全 文 ：第 34 卷第 6 期
2015 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 34 No． 6
Dec． 2015
收稿日期:2015 － 05 － 12
基金项目:江苏省镇江市社会发展项目(SH2014062);博士后基金(2012M521023)。
作者简介:王丹，女，硕士研究生，主要从事中药化学成分及药理活性研究。
* 通讯作者:汤建，男，博士，副教授。E － mail:jt． u@ hotmail． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2015． 06． 006
虎刺提取物对 CCl4 致肝损伤的保护作用
王 丹1，马瑞丽1，张 蓉1，苏兆亮2，汤 建1* ，欧阳臻1
(江苏大学 1．药学院;2．基础医学与医学技术学院，江苏 镇江 212013)
摘 要 目的:研究虎刺提取物对 CCl4 致小鼠急性肝损伤的保护作用及与所含蒽醌类化合物之间的量效关系。
方法:小鼠分为模型组，正常组，阳性药组(联苯双酯)，石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、水部位组和 75%乙醇提取
物组。正常组小鼠每日灌胃(ig)生理盐水 10 mL·kg －1，阳性对照组联苯双酯 200 mg·kg －1，药物组按 300 mg·kg －1
(高剂量组)、150 mg·kg －1(低剂量组)剂量给药。连续给药 6 天后小鼠按剂量 10 mL·kg －1腹腔注射(ip)0． 1 %
CCl4花生油溶液，心脏取血，测血清谷丙转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)活性，并取肝脏做组织切片观察其病理学
形态变化。采用高效液相(HPLC)法初步分析，采用醋酸 －甲醇显色法测定各样品中总蒽醌的含量。结果:与模型
组相比，虎刺水部位(300 mg·kg －1)能明显降低小鼠血清中 ALT、AST的含量(p ＜ 0． 01)，水部位(150 mg·kg －1)和
75%乙醇提取物(300 mg·kg －1)也能降低 ALT、AST的含量(p ＜ 0． 05)。病理切片发现水部位和总提物能明显减轻
肝组织病理学症状。结论:虎刺提取物具有明显的肝保护作用，其中水部位活性最强，保护活性可能与蒽醌化合物
有关。
关键词 虎刺;CCl4 致肝损伤;总蒽醌;HPLC
中图分类号:Ｒ285 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2015)06 － 0020 － 04
Protective Effect from Different Extracts of Damnacanthus indicus
against CCl4-induced Liver Injury in Mice
Wang Dan1，Ma Ｒuili1，Zhang Ｒong1，Su Zhaoliang2，Tang Jian1* ，Ouyang Zhen1
(1． School of Pharmacy;2． School of Medical Science and Laboratory Medicine，Jiangsu University，
Zhenjiang 212013，China)
Abstract Aim:To study the protective effect from different extracts of Damnacan indicus against CCl4-
induced acute liver injury in mice，as well as the relationship with the contents of total anthraquinones．
Methods:Mice were divided into 11 groups． Mice in model and normal groups were administrated (ig)
with saline at 10 mL·kg －1 daily． Mice in positive group were administrated (ig)bifendate，200 mg·
