全 文 ：4. 2. 2. 2 热板法镇痛 试验取经筛选合格的♀性小鼠 60
只(凡舔后足时间小于 5 s或大于 30 s或跳跃者弃之不用 ),
体重 18 ～ 22 g, 分组给药方法同 2. 1, 吗啡组药后 0. 5 h,其它
各组药后 1 h,将小鼠放入(55±0. 5)°C的热板中 , 测定其痛
阈值 , 结果见表 9。由表 9可见 , 与生理盐水组比较 , 经 T检
验各样品组小鼠痛阈值均有显著性差异 , 其中延胡索单味浓
缩颗粒高剂量组有非常显著性差异 ,低剂量组镇痛作用与醇
提液组 、煎煮液组相近。
表 9 热板法镇痛试验(x±s, n =10)
级别 剂量 /g /kg 痛阈值 /S
NS - 17. 9±6. 1
吗啡 0. 01 49. 7±9. 7**
延胡索单味颗粒 20 30. 1±7. 2**
延胡索单味颗粒 10 24. 6±7. 7*
延胡索醇提液 20 23. 8±6. 3*
延胡索煎煮液 20 24. 1±6. 4*
5 讨论
延胡索是中药传统镇痛药 ,市场上以其为主药的制剂很
多 , 根据传统提取法 ,浙江产延胡索其每 1 g延胡索药粉含延
胡索乙素 0. 6 mg[ 2]左右 , 笔者采用超临界 CO2流体萃取法
从延胡索中萃取延胡索乙素 , 其含量达到 136 m g /g, 比传统
提取法要高出一倍多。根据小鼠醋酸扭体法 、热板法试验 ,
各种延胡索提取液与生理盐水组比较其镇痛作用均有显著
差异 , 其中超临界 CO 2萃取后制得的延胡索单味浓缩颗粒镇
痛作用明显比醇提液和水煎液强。
参考文献:
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含量 [ J] .中国现代应用药学杂志 , 2000, 17(4):315-317.
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[ 4] 陈 奇.中药药理研究方法学第 1版 [M ] .北京:人民卫生出版
社 , 1993, 377, 378.
白花丹参水提物抗脑缺血作用实验研究
蔡洪信 , 李大伟 , 夏作理
(泰山医学院 脑微循环实验室 ,山东 泰安 271000)
收稿日期:2006-03-18
基金项目:山东省中医药管理局 2003～ 2004年中医药科技发展项目(132)
作者简介:蔡洪信(1973～ ),男 ,主治医师 ,硕士生,主要从事脑缺血保护的研究。电话:0538-6672169, E-m ail:caihongxin163@163. com
关键词:白花丹参;细胞间黏附分子-1;髓过氧化物酶;局灶性;脑梗死
中图分类号:R285. 6 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2007)07-1082-02
白花丹参是唇形科植物丹参的变异品种 ,为山东特有的
珍稀物种。多年来 , 人们将白花丹参雷同丹参使用 , 广泛用
于防治心脑血管病 , 但对其进行的研究甚少 。近年来 ,炎症
反应在缺血性脑血管病发病过程中所起的重要作用已逐步
被认可。脑缺血和再灌注早期产生的黏附分子 、细胞因子及
中性粒细胞聚集构成了炎症反应的基础。因此 ,本研究采用
光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型 , 选择细胞间黏附分
子-1( ICAM-1)、髓过氧化物酶 (MPO)、梗死体积作为观察指
标 , 来探讨白花丹参拮抗脑缺血的作用 , 为其临床应用提供
理论依据。
1 材料与方法
1. 1 实验动物与分组
健康♂KM 小鼠 152只 , 体重 (22±2)g, 由山东大学实
验动物中心提供(鲁动质字 20021024号)。随机分为假手术
组 、局灶性脑梗死组 、低剂量白花丹参组 (10 g /kg)、中剂量
白花丹参组(20 g /kg)、高剂量白花丹参组(40 g /kg)。按手
术后断头取脑时间 ,每组又分为 3、 6、 12 h 3个时间点 , 用于
制作脑匀浆。局灶性脑梗死组 ,低 、中 、高剂量白花丹参组另
加 24 h时间点 ,用于 TTC染色。每个时间点 8只小鼠。
1. 2 仪器及试剂
冷光源由徐州恒发有限公司研制 , 型号为 LG-150。金
属卤化灯 (150W , 24 V)为发光光源 , 滤去全部紫外线与红
外线 ,投射出单一绿色光束 ,波长为(560±30)mm, 光导纤维
输出口至照射区距离为 1. 5 mm , 光束投射中心直径为 3
mm ,光照强度为 5. 6×105 cd m - 2 , 照射中心最高温度为
27°C。立体定位仪 , 美国 Stoe lting公司生产 , 型号为 51600。
微循环激光多普勒测量仪 , 瑞典百灵威公司生产 , 型号为
