全 文 ：鸡矢藤提取物对酵母膏和氧嗪酸钾致小鼠高尿酸血症的影响
颜海燕 ,马　颖 ,刘　梅 ,周兰兰
摘要　目的　探讨鸡矢藤提取物(EPS)对酵母膏和氧嗪酸
钾致小鼠高尿酸血症的影响及可能的作用机制。方法　采
用酵母膏和氧嗪酸钾造成小鼠高尿酸血症模型 , 观察 EPS
对模型小鼠血清尿酸水平及体重和肾功能的影响 ,并进一步
观察其对模型小鼠黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶的抑制作用。
结果　EPS(6.3、3.15、 1.57 g/kg, ig, qd×14 d)在显著降低
高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的同时 ,对模型小鼠体重和肾
功能均无明显影响;EPS(6.3、 3.15、 1.57 g/kg, ig, qd×14 d)
可显著抑制高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶的活性 , EPS
(6.3 g/kg)对模型小鼠血清腺苷脱氨酶的活性也具有一定
的抑制作用。结论　EPS可显著降低酵母膏和氧嗪酸钾致
高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平 ,其机制可能与抑制黄嘌呤
氧化酶和腺苷脱氨酶活性有关。
主题词　鸡矢藤 /药理学;高尿酸血症 /药物疗法;黄嘌呤氧
化酶 /代谢;腺苷脱氨酶 /代谢;尿酸 /血液;疾病模型 ,动物
自由词　鸡矢藤提取物
中图分类号　R589.905.31;R965.1;R977.3;R446.112
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2007)06-0676-03
2007-10-16接收
基金项目:安徽省优秀青年科技基金(编号:06043095)
作者单位:安徽医科大学药理学教研室 ,合肥　 230032
作者简介:颜海燕 ,女 ,硕士研究生;
周兰兰 ,女 , 教授 ,硕士生导师 , 责任作者 , E-mail:lanlzhou
@yahoo.com.cn
　　痛风是一种由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸及
(或)尿酸排泄减少 ,并在体内蓄积所致的一组代谢
性疾病 。高尿酸血症是痛风的前提与生化基础 ,因
此预防和治疗高尿酸血症对痛风患者可起到积极的
作用。鸡矢藤提取物(extractsofpaederiascandens,
EPS)是从茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤中提取的一
类有效成分 ,其主要活性成份为鸡矢藤苷 、鸡矢藤次
苷 、车叶草苷 、r-谷甾醇及挥发油等 。我们的前期研
究结果发现 , EPS对酵母膏 (yeastextractpaste,
YEP)致高尿酸血症模型动物的血尿酸水平有较好
的调节作用 。本实验在上述研究基础上 ,采用 YEP
和氧嗪酸钾致高尿酸血症的造模方法 ,进一步观察
EPS对小鼠高尿酸血症的影响及可能的作用机制。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂　EPS,本教研室自制 ,棕黄色粉
末;别嘌呤醇(alopurinol, AP)上海信宜万象药业股
份有限公司 ,批号:061001;YEP,北京奥博星生物技
术有限公司生产 ,批号:070301;氧嗪酸钾盐(potas-
siumoxonate, OA)为 AldrichChemicalCompany产
品 ,批号 17029KE;黄嘌呤(xanthine, X)Sigma公司
产品 ,批号 096K5313;黄嘌呤氧化酶 (xanthineoxi-
dase, XO)Sigma公司产品 ,批号 105K37851;尿酸
(uricacid, UA)测定试剂盒 ,上海荣盛生物技术有限
公司 ,批号 20061215;腺苷脱氨酶(adenosinedeami-
nase, ADA)、肌酐(creatinine, Cr)及尿素氮(bloodu-