kg －1 ． Tested groups were administrated (ig)at 300 mg·kg －1(high dose group)and 150 mg·kg －1(low
dose group)，respectively． After consecutive 6 days，the mice were administrated (ip)with CCl4 solution
in peanut oil at 10 mL·kg －1 ． The aspartate aminotransferase (ALT)，alanine aminotransferase (AST)
levels in cardiac blood serum were tested． The liver biopsy morphology was evaluated． Each sample was
analyzed for determining the content of total anthraquinones and chemical profile． Ｒesults:Water-soluble
fraction (300 mg·kg －1)could significantly deduced ALT，AST levels (p ＜ 0． 01)． Water － soluble frac-
tion (150 mg·kg －1)and 75% ethanol extract (300 mg·kg －1)could lower ALT，AST levels to some de-
gree (p ＜ 0． 05)． Water － soluble fraction and 75% ethanol extract could significantly reduce areas of
necrosis of liver tissue． Conclusion:The water － soluble fraction had remarkable protective effects on liver
injury，which could be associated with the contents of total anthraquinones．
Key words Damnacanthus indicus;liver injury;total anthraquinones;HPLC
—02—
第 6 期 王 丹，等:虎刺提取物对 CCl4 致肝损伤的保护作用
虎刺 (Damnacanthus indicus)，又名绣花针，小
黄连，分布于长江流域及以南地区，中医上主要用于
治疗肝炎、风湿痹痛、黄疸水肿等病症［1 － 2］，同时也
是瑶药中具有代表性的药材之一，用于治疗肝炎、身
体虚弱及小儿疳积等［3］。该植物中报道较多的是
以大黄素为代表的蒽醌类化合物［4 － 7］。
本实验研究虎刺 75%乙醇提取物以及三种萃
取部位的保肝活性，以及各部位中总蒽醌化合物的
含量，以期发现虎刺中蒽醌类化合物含量与保肝活
性的关系，对虎刺的开发提供参考。
1 材料与仪器
1． 1 材料与试剂
虎刺药材于 2009 年 9 月购于亳州药材市场(产
地 湖南)，经江苏大学药学院欧阳臻教授鉴定为茜
草科虎刺属植物 Damnacanthus indicus (Linn．)
Gaertn． f．。芦丁标准品和大黄素标准品(中国药品
生物制品鉴定所);联苯双酯(国药集团);清谷丙转
氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒(南京建成生
物工程研究所);CCl4(分析纯);甲醇(色谱纯)和双
蒸水。
1． 2 仪器与设备
UV －2102PCS 型紫外 －可见分光光度计，尤尼
柯(上海)仪器有限公司;LC － 20A 高效液相色谱
仪，日本岛津;精密电子天平，北京赛多利斯仪器系
统有限公司;LOOYE ZX98 － 1 旋转蒸发仪，上海鲁
伊工贸有限公司;酶标仪，MolecuLar Device公司。
2 方 法
2． 1 样品的制备
200 g虎刺药材粉碎至 10 ～ 20 目，加至 75%乙
醇 1 000 mL中，回流提取 2 h × 3，提取液合并、浓缩
至无醇味 (约 200 mL)，取其中 20 mL 浓缩液蒸除
溶剂，得到 3． 0 g浸膏。其余部分分别用 150 mL ×3
石油醚、乙酸乙酯萃取，蒸除溶剂后得石油醚部位
