全 文 ：3 　讨论
常用的心功能指标有:左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最
大上升速率 (+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)及左心室舒张终末压(LVEDP)。采用多项指标进行综合分
析:LVSP和 +dp/dtmax是与心肌收缩强度相关的指标。 +dp/dtmax
间接反映了心肌纤维收缩成分的缩短速度 ,是一项对心肌变力性
干预十分敏感的指标 ,也是评价心肌收缩性能的常用指标。在一
定程度上受心率及前后负荷的影响并与其呈正相关。当心率 、前
负荷不变或降低时 +dp/dtmax不变或升高 ,同时伴 LVSP升高时表
示心肌收缩性能增强。急性心肌缺血时可使 +dp/dtmax明显降
低 , 心肌收缩功能降低。 -dp/dtmax是心室收缩后左心室内压快
速下降期的最大下降速率 , 反映左心室的舒张功能 , 是心肌缺血
早期心室舒张功能改变的敏感指标。若动脉压不变或降低 , -
dp/dtmax降低则表示左心室舒张功能异常。有文献报道 [ 6] -dp/dtmax减小代表心肌舒张性能降低。左心室舒张终末压 LVEDP的
改变与心室容积 、舒张功能和心室顺应性有关。因此 , LVEDP也
是判断心脏早期舒张功能的较好指标。 LVEDP可以反映心肌的
顺应性并能间接的表示前负荷的大小。当左心室舒张功能不全
或回心血量增加时 LVEDP升高 [ 7] 。本实验在结扎 LAD前 20
min分别给大鼠静脉注射槐定碱 2.5, 5, 10 mg/kg, 能改善由结扎
LAD引起的大鼠急性心肌缺血损伤的 LVSP、 ±dp/dtmax的降低和LVEDP的升高。与假手术组比各药物组心功能指标降低(除 LV-
EDP升高外), 但是与模型组比较均有改善。提示槐定碱能够改
善急性心肌缺血损伤的心功能的变化。因此 ,具有一定的保护作
用。
参考文献:
[ 1 ] 　黄秀梅 , 李　波.六种苦豆子生物碱对炎症介质的白三稀的影响
[ J] .中成药 , 2003, 25(10):824.
[ 2 ] 　黄秀梅 ,李　波 ,沈连忠 ,等.四种苦豆子生物碱对巨噬细胞产生肿
瘤坏死因子的影响 [ J] .中药药理与临床 , 2001, 17(3):12.
[ 3 ] 　杨志伟 ,周　娅 ,曹秀琴.苦豆子生物碱体外抗柯萨奇病毒的作用
[ J] .四川中医 , 2003, 21(3):14.
[ 4 ] 　周　娅 ,王宁萍 ,赵建宁 ,等.槐定碱对小鼠腹腔吞噬细胞功能的影
响 [ J] .辽宁中医杂志 , 2000, 27(2):84.
[ 5 ] 　周炳刚 ,苏　刚 ,马德强.槐定碱诱导人胃癌 MGC-803细胞凋亡
的实验研究 [ J] .肿瘤 , 2003, 23(3):197.
[ 6 ] 　李　乐 ,孙晓东 ,高小利 ,等.绞股蓝总黄酮对麻醉开胸犬血流动力
学的作用[ J] .中药药理与临床 , 2006, 22(3):82.
[ 7 ] 　徐叔云 ,卞如濂 ,陈　修 ,等.药理实验方法学 , 第 3版 [ M] .北京:
人民卫生出版社 , 2002, 976.
收稿日期:2009-08-13;　修订日期:2010-01-03
基金项目:泰山医学院青年基金项目(No.2007051)
作者简介:焦　鹏(1979-),女(汉族),山东淄博人 ,现任泰山医学院生命科学研究所讲师 ,硕士学位 ,主要从事药用植物与肿瘤的研究工作.
＊通讯作者简介:夏作理 (1944-),男 (汉族),山东青岛人 ,现任泰山医学院生命科学研究所教授 ,博士生导师 ,学士学位 ,主要从事中国传统中草药的
临床药理应用研究工作.
