全 文 ：现代医药卫生 2012年10月30日 第28卷第20期 J Mod Med Health，October 30，2012，Vol.28，No.20
牛白藤又名甜茶、脓见消等，为茜草科植物牛白藤（Hedyotis
hedyotidea DC.）的干燥全草。具有清热解暑、祛风除湿、消肿解毒
等功能。民间常用于治疗中暑、感冒、咳嗽、胃肠炎、跌打损伤、皮
肤湿疹等疾病 [1-3]。据文献报道，用复方牛白藤汤治疗急性传染性
肝炎取得满意效果 [4]。药理研究表明，牛白藤醇提物对大鼠拘禁和
水浸造成的胃溃疡有抑制作用 [5]；通过小鼠二甲苯耳肿胀实验和
毛细血管通透性实验证实，牛白藤醇提物具有明显的抗炎药理
活性。有文献报道，牛白藤中含有 β-谷甾醇、豆甾醇、熊果酸、齐
墩果酸等化学成分 [6]。关于牛白藤中化学成分的含量测定方法尚
未见报道，为进一步研究牛白藤中化学成分的含量，本研究建立
了牛白藤中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱法 （hygh-perfor-
mance liquid chromatography，HPLC）含量测定方法，旨在为牛白藤
的质量控制提供方法依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 仪器为 210 型高效液相色谱仪（美国 VARI-
AN 公司）、二极管阵列检测器（DAD）、电子分析天平（CP2250D，
Sartorius）、KQ-5200 型数控超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器
有限公司）等。甲醇为色谱纯（美国 Fisher 公司），其余试剂均为分
析纯，水为超纯水。牛白藤采自广西博白县郊外，经广西民族医药
研究院陈少锋主任药师鉴定为牛白藤全草。齐墩果酸批号为
110709-200505，熊果酸批号为 110742-200516。
1.2 方法
1.2.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱为 Diamonsil C18 （4.6
mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇 ∶ 0.1%磷酸（80 ∶ 20），流速为
1.0 mL/min，柱温为 30 ℃，检测波长为 210 nm。进样量为 10 μL，
齐墩果酸、熊果酸与杂质峰的分离度均大于 1.5；理论塔板数按齐
墩果酸和熊果酸峰计算均大于 6 000，见图 1。
1.2.2 对照品混合溶液的制备 分别精密称取减压干燥至恒重
的齐墩果酸与熊果酸对照品 3.580 0、3.420 0 mg，分别置于 10 mL
量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备
高效液相色谱法测定牛白藤中齐墩果酸和熊果酸含量
沈守仁 1，陈少锋 2（1. 桂林天和药业股份有限公司，广西 桂林 541001；2. 广西壮族自治区民族医药研究
院，广西 南宁 530001）
【摘 要】 目的 建立以高效液相色谱法（HPLC）同时测定牛白藤药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。 方法 色
谱柱为 Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇 ∶ 0.1%磷酸（80 ∶ 20），流速为 1.0 mL/min，柱温为 30 ℃，检测
波长为 210 nm。 结果 齐墩果酸和熊果酸分别在 0.091 0～0.910 0 μg（r=0.999 8）和 0.084 6～0.821 8 μg（r=0.999 7）呈良好
线性关系，二者平均加样回收率分别为 99.91%、98.38%，相对标准偏差（RSD）分别为 2.5%、2.2%。 结论 高效液相色谱
法简便、准确、可靠，可用于牛白藤的质量控制。
【关键词】 植物，药用； 牛白藤； 齐墩果酸/分离和提纯； 熊果酸/分离和提纯； 色谱法，高压液相
文章编号： 1009-5519（2012）20-3067-02 中图法分类号： R282.71 文献标识码： A
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Hedyotis hedyotidea by HPLC Shen Shouren1，Chen Shaofeng2 （1.