PF5001。酶标仪 , 美国 BIO-RAD公司生产 , 型号为 550。紫
外分光光度仪 , 上海精密科学仪器有限公司生产 , 型号为
UV755B。玫瑰红( rose bengal, RB)由美国 Sigm a公司购买。
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ICAM-1 EL ISA试剂盒由武汉博士德公司购买。髓过氧化物
酶(M PO)测试盒由南京建成生物工程研究所购买。 2, 3, 5-三
苯基氯化四氮唑(TTC)由国药集团化学试剂有限公司购买。
1. 3 白花丹参水提物的制取及给药
所用白花丹参根产于山东莱芜苗山白花丹参种植基地。
称取白花丹参根适量 ,切片后加蒸馏水浸泡 30 m in, 然后加
热煮沸。开始用强火 , 沸腾后改用文火 ,保持微沸 40 m in, 搅
拌 、趁热过滤。药渣再加蒸馏水同法煮沸后 , 滤过。合并滤
液 , 经旋转蒸发仪浓缩 ,最后用蒸馏水稀释至所需浓度灌封 ,
4 ℃保存备用。白花丹参组按相应剂量连续灌胃 7 d, 局灶
性脑梗死组 、假手术组予以同等容积的生理盐水连续灌胃 7
d,末次给药 1 h后实行手术。
1. 4 局灶性脑梗死模型的复制
根据丁品胜等 [ 1]的方法略行改动 , 室温 25°C条件下 , 腹
腔注射水合氯醛(0. 35 g /kg)麻醉 , 使用加热垫调节体温以
维持在(37 ±0. 5)°C, 经股静脉缓慢注入 5 玫瑰红 (100
m g /kg),立体定位仪固定小鼠头部 , 沿头正中切口分离 、暴
露左侧颅骨。以矢状缝左侧 2 mm、冠状缝后 2 mm 为中心 、
直径 3 mm为照射野 , 使冷光源光导纤维探头垂直贴近暴露
的颅骨。注射玫瑰红后 5 m in时打开冷光源 , 照射 10 m in。
将激光多普勒测量仪探针垂直放置在颅骨表面光照中心 , 即
梗死中心 , 测量光照前后的皮层血流量 , 光照前记录基准血
流量值 , 光照后再记录血流量值以证实栓塞的成功。假手术
组除不作光照外其他操作同局灶性脑梗死组。
1. 5 观测指标及方法
1. 5. 1 梗死侧皮层 ICAM-1含量的检测
小鼠于相应时间点脱臼处死 , 快速取脑 , 冰盘上分离左
侧皮层 ,称重后置于匀浆器中 ,按重量体积比 1∶9加入 0. 01
m o l /L PBS, 于冰水混合物中匀浆 40次 , 然后严格按照
ELISA试盒说明进行操作 ,用酶标仪进行检测。
1. 5. 2 MPO活性检测
取脑匀浆严格按 MP0检测测试盒说明进行操作 , 用紫
外分光光度仪进行检测。
1. 5. 3 TTC染色测梗死体积
小鼠于相应时间点脱臼处死 , 快速取脑 ,置于冰盘上 ,以
梗死中心为中点 , 1 mm层厚 ,向头尾端各作 3个冠状切片 , 置
于 2 TTC中 , 37°C水浴孵育 30 m in, 然后于 4 多聚甲醛溶
液固定 24 h, 扫描仪采集图像 , im age-proplus图像分析系统计
算每一层梗死面积, 梗死体积 =层梗死面积之和 ×层厚。
1. 6 资料统计
实验数据多组比较采用单因素方差分析 , 两两比较采用
q检验 , 数据用均数 ±标准差(x±s)表示。所有数据均应用
SAS6. 12软件进行统计学处理。
2 结果
2. 1 白花丹参水提物对梗死侧皮层 ICAM-1表达的影响
结果见表 1。
2. 2 白花丹参水提物对梗死侧皮层 MPO活性的影响 结
果见表 2。
表 1 白花丹参水提物对梗死侧皮层 ICAM-1表达(OD值)的影响(x±s, n=8)
组别 3h 6h 12h
假手术组 0. 659±0. 025* 0. 669±0. 021** 0. 661±0. 020**
局灶性脑梗死组 0. 866±0. 019 0. 980±0. 021 1. 011±0. 024
低剂量白花丹参组 0. 800±0. 018** 0. 872±0. 021** 0. 760±0. 020**
中剂量白花丹参组 0. 775±0. 017** 0. 805±0. 022** 0. 726±0. 016**
高剂量白花丹参组 0. 760±0. 014** 0. 743±0. 018** 0. 705±0. 013**
注:与局灶性脑梗死组相应时间点比较 , * P <0. 05, **P <0. 01。
表 2 白花丹参水提物对梗死侧皮层MPO活性(μ /g)的影响(x±s, n =8)
组别 3h 6h 12h
假手术组 0. 458±0. 033** 0. 450±0. 033** 0. 423±0. 026**
局灶性脑梗死组 0. 628±0. 038 0. 859±0. 032 0. 935±0. 038
低剂量白花丹参组 0. 589±0. 017** 0. 706±0. 023** 0. 553±0. 018**
