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狗脊膨化炮制实验研究



全 文 :枝蒿提取液上样浓度为 0.04g生药 / ml,上样量为 10 ml,洗脱溶
剂为 70%乙醇 , 洗脱剂用量为 10倍量树脂体积 , 吸附时间为 30
min,洗脱速度为 3 ml/min, 树脂可重复使用 3次。在此条件下 ,
洗脱物中一枝蒿总黄酮含量达 3.18% 以上 , 总黄酮回收率达
86.91%以上。
样品经过大孔吸附树脂吸附 , 70%乙醇洗脱后 , 对洗脱液蒸
干后的溶解性能进行了考察。结果表明 ,蒸馏水对本样品的总黄
酮有更好的溶解性 , 故在所有条件的考察中 , 洗脱液蒸干后均用
蒸馏水做溶解定容试剂。
大孔吸附树脂是一种人工合成的多聚物吸附剂 ,其吸附能力
是由树脂孔径 、比表面积 、表面电性或形成氢键等因素共同决定
的。这些因素又成为大孔树脂吸附能力大小的影响因素。尽管
大孔吸附树脂自身也存在一些问题 ,如:溶剂和致孔剂残留 、吸附
效果易受流速和上样浓度等的影响等 ,但大孔吸附树脂比其他天
然吸附剂具有不可代替的优点:其不但孔径大小 、比表面积 、极性
等可以任意选择;而且具有吸附快 、解析率高 、吸附容量大 、树脂
再生简单等诸多优势 ,使其在中药及其制剂的研究中应用越来越
多 , 应用前景广阔。
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收稿日期:2007-09-09; 修订日期:2007-12-27
作者简介:袁叶飞 (1973-),男(汉族),湖南隆回人 ,现任泸州医学院讲
师 ,博士学位 ,主要从事中草药化学成分及中药药效研究工作.
狗脊膨化炮制实验研究
袁叶飞1 , 欧贤红 2 , 余 昕 1 , 何 颖1
(1.泸州医学院 ,四川 泸州 646000; 2.桂林医学院 ,广西 桂林 541004)
摘要:目的 研究狗脊不同炮制品醇溶性浸出物量及镇痛的作用。方法 根据《中国药典 》法测定狗脊不同炮制品醇浸出
物的量;采用热板法和扭体法研究镇痛作用。结果 狗脊经去毛炮制后可以提高醇浸出物的量及镇痛作用。结论 膨化
法优于其它方法。
关键词:狗脊; 膨化炮制; 镇痛作用
中图分类号:R283  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2008)07-1751-02
ExperimentalStudiesontheExpandedProcessofRhizomaCiboti
YUANYe-fei1 , OUXian-hong2 ,YUXin1 , HEYing1
(1.LuzhouMedicalColege, Luzhou646000, China;2.GuilinMedicalColege, Guilin541004, China)
Abstract:ObjectiveTostudythecontentofthealcoholextractwithdiferentprocessingmethodsfromRhizomaCibotiandits
analgesiceffect.MethodsAccordingtothe“PharmacopoeiaofthePeoplesRepublicofChina”, thealcoholextractcontentwas
measured.Methodsofmousewrithingresponseandhotplatewereusedtostudyanalgesticaction.ResultsThecontentofalcohol
extractwasincreasedanditsanalgesticactionwasstrengthenedafterRhizomaCibotiwasprocessedandpurified.ConclusionEx-
pandedprocessisbeterthanothermethods.
Keywords:RhizomaCiboti; Expandedprocess; Analgesicaction
  狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.
的干燥根茎。中药狗脊具有补肝肾 、强腰膝 、祛风湿的功效 ,常用
于腰膝酸软 、下肢无力 、风湿痹痛等症 [ 1] 。目前临床上狗脊生制
兼用 , 但以砂烫品入药居多 , 生用较少。狗脊生品及其砂烫炮制
品均具有镇痛作用的药理活性 [ 2] 。狗脊生品密被金黄色茸毛 ,
不易除尽 , 且质硬而坚韧 ,不利于煎煮或粉碎。因此《中国药典》
2005年版规定 , 狗脊加工炮制为砂烫法 , 砂烫后质地松脆 , 易于
除去茸毛 , 便于调剂和制剂。但砂烫狗脊质量不易控制;操作时
间长 , 费工费力 ,不利于大量炒制;而且炒制时高温 、烟熏 、过滤及
除去茸毛时的灰尘影响环境 ,对操作人员的身体健康造成不利影
响。因此进行狗脊炮制的现代化改革意义重大。为此 ,笔者通过
多次实验研究出膨化炮制狗脊的新方法(另文发表)。本实验对
骨碎补的膨化品 、生品 、砂烫品醇浸出物的量及各炮制品镇痛的
作用进行比较研究 ,为应用膨化技术炮制狗脊提供科学依据 。
1 材料
1.1 不同炮制品的制备
1.1.1 狗脊生品 购自南宁医药批发站 , 经广西中医学院中药
鉴定室鉴定为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotiumbarometz(L.)J.