Guilin Tianhe Pharmaceutical Co.，Ltd.，Guilin，Guangxi 541001，China；2. Guangxi Institute of Minority Medicines，Nanning,
Guangxi 530001，China）
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for simultaneous determination of oleanolic acid and ursolic acid in
Hedyotis hedyotidea. Methods The analytical column was Diamonsil C18 column（4.6 mm×250 mm，5μm）.The mobile phase
consisted of methanol- 0.1% phosphoric acid（80 ∶ 20）.The flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was set at 30 ℃ and
the detection wavelength was 210 nm. Results The calibration curves of oleanolic acid and ursolic acid showed good linearity in
the range of 0.091 0-0.910 0 μg（r=0.999 8） and 0.084 6-0.821 8 μg（r=0.999 7），respectively.Their average recoveries were
99.91% and 98.38%，RSD 2.5%（n=6）and 2.2%（n=6），respectively. Conclusion The established method is simple，accurate
and reliable, which can be used for the quality control of Hedyotis hedyotidea ．
【Key words】 Plants，medicinal； Hedyotis hedyotidea； Oleanolic acid/isolation & purification； Ursolic acid/isolation
& purification； Chromatography，high pressure liquid
·论 著·
A：对照品；B：供试品；1：齐墩果酸；2：熊果酸
图 1 高效液相色谱图
A
B
·3067·
现代医药卫生 2012年10月30日 第28卷第20期 J Mod Med Health，October 30，2012，Vol.28，No.20
78%（39/50），两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
3 讨 论
以往在基层医院行 RPH 不使用麻醉镇痛药，在插入扩肛器
时患者多有疼痛和坠胀感，特别在聚维酮碘消毒时患者坠胀感更
加显著，患者就会缩肛，挪动身体，发出呻吟，从而给患者造成身
心痛苦。随着人们生活水平的提高，生活质量的改善，身心健康越
来越受到重视，许多患者希望在无痛苦情况下完成手术。盐酸丁
卡因胶浆用于 RPH 减轻了患者痛苦，方便了手术操作，值得在基
层医院推广应用。
参考文献
[1] 洪文光，文武魁. 痔吻合器治疗 46 例重度痔临床体会[J]. 岭南现代临
床外科，2012（1）：39-40.
[2] 吴尉林，唐勇. 中西医结合治疗痔疮体会[J]. 浙江中西医结合杂志，
2012，22（5）：369-370.
[3] 缪利君. 痔疮患者 35例围手术期护理体会[J]. 大家健康：学术版，2011，
5（10）：8-9.
[4] 韩冬，张厚珍. 痔疮患者围手术期的护理改进[J]. 现代医药卫生，2004，
20（15）：1472-1473.
[5] 狄鸿胜. 消痔汤熏洗治疗痔疮 257 例临床分析[J]. 吉林医学，2012，
33（13）：2805.
[6] 王艳梅，王宏波，李雪松. 普济痔疮栓治疗内痔及混合痔的临床观察[J].
中国老年保健医学，2009，7（2）：113.
[7] 张宝顺，姚海东，杨玉菊. 内痔保守治疗应用普济痔疮栓的疗效观察[J].
中国老年保健医学，2010，8（3）：36.
[8] 陈孝平.外科学[M]. 北京：人民卫生出版社，2006：636.
（收稿日期：2012-08-07）
液。精密量取齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液各 2 mL，均置于
10 mL 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品
溶液（含齐墩果酸 71.62 μg/mL，熊果酸 68.45 μg/mL）。
1.2.3 供试品溶液的制备 取牛白藤粉末（过 60 目筛）约 1.0 g，
精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入 50 mL 甲醇，称定质量，超