中剂量白花丹参组 0. 545±0. 015** 0. 618±0. 020** 0. 476±0. 018**
高剂量白花丹参组 0. 529±0. 016** 0. 585±0. 016** 0. 441±0. 013**
注:与局灶性脑梗死组相应时间点比较 , *P <0. 05, **P <0. 01。
2. 3 白花丹参水提物对梗死体积的影响
结果见图 1、表 3。
表 3 白花丹参水提物对梗死体积(mm3)的影响
(x ±s, n=8)
组别 梗死体积 /mm3
局灶性脑梗死组 15. 21±0. 57
低剂量白花丹参组 14. 47±0. 60*
中剂量白花丹参组 12. 02±0. 66**
高剂量白花丹参组 11. 25±0. 43**
注:与局灶性脑梗死组比较 , *P <0. 05, **P <0. 01。
3 讨论
正常情况下 ,在血管内皮细胞表面有少量细胞间黏附分
子-1表达 , 脑缺血时可释放多种促炎细胞因子 , 使微血管内
皮细胞细胞间黏附分子-1表达明显上调 , 使得白细胞与血管
内皮细胞之间的黏附力增加 ,进而贴壁 、滚动 、嵌塞微血管 ,
进一步加重脑缺血;并介导白细胞跨过内皮细胞间隙进入周
围组织 , 释放大量炎症递质和细胞因子 ,加重缺血脑组织损
伤。参与脑缺血后损伤反应的白细胞早期以中性粒细胞为
主 , 髓过氧化物酶主要位于中性粒细胞嗜天青颗粒中 , 其活
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性是评价中性粒细胞在组织中浸润程度的可靠指标。
图 1 梗死中尽冠状切面 TTC染色(黑箭头所指为梗死区)
A局灶性脑梗死组, B低剂量白花丹参组 ,
C中剂量白花丹参组 , D高剂量白花丹参组
本实验显示光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死后 ICAM-1
的表达升高 , MPO活性也增高且时程一致 , 与文献报道相
似 [ 2] 。有大量动物实验研究表明 ICAM-1的表达 、中性粒细
胞的浸润与脑缺血损害的程度密切相关。 ICAM-1-/-的裸小
鼠比 ICAM-1+ /+野生型小鼠梗死面积缩小 80 , 存活率升
高 31 , 并且神经功能损害减轻;中性粒细胞免疫缺陷小鼠
梗死体积可缩小 70 , 神经功能损害也减轻 [ 3] 。抗 ICAM-1
抗体可明显减轻大鼠的梗死体积 [ 4] , 并可延长溶栓治疗的时
间窗 [ 5] , 但临床试验效果不理想 ,反而使病情恶化 , 并伴随着
感染和发热等副作用 [ 6] 。而传统中药安全无毒 ,特别是丹参
作为一种常用的活血化瘀药物 ,在治疗缺血性脑血管病的临
床实践中已取得良好疗效。白花丹参作为一种稀有药材 ,多
年来常雷同丹参使用 , 但对其研究较少。有研究 [ 7]显示白花
丹参所含化学成分与丹参基本一致 , 并含有一些特有成分 ,
如 1, 2, 15, 16-四氢丹参醌 Ⅰ 、丹参醛 Ⅱ , 有些成分含量还高
于丹参。近期有研究 [ 8]表明白花丹参茎叶水提物能明显增
强小鼠的耐缺氧作用 , 使缺氧小鼠的存活时间明显延长。本
实验研究显示预防性应用白花丹参根水提物能够使局灶性
脑梗死皮层 ICAM-1的表达 、M PO的活性明显降低 , 使梗死
体积明显缩小 ,并有剂量依赖性趋势。
这提示预防性应用白花丹参根水提物有抗脑缺血作用 ,
其机制之一可能与降低缺血脑组织 ICAM-1的表达 , 减轻中
性粒细胞的黏附浸润 ,从而减轻局灶性脑梗死后的炎症级联
反应有关。
参考文献:
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金香丹对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
刘全中 1 , 杨月花 2 , 黄少祥3
(1.武警广东总队医院 ,广东 广州 510507;2.广东顺德中西医结合医院 ,广东 顺德 518333;3. 湖北荆州市中
医医院 ,湖北 荆州 434000)
收稿日期:2006-06-15
作者简介:刘全中(1976～ ),男 ,医学硕士 ,研究方向:冠心病的病理与临床。
关键词:心肌再灌注损伤;钙超载;腺苷三磷酸酶
中图分类号:R285. 6 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2007)07-1084-02
缺血心肌恢复血供蛤 , 再灌注区心肌细胞及血管网会发
生显著的病理变化 , 被称为心肌再灌注损伤 , 该变化常使患
者再灌注治疗后病情反而加重。 本实验建立大鼠心肌缺血
再灌注损伤模型 ,通过检测各项指标 , 探讨金香丹对大鼠心
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