Sm.的干燥根茎。
1.1.2 狗脊砂烫品 根据文献 [ 2] ,取净狗脊片 ,投入加热至 180
~ 190℃的细砂中 ,不断翻动 , 烫至鼓起 ,表面深黄色时取出 ,除去
茸毛。
1.1.3 狗脊膨化品 取净狗脊片 , 置于膨化设备中 , 膨化压力为
1.8 kg/cm2 ,膨化保温时间为 5 min, 将骨碎补膨化(瞬间释压至
常压)至接收器内冷却 ,粉碎 ,过 40目筛备用。
1.2 试剂 复方氨林巴比妥注射液(安痛定注射液):西南药业
股份有限公司生产 ,批号 06100193, 2 ml/支 , 每毫升含氨基比林
50 mg, 氨替比林 20 mg, 巴比妥 9 mg。生理盐水:广西南宁百会
药业集团有限公司生产 ,批号 0507003。
1.3 动物 昆明种小鼠由广西医科大学动物室提供 , 动物许可
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期
证号:SCXK桂 2003-0003。
2 方法与结果
2.1 醇浸出物比较 [ 3] 取骨碎补生品 、砂烫品及膨化品各 4 g,置
100ml的锥形瓶中 ,精密加入 70%的乙醇溶液 50 ml,塞紧 ,称定
重量 , 静置 lh后 , 连接回流冷凝管 , 加热至沸腾 , 并保持微沸 lh;
放冷后 , 取下锥形瓶 ,塞紧 , 称定重量 ,用稀醇补足减失的重量 ,摇
匀 , 用干燥滤器滤过。精密量取滤液 25 ml,置已干燥至恒重的蒸
发皿中 , 在水浴上蒸干后 , 于 105℃干燥 3 h, 移置干燥器中 ,冷却
30 min, 迅速精密称定重量 , 以干燥品计算供试品中醇溶性浸出
物 , 并对三者进行比较。结果见表 1。
表 1 狗脊生品 、砂烫品及膨化品醇浸出物比较
样品 醇浸出物质量 m/g
1 2 3 4 5
平均质量
m/mg
浸出率
(%)
RSD
(%)
生品 0.896 1 0.915 8 0.921 2 0.898 3 0.906 7 0.907 6 22.69 1.19
砂烫品 0.951 3 0.971 8 1.012 0.989 9 1.031 0.991 2 24.78 3.19
膨化品 1.081 1.059 1.143 1.009 1.028 1.064 26.60 1.39
结果表明 , 与生品狗脊相比 , 各炮制品的醇浸出物均有所升
高。测得各炮制品中醇浸出物含量由高到低的顺序依次为膨化
品 >砂烫品 >生品。
2.2 镇痛实验
2.2.1 样品溶液的制备 分别取上述狗脊生品 、狗脊砂烫品 、狗
脊膨化品各 100 g,加 70%乙醇回流提取 3次(90, 60, 30min),合
并滤液 , 减压浓缩溶剂制成浸膏 ,分别用 NaCl注射液配置成浓度
为 1.5 g· ml-1的生理盐水溶液 , 供实验用。取注射用安痛定 9
支加入 42mlNaCl注射液配置成浓度为 0.001 5 g· ml-1的人体
等效剂量的生理盐水溶液 ,供实验作为阳性对照组。
2.2.2 小鼠扭体法 [ 4] 取小鼠 50只 ,随机分为 5组 , 每组 10只。
分别腹腔注射生理盐水 ,安痛定注射液 0.001 5 g· ml-1 ,生狗脊
醇提液 1.5 g· ml-1 ,砂烫狗脊醇提液 1.5 g· ml-1 , 膨化狗脊毛
醇提液 1.5 g· ml-1 ,剂量 10 ml· kg-1体重 ,腹腔注射给药后 30
min,再腹腔注射 0.6%的醋酸 0.2 ml/只 , 比较 15 min内小鼠发
生的扭体次数及计算药物对扭体反应的抑制率。结果见表 2。
表 2 狗脊生品 、砂烫品及膨化品对醋酸扭体反应的影响( x±s)
组别 浓度 C/g· ml-1 扭体次数 扭体抑制率(%)
生理盐水 30.05±10.64
安痛定 0.0015 10.13±5.65** 66.29
狗脊 1.5 18.09±10.01* 39.80
砂烫狗脊 1.5 15.87±8.97** 47.19
膨化狗脊 1.5 12.25±7.98** 59.23