0． 3 g，乙酸乙酯部位 2． 6 g。剩余水部位上 HP20 大
孔吸附树脂，3 BV 水洗除去无机盐、黏液和寡糖等
杂质，再用 3 BV 90%乙醇洗脱，收集该部位，蒸除溶
剂、冻干得粉末 4． 0 g。样品冷藏于 － 20℃冰箱中
备用。
2． 2 保肝活性测试
参照文献［8 － 9］，88 只 ICＲ 小鼠(20 ± 2)g，雌雄
各半，随机分成 11 组，每组 8 只，分别为模型组，正
常对照组，联苯双酯组，石油醚部位高、低剂量组，乙
酸乙酯部位高、低剂量组，水部位高、低剂量组和总
提物高、低剂量组，ig给药。模型组和正常对照组小
鼠每日生理盐水 10 mL·kg －1，阳性对照组每日联苯
双酯 200 mg·kg －1，其它药物组按 300 mg·kg －1(高
剂量组)、150 mg·kg －1(低剂量组)剂量给药。每日
一次，连续 6 天。于末次给药或生理盐水后 4 h，除
正常组小鼠 ip生理盐水 10 mL·kg －1外，其余六组小
鼠分别 ip 0． 1 % CCl4花生油溶液 10 mL·kg
－1(0． 2
mL /只)。禁食，自由饮水，18 h 后心脏取血，3500
r /min 离心 10 min，取上清液，参照试剂盒说明书操
作，于 450 nm下测定 ALT，AST 指标。同时做肝脏
病理组织学检测，石蜡包埋切片，HE 染色，光镜下
观察肝脏病理组织学改变。
2． 3 总蒽醌含量测定
参照文献［10］制备标准品大黄素的标准曲线:A
= 51． 184C － 0． 0013 (Ｒ2 = 0． 9999)，浓度 0． 1 ～ 2． 0
μg·mL －1范围内线性良好。供试液(1 mg /mL，甲
醇)各 1 mL于 10 mL容量瓶中，加 0． 5% 醋酸镁 －
甲醇溶液至刻度，摇匀。同时，以 0． 5%醋酸镁 －甲
醇溶液为空白对照，在 511 nm 处测定吸光度，计算
即得总蒽醌的含量。
2． 4 样品的 HPLC分析
GraceSmart ＲP 18 柱(4． 6 mm × 250 mm，5
μm)，柱温:25 ℃，流动相 A:双蒸水，流动相 B:色谱
甲醇，梯度洗脱 (0 min，25% B;25 min，60% B;35
min，100% B;45 min，100% B)，流速:0． 8 mL·
min －1，检测波长:270 nm，进样量 20 μL。样品 25
mg 溶于 25 mL 容量瓶中，进样前 0． 45 μm 滤膜
过滤。
2． 5 统计学处理
数据以 x表示，Excel完成数据分析。组间比较
采用方差分析和 t检验。
3 结 果
3． 1 对血清 ALT、AST活性的影响
如表 1 所示，虎刺水部位高剂量组(300 mg·
kg －1)小鼠血清中 ALT 和 AST 值分别为(66． 16 ±
9． 83)U·L －1和(35． 21 ± 5． 15)U·L －1，显著低于模
型组小鼠血清中 ALT、AST 值(p ＜ 0． 01)，接近阳性
对照药。水部位低剂量组(150 mg·kg －1)小鼠血清
中 ALT和 AST 值分别为(71． 14 ± 8． 21)U·L －1和
(38． 91 ± 3． 51)U·L －1，与模型组相比具有显著差异
—12—
中 国 野 生 植 物 资 源 第 34 卷
(p ＜ 0． 05)，抑制作用接近 75% 乙醇提取物高剂量
组(300 mg·kg －1)。
表 1 虎刺提取物对小鼠血清 ALT、AST的影响(x，n = 8)
组别 剂量 / g·kg －1 ALT值 /U·L －1 AST值 /U·L －1
正常 — 59． 78 ± 7． 34＊＊ 27． 31 ± 4． 14＊＊
模型 — 82． 79 ± 12． 41 48． 87 ± 5． 95
联苯双酯 0． 20 63． 42 ± 8． 32＊＊ 30． 10 ± 4． 45＊＊
75%乙醇提取物 0． 30 69． 41 ± 6． 17* 38． 26 ± 6． 74*
0． 15 73． 29 ± 7． 25 41． 82 ± 5． 44
石油醚部位 0． 30 167． 46 ±10． 14＊＊ 56． 48 ± 6． 56＊＊
0． 15 112． 46 ± 14． 12 91． 47 ± 11． 45
乙酸乙脂部位 0． 30 74． 36 ± 8． 63 41． 45 ± 8． 95
0． 15 80． 96 ± 9． 16 45． 65 ± 5． 68