reanitrogen, BUN)测试盒 ,南京建成生物工程研究
所 ,批号 20070330。
1.2　动物　昆明种小鼠 , ♂,体重(25±2)g,安徽
医科大学实验动物中心提供 ,普通级 。在恒温(22
℃)、相对湿度 65% ～ 70%、光照周期 12 h∶12 h环
境中适应饲养 1周后实验。
1.3　方法
1.3.1　高尿酸血症模型的建立　选用 YEP和 OA
为造模试剂建立高尿酸血症模型 ,参照文献 [ 1 -2]
略作改进 ,除生理盐水(NS)组外 ,小鼠 YEP30 g/
(kg· d)灌胃给药 ,每天 1次 ,连续 14 d, 14 dYEP
给药后再腹腔注射 OA300 mg/kg1次 。
1.3.2　分组和给药方法　小鼠 60只 ,随机分组 ,每
组 10只:即 NS组 、模型组 、EPS组(6.3、3.15、1.57
g/kg)和 AP阳性对照组(40 mg/kg)。除 NS组外 ,
小鼠 YEP30 g/(kg· d)灌胃给药 ,每天一次 ,连续
14 d,造模第 5天起各用药组每天灌胃给药 1次 ,直
至 14 d;14d给药前 1 h,除 NS组注射等量 NS外 ,
各组腹腔注射 OA300 mg/kg。给药前(0d)、3、7、14
d分别称量动物体重 1次 。 14 d给药后 1 h从小鼠
眼眶后静脉丛采血 ,室温下自然凝血 1 h,在 3 500
×g离心 10 min, 取上清用于血 UA、ADA、Cr和
BUN活性的测定 。同时快速取其肝脏用于 XO和
ADA活性的测定。血清 UA、ADA、Cr和 BUN及肝
脏 ADA活性的具体测定方法参照试剂盒说明书进
行。
1.3.3　肝脏 XO活性的测定　按照文献 [ 3] , 4 ℃
下快速取出小鼠肝脏 ,称重后加入 5倍体积的 80
mmol/L磷酸盐缓冲液 (pH7.4),在冰浴中充分匀
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浆 , 4℃下 3 000×g离心 10 min,取上清液 4 ℃下
10 000×g离心 60min,取上清液采用分光光度法测
定 XO活性。采用 Lowry方法测定上清液中蛋白含
量 。
1.4　统计学处理　用 SPSS13.0统计软件进行处
理 ,数据以 x±s表示。重复测量资料采用重复测量
资料的方差分析 ,多组间两两比较采用单因素方差
分析(LSD法),方差不齐者采用 DunnetT3法。
2　结果
2.1　EPS对高尿酸血症小鼠体重的影响　重复测
量资料方差分析 , F=144.740, P<0.01。相同时段
内的多组间比较采用单因素方差分析 , 0、3、7 d各
组之间比较差异无显著性 。 14 d各组之间差异有
显著性 ,与 NS组比较 ,模型组小鼠的体重无明显的
变化;与模型组相比 , EPS各剂量对高尿酸血症小鼠
的体重无明显影响 ,别嘌呤醇组小鼠的体重显著下
降(P<0.05)。同时在实验过程中观察到 ,别嘌呤
醇组小鼠出现体毛欠光泽 ,精神欠佳 ,其余各组皮毛
白而润泽 ,活动自如 ,反应灵敏 ,一般状态较好 。
2.2　EPS对高尿酸血症小鼠肾功能的影响　结果
见表 1。与 NS组相比 ,模型组小鼠的血清 BUN和
Cr水平差异均无显著性。与模型组相比 , EPS各剂
量对高尿酸血症小鼠的血清 BUN水平无明显影响 ,
AP能显著提高高尿酸血症小鼠的血清 BUN水平
(P<0.01)。与模型组相比 ,各用药组的血清 Cr水
平差异均无显著性。
表 1　EPS对高尿酸血症小鼠肾功能的影响(n=10, x±s)
组别 剂量(g/kg) BUN(mmol/L) Cr(μmol/L)
NS - 6.89±1.18 121.48±14.79
模型 - 6.20±0.95 122.06±24.78
AP 0.04 8.50±0.77＊＊ 126.66±16.33
EPS 6.30 6.98±1.17 124.15±20.85
3.15 6.84±1.53 120.47±19.51
1.57 7.01±0.65 124.65±15.67
　　与模型组比较:＊＊P<0.01
2.3　EPS对高尿酸血症小鼠血清 UA水平的影响
　结果见表 2。与 NS组比较 ,模型组血清 UA水平
