全 文 ：作者简介:马艳红(1981—),女 ,在读博士研究生 ,北京中医药
大学(北京　100029);刘小河 、何丽清 、傅延龄 ,单位同第一作者。
栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其合方对反流性
食管炎模型大鼠氧化应激影响
马艳红　刘小河　何丽清　傅延龄
　　摘要:目的:探讨栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其合方对混合性反流性食管炎大鼠食管黏膜及氧化应激的影响及作
用机制。方法:将 72只健康雄性 SD大鼠随机分为假手术组 、模型组 、西药对照组 、栀子甘草豉汤组 、大黄黄连泻心汤组 、合方
组。假手术组行伪手术 , 其余各组采用食管十二指肠吻合术建立反流性食管炎模型。 1周后 , 假手术组 、模型组给予生理盐
水灌胃 , 西药组大鼠灌胃莫沙必利 (1.75 mg/kg), 各中药组分别灌胃栀子甘草豉汤 (5.83 g/kg)、大黄黄连泻心汤
(3.62 g/kg)、合方(4.78 g/kg)。每周空腹称重 1次 。术后 5周处死全部大鼠 , 取全段食管称重后计算食管系数 ,肉眼观察做
大体评分 , 并作组织病理学观察;制备食管组织匀浆 ,测食管组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。结果:栀子甘草豉汤
组 、合方组大鼠的体质量增加值较模型组显著 , 三方均可显著降低食管中 MDA含量 , 提高食管 SOD活力 , 降低食管系数 , 改
善食管大体及病理组织评分 , 其中合方效果最显著。结论:栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及合方能提高食管组织的抗氧化
能力 , 具有防治大鼠反流性食管炎的作用 , 合方效果最佳。
关键词:栀子甘草豉汤;大黄黄连泻心汤;合方;反流性食管炎;自由基;白介素 -8;实验研究
中图分类号:R681.5　文献标识码:A　文章编号:1000-7156(2009)01-0049-04
TheEffectsofGardeniae, SojaePraeparatiandGlycyrrhizaeDecoction, PieplantandGold-
threadPurgingHeartDecoctionandIntegratedDecoctiononOxidativeStressofReflux
EsophagitisRat　MAYan-hong, LIUXiao-he, HELi-qing, etal.(PreclinicalMedicalCollegein
BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing, 100029, China)
Abstract:Objective:ToobservetheefectsofGardeniae, SojaePraeparatiandGlycyrhizaeDecoction,
PieplantandGoldthreadPurgingHeartDecoctionandtheIntegratedDecoctiononrefluxesophagitisandthemech-
anismofactionofoxidativestressinrat sesophagusmucosa.Method:72healthyWistermalemaleratsweredivid-
edintosixgroupsrandomly, whichwereshamoperatedgroup, modelgroup, westernmedicinecontrolgroup, group
ofGardeniae, SojaePraeparatiandGlycyrrhizaeDecoction(GSGD), groupofPieplantandGoldthreadPurging
HeartDecoction(PGD)andgroupofIntegratedDecoction.Shamoperatedgroupwasdonewithpseud-operation,
andtheothergroupsweredoneintomodelsofrefluxesophagitisbyesophagoduodenostomy.After1week, isotonic
Nachloridewasgiventoshamoperatedgroupandmodelgroupbyintragastricadministration, Mosapridewasgiven
towesternmedicinecontrolgroup(1.75 mg/kg), corespondingChinesecrudedrugwasgiventoeachChinese
drugsgroupwhichwasGSGD(5.83 g/kg), PGD(3.62 g/kg)andID(4.78 g/kg).Weighonceonanempty
stomacheveryweek.After5daysofoperationexecutealtherats, selectesophagotoweighandcalculateesophago
quotient, observemacroscopicalyandscore, anddohistopathologyobservation.Prepareesophagotissuehomoge-
nateanddetermineSuperoxidedismutase(SOD)activityandMalondialdehyde(MDA)content.Result:Increas-
ingvalueofrat sweightwasmoreingroupofGSGDandgroupofIDthaninmodelgroup.Thethreedecoctions
decreasedMDAcontentremarkably, increasedSODactivity, cutdownesophagoquotient, andimprovedesophago
bodyandscoreofpathologicaltissue.IDdidbest.Conclusion:GSGD, PGDandIDcanimproveanti-oxadationa-
bilityofesophagotissue, andpreventinjuryfromrefluxesophagitis.IDhasthebestefect.
