全 文 ：2　结果
2.1　ABR阈值检测　由表 1可知 ,各组豚鼠用药前 ABR阈
值无明显变化。用药后 GM组 ABR明显升高 , 与对照组相
比 , 差异非常显著(P<0.01);ASS+GM组 ABR阈值与 GM
组相比 , 差异显著(P<0.01);用药前后 ASS组 ABR阈值与
对照组 ABR阈值接近(结果见表 1)。
表 1　 用药前后 ABR阈值检测( x±s, n=15)
组别 给药前 给药后
Control 1.60±2.35 1.60±2.31
GM 1.60±2.35 36.05±5.48＊#
ASS+GM 1.60±2.18 9.50±2.47■
ASS 1.60±2.35 1.55±2.37
　　与给药前比较 , ＊P<0.01;与对照组比较 , #P<0.01;与 GM组
比较 , ■P<0.01。
2.2　扫描电镜观察　正常对照组和 ASS组耳蜗螺旋器第
二 、三转内外毛细胞静纤毛显示清楚 , 形态正常;GM组内外
毛细胞静纤毛均出现倒伏 、散乱 、融合 、甚至出现片状缺失等
病理改变 , 尤其是第三排外毛细胞更为严重;ASS+GM组内
外毛细胞静纤毛虽然也出现倒伏 、散乱 、融合的现象 , 但与
GM相比病理改变明显减轻。
3　讨论
氨基苷类抗生素最常见最严重的副作用是肾毒性和耳
毒性 , 且药物耳毒性发病率高 , 早期症状不明显 ,而且一旦发
生慢性损伤 , 则大多数为不可逆 , 严重者甚至可引起失听 , 这
些都严重影响了患者的生活质量。 AmAn耳毒性的机制可
能与其在内耳的积蓄 、自由基损伤 、细胞凋亡 、第二信使作
用 、mtDNA基因突变 、体内某些金属离子有关等 [ 1] 。
我们推测刺五加注射液可能具有扩张耳蜗血管 、增加耳
蜗的血液循环 、改善氧自由基代谢紊乱 、改善毛细胞缺血缺
氧状态及促进毛细胞的能量代谢等作用 ,这些都可能使 GM
的耳毒性减轻。本实验结果表明 , ASS对豚鼠庆大霉素耳毒
性具有拮抗作用。 无论从用药前后 ASS+GM组豚鼠 ABR
阈值的改变情况来看 ,还是在 SEM下与 GM组相比 , 其毛细
胞损伤的明显减轻都说明了这一点。此外 , 我们在实验的过
程中发现 , ASS+GM组实验动物的一般状态明显好于 GM
组 ,尤其 ASS组豚鼠毛色光滑 , 体重增加明显 , 食欲旺盛 , 而
GM组则出现毛发倒伏散乱 、身体消瘦 、食欲减退 、精神萎靡
不振 、反应迟钝的现象。这可能与有学者报道的刺五加可提
高机体对有毒刺激的非特异抵抗力 、增强肾上腺皮质系统功
能 、提高机体适应力 、耐受性及减低多种致病因子对机体损
害作用有关 [ 2 , 3] 。
参考文献:
[ 1] 　张　杰 ,陈　瑛 ,张庆泉 ,等.氨基甙类抗生素的耳毒性及预防
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白花丹参叶水提物对糖尿病大鼠糖化血红蛋白的影响
李大伟 1 , 　蔡洪信 1 , 　张　玲1 , 　夏　青 2 , 　夏作理 1＊
(1.泰山医学院脑微循环重点实验室 ,山东 泰安 271000;2.北京大学药学部 ,北京 100083)
收稿日期:2007-05-12
作者简介:李大伟(1981～ ),男 ,硕士生。研究方向:糖尿病预防治疗 ,联系电话:0538-6222706。
＊通讯作者:夏作理。
关键词:白花丹参;水提物;糖尿病;大鼠;糖化血红蛋白
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2008)05-0764-02
　　糖尿病(diabetesmellitus, DM)是由遗传和环境因素共