明显升高 ,差异有显著性(P<0.01)。与模型组相
比 , EPS高 、中 、低剂量均可显著降低高尿酸血症小
鼠血清 UA水平(P<0.01, P<0.01 , P<0.05)。AP
组也显著地降低高尿酸血症小鼠血清 UA水平(P<
0.01)。
表 2　EPS对高尿酸血症小鼠血清 UA水平的影响(n=10, x±s)
组别 剂量(g/kg) UA(mg/L)
NS - 30.7±0.22
模型 - 46.4±0.51■
AP 0.04 29.7±0.53＊＊
EPS 6.30 31.1±0.21＊＊
3.15 30.4±0.21＊＊
1.57 35.6±0.25＊
与 NS组比较:■P<0.01;与模型组比较:＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.4　EPS对高尿酸血症小鼠肝脏 XO活性及血清 、
肝脏 ADA活性的影响　结果见表 3。与 NS组比
较 ,模型组 XO浓度明显升高 ,差异有显著性(P<
0.01)。与模型组比较 , EPS高 、中 、低剂量均可显著
抑制模型小鼠肝脏 XO活性(均 P<0.01), AP亦可
显著抑制该酶活性(P<0.01)。与 NS组比较 ,模型
组小鼠血清及肝脏中的 ADA活性有所升高 ,但差异
无显著性 。与模型组比较 , EPS高剂量可显著降低
高尿酸血症小鼠血清中的 ADA活性 (P<0.05),
EPS中 、低剂量也可不同程度地降低高尿酸血症小
鼠血清中的 ADA活性 ,但差异无显著性 , AP组的
ADA活性无明显变化。与模型组比较 ,各组肝脏中
ADA活性变化不大。
表 3　EPS对高尿酸血症小鼠肝脏 XO活性及血清 、
肝脏 ADA活性的影响(n=10, x±s)
组别 剂量(g/kg)
XO〔nmol/(min·
mgprot)〕
血清 ADA
(U/ml)
肝 ADA
(U/mgprot)
NS - 4.38±0.45 6.20±0.64 6.40±1.06
模型 - 4.75±0.23■ 6.45±0.68 6.88±0.44
AP 0.04 2.85±0.21＊＊ 6.44±0.87 6.91±0.64
EPS 6.30 3.91±0.40＊＊ 5.23±1.67＊ 6.37±0.60
3.15 3.81±0.37＊＊ 5.48±1.59 6.67±0.76
1.57 3.94±0.30＊＊ 6.10±0.83 6.93±1.02
与 NS组比较:■P<0.01;与模型组比较:＊P<0.05, ＊＊P<0.01
3　讨论
近年来 ,痛风的发病率呈上升趋势 ,由于高尿酸
血症与痛风 、糖尿病 、高血压 、冠心病 、高脂血症等很
多疾病都有密切的相关性[ 4-5] 。所以对高尿酸血症
的研究具有十分重要的现实意义 ,加强对痛风等疾
病防治药物的研究日益重要 。
塑造与临床相近的高尿酸血症动物模型是研究
防治高尿酸血症药物药效的基础 。 YEP致小鼠高
尿酸血症模型简便有效 [ 1] ,此模型利用 YEP中含有
的大量蛋白质和核酸 ,在体内水解产生含氮的有机
碱和磷酸 ,干扰机体正常的嘌呤代谢 ,致嘌呤代谢紊
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乱 ,从而加速尿酸生产致高尿酸血症。此模型在短
期内有效但具有一定的缺陷 ,因为小鼠体内存在尿
酸酶 ,可将尿酸进一步分解成尿囊素排出体外 ,因而
此模型制备的高尿酸血症模型在 3周以后具有一定
的自愈性。与鼠类相比 ,人类缺乏尿酸酶 ,尿酸作为
嘌呤代谢的终产物排出体外 ,因而人类易罹患高尿
酸血症等症 。本实验在 YEP模型的基础上进一步
加用 OA就可使动物的血 UA水平维持在高水平
上 ,因为 OA是有效的尿酸酶抑制剂 ,可以抑制 UA
的分解 ,使动物的血 UA水平维持在高水平 。因而 ,
YEP和 OA复合致高尿酸血症是更为有效的高尿酸
血症模型。
本实验研究结果显示 , EPS高 、中 、低剂量组均
可明显降低 YEP和 OA复合致高 UA血症小鼠的血
清 UA水平 ,对小鼠的体重无明显影响;而 AP在降
低高尿酸血症小鼠血清 UA水平的同时 ,可明显降
低小鼠的体重 ,对动物一般状态影响较大 。血清 Cr