声处理 30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，
摇匀，用 0.45 μm 一次性针筒过滤器过滤，取续滤液作为供试品
溶液。
1.2.4 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液 2、6、10、14、18
μL，注入液相色谱仪中，按 1.2.1 项色谱条件测定，以测得峰面积
为纵坐标 Y 轴，对照品进样量为横坐标 X 轴，绘制标准曲线。
1.2.5 精密度试验 精密吸取对照品混合溶液 10 μL，重复进样
5 次。
1.2.6 重复性试验 精密称取同一牛白藤药材 5 份，按 1.2.2 项
制备供试品溶液，按 1.2.1 项色谱条件测定。
1.2.7 稳定性试验 精密吸取同一份牛白藤供试品溶液，分别于
0、1、2、4、8 h 内测定，记录峰面积。
1.2.8 加样回收率试验 取已测知齐墩果酸和熊果酸含量的牛
白藤粉末（过 60 目筛）约 0.25 g，共 6 份，精密称定。分别精密加
入一定量的齐墩果酸对照品和熊果酸对照品，按上述样品制备方
法制备样品和色谱条件测定其含量，计算加样回收率。
1.2.9 样品含量测定 分别取 3 个不同批次的牛白藤粉末（过 60
目筛）各 1.0 g，精密称定。按 1.2.3 项方法制备供试品溶液，按 1.2.1
项色谱条件测定，计算。
2 结 果
2.1 线性关系考察 齐墩果酸回归方程：Y=4.05×103X+7.56，r=
0.999 8，表明齐墩果酸对照品进样量在 0.091 0～0.910 0 μg 之间
有良好的线性关系；熊果酸回归方程：Y=3.82×103X+2.75，r=0.999 7，
表明熊果酸对照品进样量 0.084 6～0.821 8 μg 之间有良好的线性
关系。
2.2 精密度试验 齐墩果酸的相对标准偏差（RSD）为 1.0%，熊
果酸为 1.8%，表明仪器精密度良好。
2.3 重复性试验 齐墩果酸的平均含量为 0.040 mg/g，RSD 为
1.9%，熊果酸的平均含量为 1.032 mg/g，RSD 为 2.5%。
2.4 稳定性试验 齐墩果酸的 RSD 为 1.5%，熊果酸的 RSD 为
1.7%，表明供试品溶液在 8 h 内稳定。
2.5 加样回收率 齐墩果酸和熊果酸平均加样回收率分别为
99.91%、98.38%，RSD 分别为 2.5%、2.2%。
2.6 样品含量测定 结果见表 1。
3 讨 论
3.1 作者曾研究考察了用甲醇超声波提取 30、45、60 min，回流
提取 1.0、1.5、2.0 h，结果表明，超声波提取 45 min 与 60 min 及回
流提取 2 h 对齐墩果酸与熊果酸的提取率基本一致，由于超声波
提取方法简便、省时，因此，采用超声波提取 30 min。
3.2 作者曾分别选用不同浓度甲醇和乙醇为提取溶剂，进行超
声提取，结果表明，以 50%、70%甲醇和乙醇提取含量均较低，仅
有熊果酸色谱峰；而甲醇提取率最高，故选用甲醇为提取溶剂。
3.3 齐墩果酸与熊果酸均属三萜类化合物，结构相似，其理化性
质相近，因而在色谱柱上的保留时间非常相近，流动相选择不当
时很难将其分开。本研究采用 HPLC 法同时测定牛白藤中的齐墩
果酸与熊果酸时，通过调节流动相的 pH 值，并加大流动相中水
的比例，可以有效地将二者分开。该法定量准确，回收率高，并能
同时测出齐墩果酸与熊果酸的含量，且简单、易行，可作为牛白藤
中齐墩果酸与熊果酸含量的测定方法。
3.4 由于本研究未进行不同产地、不同批次牛白藤中齐墩果酸
和熊果酸的含量与其主要功效动物实验对比研究，因此，不能说
明其含量与主要功效的相关性，在下一步的研究中有必要对其进
行研究，以便于更好地应用于临床。
参考文献
[1] 广西壮族自治区卫生厅. DX1832160 广西中药材标准[S]. 南宁：广
西科学技术出版社，1992.
[2] 陶曙红，陈艳芬，李钟，等. 牛白藤抗炎活性化学成分的研究[J]. 广东
药学院学报，2011，27（4）：364-366.
[3] 梁洁莹，李书渊. 牛白藤的生药学研究[J]. 广东药学院学报，2008，24
（5）：447-448.
[4] 韦人鉴. 复方牛白藤汤治疗急性传染性肝炎 20 例初步观察[J]. 广西
中医药，1978，2（2）：16-17.
[5] 彭江南，冯孝章. 耳草属植物化学成分的研究Ⅵ：牛白藤化学成分的
研究[J]. 中草药，1997，28（A10）：45-46.
[6] 陶曙红，陈艳芬，李钟，等. 牛白藤抗炎活性化学成分的研究[J]. 广东
药学院学报，2011，27（4）：364-366.
（收稿日期：2012-06-04）
表 1 样品含量测定结果（x±s，mg/g，n=3）
药材批次
1
2
3
0.035 4±0.002
0.040 6±0.001
0.027 6±0.003
齐墩果酸平均含量
0.813±0.005
0.926±0.002
1.220±0.006
熊果酸平均含量
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