同作用而引起的一组以糖代谢紊乱为主要表现的临床综合
征。近年来 , 丹参制剂在临床糖尿病治疗中具有显著疗效而
受到广泛关注。泰山白花丹参(SalviamiltiorrhizaBge.f.al-
ba.C.Y.WU.etH.W.Li)是丹参的变种 , 为山东特有珍稀濒
危药用植物 , 主要产于泰山 ,有研究表明白花丹参茎 、叶中也
含有大量的微量元素及化学成分 [ 1] 。本实验通过观察泰山
白花丹参叶制剂对糖尿病大鼠糖化血红蛋白调节作用 , 探讨
其糖尿病治疗效果 , 为其临床应用提供实验依据。
1　材料和方法
1.1　主要仪器与试剂　755B紫外分光光度计(上海精密科
学仪器有限公司), 血糖仪(罗氏诊断公司优越血糖仪), 电
子天平 , STZ(Sigma015K1279), 盐酸二甲双胍(北京市京丰
制药有限公司), 胆固醇(上海伯奥生物科技有限公司), 丙
基硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业有限公司), GHb检测试剂
盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2　实验动物及分组　清洁级成年健康♂性 Wistar大鼠
(山东鲁抗医药公司实验动物中心提供 , 质量合格证:SCXK
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第 30卷　第 5期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
May2008
Vol.30　No.5
鲁 20050017号)70只 , 体重 210 ～ 220 g, 分笼饲养 , 标准饲
料 , 自由饮水。动物房适应一周后 , 随机分为正常对照组和
模型组 , 模型组 60只大鼠喂饲高脂饲料 , 高脂饲料配方:1%
胆固醇 , 10%猪油 , 0.2%丙基硫氧嘧啶 , 89%基础饲料 [ 2] 。
由山东泰安米歇尔生物制品研究所提供。 4周后 , 大鼠尾静
脉注射 pH4.2柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解的 STZ(40 mg/
kgbw), 72 h后检测随机血糖 >13 mmol/L, 即确定为糖尿病
大鼠。经检测确立模型成立大鼠 53只 ,将其中 50只大鼠随
机分为模型对照组 、阳性对照组 、白花丹参治疗低 、中 、高剂
量组 , 每组各 10只大鼠。
1.3　白花丹参叶水提物的制备及给药　白花丹参由山东莱
芜苗山中药产业化科技示范基地提供 , 白花丹参叶晾干粉
碎 , 过 30目的网眼筛 , 将 10 g白花丹参叶粉末在 100℃水中
浸泡 5 min然后过滤 , 所得滤液进行冷冻干燥 , 冻干粉置于
干燥器中避光 4℃保存待用 [ 3] 。白花丹参叶水提物冻干粉
制备成浓度为 0.16 g/mL、0.32 g/mL、0.53 g/mL的双蒸水
溶液 , 每天新配制后以 1 mL/100gbw的量给大鼠灌胃 , 对照
组给予等量的容剂灌胃 [ 4] 。盐酸二甲双胍双蒸水溶解按照
浓度为 0.83 mmol/kg灌胃给药 [ 5] 。各治疗组大鼠连续给药
4周。
1.4　指标检测及方法　罗氏血糖仪在给药前 、给药 2 W、 4
W末断尾取血检测各组大鼠血糖并同时称量各组大鼠体
重。实验结束时 ,大鼠心脏取血 , 肝素抗凝后以 500 ～ 1 000
r/min离心 5 ～ 10min。弃上清留沉淀的红细胞 ,生理盐水洗
涤后制备成溶血液 -20℃保存待检。按照试剂盒要求紫外
分光光度计检测。