白花丹参叶制剂对乳腺癌BCaP-37细胞株增殖抑制的体外研究
焦　鹏 1 , 常　起2 , 王欣农 1 , 李大伟1 , 夏作理 1＊
(1.泰山医学院生命科学研究所 ,山东 泰安　271000;　2.泰山医学院附属医院 ,山东 泰安　271000)
摘要:目的 观察白花丹参叶制剂对于人乳腺髓样癌细胞株 BCaP-37生长的抑制作用。方法 以体外培养的人乳腺癌
细胞株 BCaP-37为靶细胞 , 运用四氮唑盐法(MTT法)观察白花丹参叶制剂作用 12h后对于人乳腺癌细胞株生长的影
响。以流式细胞仪分析其对细胞周期和凋亡率的影响。结果 MTT法结果显示 , 白花丹参叶制剂作用 12h可抑制 BCaP-
37的生长 , 并呈剂量依赖性。流式细胞仪测定结果显示 , 随白花丹参叶制剂浓度的增加 ,凋亡峰越来越显著 , 说明白花丹
参叶制剂可在一定程度上诱导细胞凋亡 ,并且凋亡率与浓度呈正相关;但对细胞周期无明显影响。结论 白花丹参叶制
剂可抑制体外培养的人乳腺癌细胞株 BCaP-37增殖并促使癌细胞凋亡且呈一定的量效关系。
关键词:白花丹参叶制剂;　人乳腺髓样癌细胞株;　细胞增殖;　凋亡
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)02-0350-02
InhibitionofSalviamiltiorrhizabge.f.albaLeafPreparationontheProliferationofHu-
manBreastCarcinomaBCaP-37 Cellsinvitro
JIAOPeng1 , CHANGQi2 , WANGXing-nong1 , LIDa-wei1 , XIAZuo-li1＊
(1.InstituteofLifeSciences, TaishanMedicalColege, Taian271000, China;2.TheAfiliatedHospitalof
TaishanMedicalColege, Taian271000, China)
Abstract:ObjectiveToexploretheinhibitionofSalviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparationontheproliferationofhumanbreastcarcinomaBCaP-37cells.MethodsBCaP-37 cellswerecultivatedwithSalviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparation
for12 hours.TheefectsofSalviamiltiorhizabge.f.albaleafpreparationontheproliferation, apoptosisandcellcycleofBCaP-
37 celswereobservedusingMTTmethodandflowcytometry.ResultsSalviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparationcouldinhibit
thegrowthofBCaP-37 cellsindose-dependentmanner.FlowcytometryanalysisshowedSalviamiltiorrhizabge.f.albaleaf
preparationhasnoefectondistributionofcelcyclebuttheapoptosisrateofcelwasincreasedsignificantlywiththeincreaseof
Salviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparationconcentration.ConclusionSalviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparationcanen-
hancethegrowthinhibitionandapoptosisofhumanbreastcarcinomaBCaP-37cellsinaconcentration-dependentmanner.