和 BUN含量的高低是衡量肾功能的重要指标 ,本实
验研究结果显示 ,除 AP可使小鼠血清 BUN显著升
高外 ,其余各组 Cr和 BUN含量均无明显变化 ,说明
使用 YEP和尿酸酶抑制剂造小鼠高尿酸血症模型 ,
不损害动物的肾功能 ,另一方面也说明了 EPS在降
低模型动物血清 UA水平时 ,对动物的肾功能无明
显影响 ,具有一定的安全性 。
XO在调控 UA生成过程中发挥关键的作用 ,前
期研究结果显示 , EPS对 YEP致小鼠高尿酸血症的
降尿酸作用与其抑制 XO活性有关 ,本实验研究结
果也显示 , EPS高 、中 、低剂量组均可明显抑制模型
小鼠的肝脏 XO活性 ,此结果进一步证实了 EPS的
降尿酸作用很可能与其抑制 ADA的活性有关。另
外 ,实验结果也显示 , EPS高剂量可降低模型小鼠的
血清 ADA活性 ,提示 EPS的降 UA作用可能与降低
血清中的 ADA活性也有一定关系。对此我们推测 ,
在 UA的生成过程中 ,由于 ADA的活性降低 ,可直
接导致次黄嘌呤的生成减少 ,从而抑制了尿酸生成
的主要途径 ,导致 UA的生成减少而降低血清的 UA
水平 ,此推论还有待进一步证实。
参考文献
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Efectofextractsofpaederiascandensonmouse
hyperuricemiainducedbyyeastandpotasiumoxonate
YanHaiyan, MaYing, LiuMei, etal
(DeptofPharmacology, AnhuiMedicalUniversity, Hefei　230032)
Abstract　Objective　Tostudytheefectofextractsofpaederiascandens(EPS)onmousehyperuricemiainduced
byyeastandpotasiumoxonateanditsposiblemechanisms.Methods　Amousehyperuricemiamodelwasestab-
lishedbyusingyeastandpotassiumoxonateandtheefectofEPSontheserumuricacidlevel, weightandrenal
functionofhyperuricemiamousewasobserved.TheinhibitionefectofEPSonxanthineoxidaseandadenosinede-
aminasewasfurtherstudied.Results　EPS(6.3, 3.15, 1.57 g/kg, igqd×14 d)reducedthelevelofserumuric
acidandsignificantlyinhibitedtheliverxanthineoxidaseinhyperuricemianmousebuthadnoefectonweightand
renalfunction.ItshowedthatEPS(6.3g/kg)couldinhibittheadenosinedeaminase.Conclusion　EPScouldre-
ducethelevelofserumuricacidinhyperuricemiamouseinducedbyyeastandpotassiumoxonateandtheefectis
relatedtoitsinhibitionofxanthineoxidaseandadenosinedeaminase.
MeSH　paederiascandens/pharmacology;hyperuricemia/drugtherapy;xanthienoxidase/metabolism;adenosine
deaminase/metabolism;uricacid/blood;diseasemodel, animal
Freeword　extractsofpaederiascandens
·678· 安徽医科大学学报　ActaUniversitatisMedicinalisAnhui　2007 Dec;42(6)