  与生理盐水组比较**P<0.01, *P<0.05;n=10
结果表明 ,狗脊生品 、狗脊砂烫品和狗脊膨化品均能降低因
醋酸刺激引起的扭体反应次数。各炮制品降低因醋酸刺激引起
的扭体抑制率由大到小依次为膨化品 >砂烫品 >生品。
2.2.3 小鼠热板法 [ 3] 调节金属板温度在(55±0.5)℃, 每次取
雌性小鼠 1只 , 放在金属板上。 记录小鼠出现舔后足所需时间
(s),作为该鼠的痛阈值。凡 30s内不出现舔后足者 ,弃之不用。
实验前再测痛阈 1次。将两次痛阈的平均值作为该鼠给药前的
痛阈值 。选取痛阈值在 5 ~ 30 s的小鼠 50只 ,随机分为 5组 , 每
组 10只。分别腹腔注射生理盐水 , 安痛定注射液 0.001 5 g·
ml-1 , 生狗脊醇提液 1.5 g· ml-1 ,砂烫狗脊醇提液 1.5 g· ml-1 ,
膨化狗脊醇提液 1.5 g· ml-1 , 剂量 10 ml· kg-1体重 , 腹腔注射
给药 30min后 ,开始测定小鼠的痛阈值。每隔 30 min测定 1次 ,
共 3次。与给药前自身比较以及与生理盐水组比较。若小鼠在
热板上 60s仍无痛觉 , 应立即取出 ,按 60s计算。结果见表 3。
表 3 狗脊生品 、砂烫品及膨化品对小鼠热板反应的影响( x±s)
组别 浓度C/g· ml-1
给药前
痛阈值 t/s
给药后痛阈值t/s
30min 1.0h 1.5h
生理盐水 22.12±6.62 23.19±6.03 24.56±6.98 25.31±7.12
安痛定 0.0015 21.29±6.12 60.23±13.96**## 62.32±14.54**## 64.88±16.55**##
狗脊 1.5 20.88±5.78 32.77±10.55**## 34.68±11.36**## 36.21±13.27**##
砂烫狗脊 1.5 21.96±6.02 40.55±12.88**## 42.76±14.35**## 45.12±13.78**##
膨化狗脊 1.5 22.95±5.49 48.66±13.25**## 50.21±14.10** ## 52.37±16.10**##
  与给药前自身比较 , **P<0.01;与生理盐水组比较 , ##P<0.01
  表 3结果表明 , 狗脊不同炮制品对热刺激引起的疼痛反应均
能明显提高小鼠的痛阈值 , 有显著的镇痛作用。各炮制品提高小
鼠的痛阈值由长到短依次为膨化品 >砂烫品 >生品。
3 讨论
狗脊 3种不同炮制品中醇浸出物测定结果表明 ,狗脊膨化品
的醇浸出物含量最高 ,其次为砂烫品 , 最低的为生品 。狗脊经砂
烫和膨化后 , 有利于去毛 ,有利于醇溶物的浸出。
本实验采用化学刺激 、热刺激两种实验方法对狗脊不同炮制
品进行镇痛作用研究。结果表明 , 狗脊各炮制品均具显著的镇痛
作用。比较炮制对狗脊镇痛作用的影响 , 结果表明 炮制后作用
有所增强 , 以膨化品作用最强且持久 ,其次是砂烫品 ,再其次是狗
脊生品。
《中国药典》 2005年版规定 ,狗脊的炮制方法为砂烫法 , 目的
是使药材经高温处理后质地疏松 , 利于煎出有效成分。 但是 , 砂
炒至药材疏松状不易把握火候 ,往往因为以砂为媒介导致受热不
均 , 出现一部分药材已发生炭化而另一部分药材却炮制不彻底的
缺陷。膨化炮制法是将食品膨化应用于中药炮制 , 使硬质药材在
一定的温度和压力下均匀受热 , 在突然减压的情况下 ,药材分子
间的引力受到破坏 , 而达到质地疏松的目的。
本实验证明 ,采用膨化技术炮制狗脊 ,有利于去毛 , 膨化炮制
后质地疏松 , 有利于有效成分的溶出 ,从而提高药效。与砂烫法
相比较 ,膨化法操作简便 ,只需掌握压力和时间即可 , 既缩短了加
工周期 ,又避免了砂烫法烟熏 、灰尘及挥发气体对操作人员身体
的影响。本实验为应用膨化技术炮制狗脊提供了科学依据 ,值得
推广。
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7