1.5　统计方法　实验数据以均数 ±标准差( x±s)表示 , 采
用 SPSS12.0软件包进行统计学分析 , Levene方差齐性检验
各组方差齐性(P>0.05),应用单因素方差分析 , t检验进行
均数两两比较。检验标准 a=0.05。 (阳性对照组大鼠实验
过程中死亡 2只 ,将其数据舍弃不用。)
2　结果
2.1　血糖的变化情况　与正常对照组(NC)相比较 , 模型组
大鼠血糖显著升高(P<0.01)。各治疗组均能显著降低血
糖 ,丹参高剂量组(DS-H)、二甲双胍组与模型组相比均有显
著性差异(P<0.01)。白花丹参叶制剂能明显降低糖尿病
大鼠血糖 ,同时大鼠体重稳定增加。见表 1。
表 1　 血糖浓度(mmol/L)( x±s)
组别 NO 0W 2W 4W
NC 10 4.370±0.705 6＊＊ 4.560±0.804 4＊＊ 4.46±0.582＊＊
MC 10 29.230±2.495 8△△ 29.680±2.244 9△△ 30.22±1.519△△
MET 8 30.562±2.025 5△△ 13.138±1.186 8△△＊＊ 9.75±1.190△△＊＊
DS-L 10 29.250±2.343 9△△ 27.640±2.284 3△△＊ 25.68±2.251△△＊＊
DS-M 10 30.310±1.562 4△△ 26.850±1.604 3△△＊ 23.19±1.537△△＊＊
DS-H 10 30.730±1.619 4△△ 21.940±2.104 1△△＊＊ 15.97±1.532△△＊＊
　　与正常对照组(NC)相比 ,差异有显著性△P<0.05, △△P<0.01, a=0.05。与模型组(MC)相比较, 差异有显著性 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01,
a=0.05。
2.2　实验各组大鼠血糖化血红蛋白含量(结果以每 10 g血
红蛋白中的 GHb的吸光度值表示)与正常对照组(NC)相比
较 , 模型组大鼠 GHb显著增高(P<0.01), 与模型对照组
(MC)相比 , 各治疗组 GHb均明显降低(P<0.01)。白花丹
参叶水提物可以降低糖尿病大鼠的糖化血红蛋白水平。见
表 2。
表 2　 血红蛋白含量( x±s)
组别 NO GHb
NC 10 15.420±2.909＊＊
MC 10 39.000±5.841△△
MET 8 25.075±5.911△△＊＊
DS-L 10 27.020±5.540△△＊＊
DS-M 10 24.730±5.500△△＊＊
DS-H 10 22.940±5.562△△＊＊
　　与正常对照组(NC)相比 , 差异有显著性△ P<0.05, △△P<
0.01, a=0.05;与模型组(MC)相比较 ,差异有显著性 ＊P<0.05, ＊＊P
<0.01, a=0.05。
3　讨论
糖化血红蛋白(glycosylatedhemoglobin, GHb)是由血红
蛋白两条 β 链 N端缬氨酸与葡萄糖化合而成 ,该反应不可逆
且其产生的量与血糖浓度呈正相关。是糖尿病血糖控制监
测指标。本实验观察白花丹参叶制剂对高脂饲料诱导后尾
静脉注射 STZ建立大鼠糖尿病模型血糖和糖化血红蛋白的
影响。结果显示 , 白花丹参叶水提物能显著降低糖尿病大鼠
血中 GHb的含量 , 且能降低糖尿病大鼠血糖。提示白花丹
参叶水提物能长期稳定的改善糖尿病糖代谢紊乱状况。
参考文献:
[ 1] 　齐永秀 ,高允生 ,夏作理 ,等.白花丹参不同部位微量元素分析
比较 [ J] .微量元素与健康研究 , 2004, 21(1):20-22.