Keywords:Salviamiltiorrhizabge.f.albaleafpreparation;　Humanbreastcarcinomacels;　Proliferation;　Apoptosis
·350·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2
　　白花丹参为唇形科植物丹参的变型。常见丹参花为紫色 ,而
白花丹参因其药用价值远大于紫花丹参且濒于灭绝而尤为珍贵。
作为我国传统中草药 , 它安全无毒副作用 , 疗效确切 [ 1, 2] 。现代
医学研究结果表明 ,丹参对治疗心血管疾病 , 改善微循环 , 降脂 、
降压 、抗菌消炎 、抗肿瘤等有一定作用。丹参古今皆以根部入药。
为综合开发利用丹参药物资源 , 已有研究发现其各部位均含有
丰富的微量元素 [ 3, 4] 。本文以人乳腺髓样癌细胞株 BCaP-37为
靶细胞 , 观察白花丹参叶制剂在体外对该细胞增殖的影响 , 并对
其作用机制进行初步研究。
1　器材
1.1　仪器与试剂 FACScalibur流式细胞仪(美国 BD公司),
LG16-W高速微量离心机(北京医用离心机厂), Model550酶标
仪(美国 BIO-RAD公司), MCO-15ACCO2培养箱(日本三洋
株式会社), RPMI1640培养基(Gibco公司), 新生牛血清(杭州四
季青公司),二甲基亚砜(Sigma公司), 噻唑蓝(Sigma公司), 碘
化丙啶(Sigma公司)。
1.2　白花丹参叶制剂制备 白花丹参叶(产自泰山)由山东大学
博士生导师夏作理教授鉴定 ,白花丹参叶制剂由泰山医学院微循
环重点实验室制备。 制备过程如下:称取 50 g自然干燥的白花
丹参叶 ,粉碎 , 过 30目的网眼筛后在 100℃水中浸泡 5min, 过滤 ,
收集上清液 , 旋转蒸发仪蒸馏煮剂后进行冷冻干燥 , 干燥 48h后
大约得到 10g样品 ,置于干燥器中避光 -20℃保存待用 [ 5, 6] 。每
次用时称取适当样品 , 实验前用 RPMI1640培养液(不含血清)稀
释成所需浓度 , 0.22μm滤膜过滤后 , 用于体外实验。
2　方法
2.1　体外细胞增殖抑制实验(MTT比色法)选用人乳腺髓样癌
细胞株 , 取形态良好的对数生长期细胞用于实验 , 以每孔 5×103
个细胞 100 ml接种于 96孔培养板中 , 贴壁 24 h后分别接入不同
浓度的无菌的白花丹参叶制剂溶液 100 μl, 使最终浓度分别为
0.3, 0.5, 0.8g/L, 各组设 4个复孔 , 对照组加 100 μl无血清培
养液 , 在 37℃, 50 ml/LCO2条件下继续培养 12 h, 实验终止前
加入新配制的 5 g/L的 MTT溶液 20 μl, 混匀 , 再继续培养 4 h,
弃去上清 , 每孔加 DMSO200μl, 充分振荡 30 min, 490nm处测
定每孔的吸光度 A值 [ 7] 。 计算相对存活率:相对存活率(%)=
实验孔 A值 /对照孔 A值 ×100%[ 8] 。
2.2　流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率 收集不同浓度白花丹
参叶制剂处理的 BCaP-37细胞为实验组 , 不加药的 BCaP-37
细胞为对照组 , 1 000r/min离心 5 min收集细胞 , 70%冰乙醇固
定 2h,离心后每样品管中加 0.5ml碘化丙啶(PI)染液 , 4℃避光
染色 30min,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率 , 每样品获取 20
000个细胞 [ 9] 。
2.3　统计学处理 采用 SPSS11.5进行统计分析 , 均数比较用 t
检验。所有数据均用 x±s表示。
3　结果
3.1　白花丹参叶制剂对 BCaP-37细胞增殖的影响 白花丹参
叶制剂处理 BCaP-37细胞后 , 能使细胞存活率明显下降 , 并呈
剂量依赖效应(见表 1)。
表 1　不同浓度白花丹参叶制剂对细胞存活率的影响( x±s)
组别 吸光度(A) 存活率(%)
对照 0.904±0.082 -
白花丹参叶制剂 0.3g· L-1 0.772±0.040 85.4±4.4
白花丹参叶制剂 0.5g· L-1 0.610±0.021＊ 67.5±2.3