水部位 0． 30 66． 16 ± 9． 83＊＊ 35． 21 ± 5． 15＊＊
0． 15 71． 14 ± 8． 21* 38． 91 ± 3． 51*
注:与模型组比较* p ＜ 0． 05，＊＊p ＜ 0． 01。
数据表明，虎刺水部位对 CCl4所致小鼠急性肝
损伤有较好的保护作用。75% 乙醇提取物对 CCl4
所致小鼠急性肝损伤也显现出一定的保护作用。虎
刺乙酸乙酯部位抑制小鼠血清中 ALT、AST 作用较
弱，低剂量组(150 mg·kg －1)的 ALT、AST 值接近于
模型组。而石油醚部位能明显的升高小鼠血清中
ALT、AST 值，较模型组还高，说明石油醚部位可能
对肝脏有损伤作用。
3． 2 组织病理学检查
正常组小鼠肝小叶完整，肝索排列规则未见炎
性细胞，肝细胞结构形态正常，细胞排列整齐，大小
均匀，分界清楚，细胞核大而圆，核质分布均匀，核仁
清晰。模型组肝小叶结构破坏，肝索结构排列紊乱，
肝窦明显扩张，血管附近有明显炎症细胞浸润，肝细
胞肿胀，胞质疏松，呈气球样变性，表现为以中央静
脉为中心的局灶性肝细胞变性、坏死。而阳性药物
组较模型组肝窦扩张及炎性细胞的浸润不明显，肝
细胞的胞质均匀，气球样变性不常见。同时，水部位
组肝小叶结构基本完整，肝组织排列较整齐，肿胀、
变性坏死程度明显减轻，坏死灶区明显减少;乙酸乙
脂部位组(300 mg·kg －1)较模型组症状减轻，但仍
可观察到疏松胞质，气球样病变的肝细胞。表明水
部位和乙酸乙酯部位对 CCl4 致肝损伤小鼠具有保
护作用，而水部位组药效强于乙酸乙酯部位。需注
意的是，石油醚部位(300 mg·kg －1)与模型组相比，
小叶内坏死广泛，仍然严重，无明显减轻，说明石油
醚部位组无保肝作用。150 mg·kg －1给药组小鼠组
织切片在病理学变化不明显(图片未列出)。
图 1 肝脏组织病理切片 (HE，× 100)
3． 3 各部位蒽醌成分的含量
四种样品的总蒽醌含量见表 2，剩余水部位中
总蒽醌含量最高，为 7． 67 mg·g －1(相对于萃取物，
下同)，75%乙醇提取物和乙酸乙酯部位中总蒽醌
含量较低，分别为 3． 68 mg·g －1和 3． 25 mg·g －1。石
油醚部位游离蒽醌的含量为 6． 69 mg·g －1。
表 2 不同部位总蒽醌的含量
组别 浓度 /μg·mL －1 含量 /mg·g － 1
75%乙醇提取物 3． 72 3． 68
石油醚部位 7． 06 6． 69
乙酸乙酯部位 3． 27 3． 25
水部位 7． 72 7． 67
3． 4 样品的 HPLC分析
四种样品的 HPLC图见图 2。可知，石油醚、乙
酸乙酯和剩余水部位中，化合物分离和富集的效果
较好，从 HPLC图可以看出，这三个部位重合的程度
较低，并且较好的保留了 75%乙醇提取物中的化学
成分。
图 2 四种样品高效液相色谱图
—22—
第 6 期 王 丹，等:虎刺提取物对 CCl4 致肝损伤的保护作用
4 讨 论
本课题研究了虎刺 75% 乙醇提取物以及石油
醚、乙酸乙酯和剩余水部位的保肝活性以及与所含
总蒽醌的量效关系。结果表明:水部位具有良好的
保肝作用，能够显著的降低血清中 ALT和 AST的水
平，而石油醚部位升高血清中 ALT 和 AST 的水平。
由此可见，虎刺中的保肝活性成分主要集中在水部
位。同时发现，75%乙醇提取物、乙酸乙酯部位和剩
余水部位的保肝活性与所含的总蒽醌呈正相关。但
石油醚部位虽然含有较多的游离蒽醌，却升高血清
中 ALT和 AST的水平，表明石油醚部位可能含有损
伤肝脏的物质，这为虎刺的合理使用提供了依据。
后续的工作中将对虎刺的剩余水部位做进一步研
究，确证保肝活性成分。同时研究石油醚部位，发现
可能损伤肝脏的物质基础。
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38．
(上接第 19 页)异常 Ds 转座突变体，纯杂鉴定发现
表型与基因型不一致，说明表型与 Ds 插入突变无
关。通过 TAIL － PCＲ克隆侧翼序列，分析没有发现
其它的 Ds插入位点。突变体多代种植后其突变表
型稳定出现，说明表型具有遗传基础，导致表型出现
的遗传因素尚需进一步研究，可通过图位克隆法获
析突变位点，该结果对于突变体后续变异研究有一
定的意义。
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