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中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
May2008
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复方艾叶油乳膏剂对兔膝骨关节炎模型关节软骨病理改变及 MMP13
表达的影响
杨　敏 1 , 　田丰玮 1 , 　宋　军2 , 　杨金蓉 3
(1.重庆市中医院 ,重庆 400011;2.四川省中药研究所 ,四川 成都 610041;3.成都中医药大学 ,四川 成都
610075)
收稿日期:2007-02-14
基金项目:重庆市科委自然科学基金资助课题(编号 2004-47)。
作者简介:杨　敏(1969～ ),副主任中药师 ,研究方向:中药复方有效成分及作用机制 ,电话:023-66867634。
关键词:骨性关节炎模型;复方艾叶油乳膏剂;MMP-13
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2008)05-0766-02
　　膝关节骨性关节炎(KneeOsteoarithitis, KOA)是多种病
因引起的关节退化 、关节软骨破坏 、膝关节周围软组织退变
所致的慢性关节炎 , 其主要症状是膝关节疼痛 、肿胀 、畸形和
功能障碍等 , 近年来随着人口老龄化趋势的发展 , 其发病率
也明显上升 [ 1] 。因此 , 我们通过建立兔膝骨关节炎动物模
型 , 应用复方艾叶油乳膏剂外涂治疗 , 通过病理切片和免疫
组化检测 , 观察其对关节软骨的保护作用。
1　实验材料
1.1　动物　成年新西兰免 32只 , 3 ～ 4月龄 , 体重 2.5 ～ 3
kg, ♀♂各半 , 由成都中医药大学实验动物中心提供。
1.2　药物　复方艾叶油乳膏剂(重庆市中医研究院经验
方)由重庆市中医研究院提供 ,批号:20040908。
1.3　实验试剂　多聚赖氨酸:武汉博士德生物工程公司;免
疫组化一抗试剂:MMP-13抗体(RabbitAntiMMP13)、SABC
试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司;免疫组化二抗试剂
和相应 SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司;DAB
显色剂:武汉博士德生物工程公司;其余试剂均为市售分析
纯。
1.4　实验仪器　奥林巴斯光学显微镜:日本;C.IMAGING
SYSTEMS病理图像分析系统:美国;Laica切片机:德国。
2　实验方法
按体重随机选取 10只动物作正常对照组 , 不作任何处
理 , 其余 22只动物参照 Vandman法 [ 2]将左膝关节用石膏固
定于伸直位。固定范围从兔踝关节上 3 cm至腹股沟下 1.5
cm,固定时间 6周。制动满 6周后 ,随机处死 2只动物 , 取关
节软骨作病理检查以观察造模情况。造模成功后 , 去除固
定 , 剃毛 ,随机分为模型对照组和复方艾叶油乳膏组(浓度为
50%)。正常和模型对照组涂以基质 ,复方艾叶油乳膏组以
相应的药物涂抹 , 2 g/只 , 每天 1次 , 连续 4周。末次给药后
24 h, 空气栓塞处死动物 ,打开左膝关节大体观察后 , 以锐利
刀片切取股骨内髁内侧带软骨下骨质的软骨标本 , 使其呈约
0.5 cm×0.8 cm全软骨组织块 , 置 4℃, 4%多聚甲醛固定液
中固定 48 h后 , 取一部分软骨组织不脱钙 , 树脂包埋直接切
片 , HE染色及甲苯氨蓝染色 , 光镜观察软骨的形态学变化。
由两个独立的观察者按表 1 Mankin s评分标准为切片评
分 ,取两者平均值为最后的 Mankin s得分。另取一部分软
骨置 4℃, 4%多聚甲醛固定液中固定 48 h, 然后置入 10%
EDTA液于 37℃恒温箱中脱钙 , 每周更换一次脱钙液 , 至手
捏标本柔软有弹性并针灸针能轻易穿过终止。 采用石蜡切
片酶消化染色程序行 MMP13免疫组化检测。
3　观察指标
3.1　大体肉眼观察软骨表面情况。
3.2　HE染色及甲苯胺蓝染色观察关节软骨的形态学变化
并按表 1行 mankin s评分。
3.3　免疫组化法观察软骨中 MMP13的变化　以软骨细胞
胞浆内出现棕黄色为阳性表达 , 正常软骨细胞核为兰色。参
考 Peletier等的方法 , 软骨切片随机选取 6个高倍镜视野
(400倍),其中 3个位于软骨表层和中上层 , 另 3个位于软
骨中下层和下层 , 计算每个视野里的阳性细胞数和细胞总
数。 MMP-13表达量用细胞分数即阳性细胞数占细胞总数
的百比来表示 ,其最大值为 100%。 每块切片的细胞计数分
别两个独立的观察者进行 ,其评分误差率控制在 5%以内 ,
二者均值为最后的得分。
4　统计学处理
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第 30卷　第 5期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
May2008
Vol.30　No.5