.
[ 5] 　李　磊 , 胡广林 , FRANK S C,等. 丹参抗氧化成分及其分
布特性 [ J] .江西农业大学学报 , 2001, 23(4):487 - 491.
[ 6] 　倪学斌 , 苏　静.丹参地上部分有效成分的初步分析 [ J] .
中国药学杂志 , 1995, 30(6):336 - 338.
4-巯基嘧啶紫外分光光度法测定
大蒜中硫代亚磺酸酯的含量*
黄洪勇 ,唐　辉 ,崔利娜 ,邢春梅
(石河子大学药学院 ,新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室 ,新疆石河子　832002)
[摘　要 ] 　目的　建立 4-巯基嘧啶(4-MP)紫外分光光度法测定大蒜中硫代亚磺酸酯含量的方法。方法　乙醇超
声浸提大蒜样品 , 用 4-MP紫外分光光度法定量检测硫代亚磺酸酯的含量。结果　冬储大蒜和新鲜大蒜中硫代亚磺酸酯
的含量分别为 0. 117 0%和 0. 243 5%;RSD分别为 3. 43%和 3. 08%,均小于 5%。结论　该方法简单 、灵敏 、快速 、价廉 。
[关键词 ] 　4-巯基嘧啶;大蒜;硫代亚磺酸酯;蒜辣素;含量测定
[中图分类号 ] 　R284. 1　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2007)07-0798-05
Determ ination of Th iosulfinates Content in Gar lic by 4MP-UV
HUANG Hong-yong, TANG Hui, CU I Li-na, XING Chun-me i(College of Pharmacy , Shihezi University ,
Shihezi, X injiang 832002, China)
ABSTRACT　Objec tive　To se t up a simp le 4M P-UV m e thod fo r the dete rm ina tion of thiosu lfina tes con tents in garlic. 　
M ethods　The sam ple of ga rlic ex trac tion w as imm ersed into a lcoho l , sonica ted and de tected w ith spec trophotome tric a ssay by
4MP-UV. 　R esults　The saved-up ga rlic and the fresh garlic re spective ly con ta ined thiosulfina te s 0. 117 0% and 0. 243 5% .
Re lative standard dev ia tions (RSD) we re 3. 43% and 3. 08%, bo th le ss than 5%. 　 Conc lusion　The m ethod is easy ,
sensitive, fast and inexpensive.
KEY WORDS　4-m ercaptopy rid ine(4-M P);Garlic;Thiosulfina te s;A llicin;Content de te rm ina tion
　　大蒜为百合科葱属植物蒜 Allium sa tiium 的地下
鳞茎。现代研究表明 ,大蒜具有抑制肿瘤 、保护心血
管 、提高免疫力 、清除自由基等多种重要的人体保健功
能 [ 1 ～ 7] ,这些生物功效都归功于大蒜中的有机硫化物 ,
特别是硫代亚磺酸酯类 [ R-S-S(O)-R] 。蒜辣素(二烯
丙基硫代亚磺酸酯)是由大蒜中含量丰富的非蛋白质
氨基酸 ———蒜氨酸 (a lliin)在挤压破碎条件下经内源
酶 ———蒜氨酸酶 (alliinase)的酶解作用而生成的 [ 8] ,在
所有硫代亚磺酸酯中约占 70%[ 9] 。
大蒜提取物及大多数商品大蒜食品添加剂 ,例如
国外销售的含有蒜粉的片剂 、胶囊剂 ,都是基于蒜辣素
或潜在蒜辣素的含量来评定。评价蒜辣素含量的方法
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