全 文 ：狗脊及其混淆品蛋白多肤高效毛细管电泳法鉴别
第一军医大学南方医院 (广 州 1 5 5 01 5)许重远 陈振德 刘建武 陈志 良 侯连兵
广东工业大学化工系 (广州 1 5 0 9) 0张 娓
摘要 目的 : 对狗脊及其混淆品进行蛋白多肤电泳鉴别 。 方法 : 采取高效毛细管电泳法对狗脊及
其混淆品蛋白多肤进行分析 。 结果 : 狗脊及其混淆品蛋白多肤高效毛细管电泳谱图有明显的差异 。 结
论 : 高效毛细管电泳可作为中药狗脊的生药鉴别方法 。
关键词 狗脊 高效毛细管电泳 生药鉴别
狗脊为蚌壳旅科植物金毛 狗脊 a 如 t in l u
乙
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招 ( L
.
) J
.
Sm
. 的干燥根茎 , 历版中国药
典均有收载 。 本品具有补肝肾 、 强筋骨 、 舒经
络、 除湿痛及利尿的功能 , 用于腰腿酸痛 、 手
足麻木 、 半身不遂 、 白带遗精 、 血崩等症 以及
用于治疗骨瘤 、 骨肉瘤 、 颅内肿瘤 、 骨髓瘤 〔` 〕
等。 狗脊为常用中药 , 也是我国重要 出口药材
之一图 。 据调查 , 河南 、 陕西及 山西等省除习
用狗脊外 , 省 内局部地 区尚自产 自销一类黑狗
脊 , 植物来源多种 , 均为旅类植物 3[J 。 狗脊的
显微鉴别操作繁琐 , 而荧光分析和理论鉴别专
属性不强图 。 我们拟以中药材细胞中普遍存在
的、 受遗传基因控制的蛋 白多肤分子 为指标 ,
用近年来迅速发展的新型分离分析技术高效毛
细管电泳法来鉴别狗脊 。
1 材料与方法
1
.
1 材料 生药狗脊 iC加 it um 旅~
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J
.
mS
. 采集于云南景洪 ; 药材狗脊 (炮炙 ) 收
集于南方医院中药房 ; 黑狗脊收集于河南周 口
地区 , 尚无法鉴定其来源为何种蔗类植物 。
1
.
2 仪器与试剂 美国 BI O 一 RA D 公司 iB oF o -
e u尹M30 型 c ap mayr lon A n a ly z e r , 配有紫外扫
描检测器 。 熔融石英毛细管 75 拼m x 60 c m (河
北永年光纤厂 ) 。 所用试剂均为分析纯 。
1
.
3 电泳条件 电解缓冲液为 30 ~ F
L 硼
酸盐溶液 ( p H 8 . 5 ) ; 电压 为 20 VK ; 温 度
加℃ ; 紫外检测波长 20 n m ; 重力进样 , 时间
5 5
。 开机后先用 0 . 1 m o F L 氢氧化钠冲洗毛细
管 2 而 n , 再用去离子水冲洗 5 而 n , 然后用缓
冲液冲洗至基线平稳后开始进样 。 每两次进样
中药材第 2 卷第 7 期 199 年 7 月
之间设定缓冲液冲洗 2 m in 。
1
.
4 样品溶液的 配制 取 生药样 品 0 . 5 9,
加人蛋 白提 取液 5 间 , 在 冰浴 中研磨成 匀浆
状 , 转移至 离心管 内 , 以 5以叉〕 r/ m in 离 心 20
m in
, 取上清液备用 。 irT s 一甘氨酸蛋 白提取液 :
irT
s 0
.
6 9
, 甘氨酸 2 . 8 9 , 加 蒸馏水 溶解 至
1以X) 以 。 碱性 蛋 白提取 液 : T isr 一H CI 0 . 1 lon l/
L
,
0 1%抗坏血酸 , 琉 基乙醇 10 ~ F
L
,
p H
8
.
0
。 酸 性 蛋 白提 取液 : 柠檬酸 80 ~ l/ L,
N aZ H I
〕
0 4 32 ~
o F L
, 抗坏血酸 5 ~ ol / L
, 琉基
乙醇 10 morn l/ L
,
p H 2
.
8
。
2 结果
2
.
1 在 3 种提取液中 , 黑狗脊在 6 . 5 一 7 m in
区间有一特征吸收峰 ; 而狗脊 (生药或药 材 )
均无此吸收峰 。
2
.
2 在碱 性提取液 中 , 狗脊 (生药 或药材 )
在 17 一 20 im n 区 间有多重指纹图谱峰 , 而黑 狗
脊无此指纹图谱 。
2
.
3 在 中性提取液 中 , 黑狗脊除 在 6 . 5 一 7
m in 区间的特征吸收峰明显外 , 其它吸收峰基
本不明显 ; 而生药狗脊和药材狗脊主要特征峰
基本一致 。
2
.
4 在 酸性提取液 中 , 黑狗脊除在 6 . 5 一 7
而 n 区间的特征吸收峰外 , 其最大吸收峰有 一
肩峰 ; 而狗脊 (生药或药材 ) 无这两个峰 , 但
生药狗脊的最大吸收峰不明显 。
综合 3 种提取液所检测的图谱 , 可以看出
黑狗脊与狗脊的 H PC E 图谱存在显著差异 , 而
生药狗脊 (未炮炙 )与药材狗脊 (炮炙 )可从酸性
提取液 所检测 的图谱加 以 区别 (见 图及表 ) 。
.
3 37
.
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 1999. 07. 007
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狗脊及其混淆品蛋白多肤电泳图谱
A
.黑狗脊 B .狗脊 (生药 , 未炮炙 )
1
. 酸性提取物 2 . 中性提取物
C
. 狗脊 (药材 , 炮炙 )
3
. 碱性提取物
表
名称
狗脊及其混淆品电泳图谱中各峰的迁移时间 ( m in )
酸性蛋白多肤 碱性蛋白多肤
黑狗脊 6 . 77 , 10 . 59 , 12 . 37 s h , 12 . 50
15
.
13
中性蛋白多肤
6
.
83
,
1 0
.
58
,
12
.
2 2
,
1 3
.
47
1 3
.
77
.
15
.
1 0
6
.
85
,
13
.
17
10
.
8 1
,
12
.
47
,
13
.
84
,
1 4
.
98
1236,.l30一狗脊 (未炮炙 ) 10. 79, 12 . 38 , 1 3 . 16 , 19 . 52 l Ol 9 . 52 s h , 1 0 . 68 , 12 . 2 7 , 13 . 30. 07 10 . 25 ,13 . 4 0 ,19 . 84
10
.
3 3
,
13
.
5 9
,
10
.
7 1
,
13
.
6 1
,
05
,
13
.
7Q
,
1 9
.
05
,
10
.
10
,
10
.
57
,
11
.
87
s
h 12
.
12
,
8 5 12
.
83
,
13
.
27
,
13
.
43
,
19
.
15
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0了狗脊 (炮炙 ) 10 . 65 , 12 . 15 , 一9 . 35
从而达到鉴别的 目的 。
23
参 考 文 献
张民 庆 , 等 . 抗肿瘤 中药的临床应用 . 北京 : 人
民卫生出版社 , 19 8 : 390
陈绍基 . 狗脊的炮制 . 中药通报 , 1987 , ( 6) : 29
中国医科院药物所 . 中药志 (第二册 ) . 北京 : 人民
卫生出版社 , 19 82 : 4 39
( 199 9
一
04
一 16 收稿 )
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33 8 中药材第 2 卷第 7 期 19 9 年 7月