白花丹参叶制剂 0.8g· L-1 0.475±0.033＊ 52.5±3.7
　　与对照组比较 , ＊P<0.01;n=4
3.2　白花丹参叶制剂对 BCaP-37细胞周期和细胞凋亡的影响
由流式细胞仪分析结果可见 , 白花丹参叶制剂对 BCaP-37细胞
周期影响不大 , 但随着白花丹参叶制剂浓度的增加 , 凋亡峰越来
越显著(见图 1)。在对照组中 , 凋亡峰所占比例为 0.7%;当白花
丹参叶制剂作用浓度为 0.5 g/L时 , 凋亡峰所占比例升高到
3.48%;浓度为 0.8 g/L时 ,凋亡峰所占比例为 17.66%。
a-对照组　b-0.5g/L白花丹参叶制剂处理组
c-0.8g/L白花丹参叶制剂处理组
图 1　白花丹参叶制剂对 BCaP-37细胞周期和凋亡的影响
4　讨论
多年来 ,人们将丹参广泛应用于临床 , 是具有活血化瘀活性
的常用中药。已有研究证明某些活血化瘀类中药有抑癌抗癌作
用(比如单味中药穿山龙), 目前癌症治疗已逐渐趋向统合治疗
并以结合传统治疗 ,透过分子靶点的调控来控制癌细胞的成长 ,
以达相辅相成之效。国内在这方面着重于中药 、尿萃取物及特有
食品等 ,主要是藉清热解毒 、活血化瘀等作用 , 以提升免疫 、促进
细胞凋亡 、增加分化及调控分子靶点 [ 10] 。
本实验显示 ,白花丹参叶制剂在体外能有效地抑制乳腺癌细
胞增殖 ,而且通过流式细胞仪检测也明显发现其能促进 BCaP-
37细胞的凋亡。现代医学研究表明 , 诱导肿瘤细胞凋亡是一条
有效的肿瘤治疗途径 ,作为我国传统中草药 ,白花丹参安全无毒
副作用 , 因此该实验结果不仅对白花丹参这一中药资源的综合开
发利用提供了实验资料 ,而且对临床乳腺癌的治疗可能具有潜在
的应用价值。
参考文献:
[ 1 ] 　李　磊 ,戴金凤 ,王小如 , 等.丹参提取物耐缺氧功能及营养化学
研究 [ J] .食品科学 , 2005, 26(4):232.
[ 2 ] 　焦　鹏 , 王　云 , 李福荣 , 等.泰山白花丹参对人脐静脉内皮细胞
氧化应激损伤的保护作用 [ J].中国现代医生 , 2007, 13(45):14.
[ 3 ] 　高允生 , 齐永秀 , 李　珂 , 等.白花丹参茎叶水提物对小鼠缺氧模
型的保护作用 [ J].中国中医药科技 , 2006, 13(3):171.
[ 4 ] 　李文喆 ,王　勇 , 姚世芳.丹参药用成分研究进展 [ J] .人民军医 ,
2008, 51(3):180.
[ 5 ] 　WuLY, JuanCC, HwangLS, etal.Greenteasupplementationamel-
ioratesinsulinresistanceandincreasesglucosetransporterⅣ contentin
afructose-fedratmodel[ J].EurJNutr, 2004, 43:116.
[ 6 ] 　李大伟 , 张　玲 , 赵晓民 ,等.白花丹参叶水提物对糖尿病大鼠脑
组织损伤的影响 [ J].时珍国医国药 , 2007, 18(11):2632.
[ 7 ] 　ZhangR, GongJ, WangH, etal.Bilesaltsinhibitgrowthandinduce
apoptosisofhumanesophagealcancercellline[ J] .WorldJGastroen-
terol, 2005, 11:5109.
[ 8 ] 　焦　鹏 ,常　起 ,杨明峰 , 等.白花丹参根制剂对胃癌细胞增殖和
凋亡的影响 [ J] .世界华人消化杂志 , 2007, 15(8):820.
[ 9 ] 　曹　宏 , 刁路明 , 夏　东, 等.姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌
A549细胞增殖和凋亡作用 [ J] .武汉大学学报 (医学版), 2008, 29
(2):213.
[ 10]　朱　瑾 , 徐丽华, 孙　萌 ,等.抗癌中草药现代药理研究进展 [ J] .
中外健康文摘(医药月刊), 2007, 4(11):12.
·351·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.2 时珍国医国药 2010年第 21卷第 2期