Keywords:Gardeniae, SojaePraeparatiandGlycyrrhizaeDecoction, PieplantandGoldthreadPurgingHeart
Decoction, IntegratedDecoction, refluxesophagitis, freeradical, interleukin-8
　　反流性食管炎(refluxesophagitis, RE)是指胃及十二指 肠内容物逆流进入食管引起的食管黏膜损伤 , 及其继发的
一系列临床症状和消化道炎症表现。目前 , 西医一般采取
质子泵抑制剂 、H2受体拮抗剂 、促胃肠动力药等治疗 ,虽然
有一定的效果 , 但副作用较大 , 经济负担重 , 且复发率高。
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笔者采用清宣郁热 、畅利气机法则 , 选用栀子甘草豉汤 、大
黄黄连泻心汤 , 以大鼠混合性反流性食管炎为模型 , 观察
两方及其合方对该病的疗效 ,初步探讨其作用机理。
1　材料与方法
1.1　实验动物:健康清洁级 3月龄 SDIGS大鼠 72只 , 雄
性 , 体重 240±20 g,许可证号:SCXK(京)2007-0001, 由北
京维通利华实验动物技术有限公司提供。
1.2　实验药品:栀子甘草豉汤(成人每日用量栀子 、淡豆
豉各 20 g, 生甘草 10 g), 大黄黄连泻心汤(成人每日用量
制大黄 、黄连各 8 g,黄芩 15 g),栀子甘草豉汤合大黄黄连
泻心汤(简称合方:栀子 、淡豆豉各 10 g, 黄芩 8 g, 生甘草
5 g,制大黄 、黄连各 4 g)。药物购自北京同仁堂 , 均为正
品。栀子甘草豉汤浓缩成含生药 0.583 g/mL的混悬液 ,大
黄黄连泻心汤浓缩成 0.362 g/mL的混悬液 , 合方浓缩成
0.478 g/mL的混悬液 , 贮于冰箱中备用。西药为新络纳
(枸橼酸莫沙必利分散片 ,批号 071207, 成都大西南制药股
份有限公司),制成 0.175mg/mL的混悬液。 (临床用量为
按成人 60kg体重计算单位体重日服生药量 , 大鼠用药剂
量为人用药剂量的 7倍)。
1.3　实验条件及物品准备:所有手术均在清洁级动物手术
室内进行 , 实验人员穿消毒隔离服 , 戴无菌手套。备好电
子天平 、手术台 、无菌孔巾 、 6-0无创带线缝合针(批号
YY0166-2002, 上海医用缝合针厂有限公司)、戊巴比妥
钠 、水合氯醛 、碘伏 、已消毒的手术器械 、硫酸庆大霉素注
射液(批号 07072631, 天津药业焦作有限公司)、注射用青
霉素钠(Y0703113, 华北制药股份有限公司)等 , 超氧化物
歧化酶 SOD试剂盒(批号 20080508)、丙二醛 MDA(批号
20080508)、蛋白参照试剂盒(批号 20080526)均购自南京
建成生物工程研究所 。
1.4　实验分组:雄性大鼠 72只 , 在同样环境下给予基础饲
料常规饲养 1周后 , 体重均衡随机分成 6组 ,每组 12只 ,即
假手术组 、模型组 、西药对照组 、栀子甘草豉汤组 、大黄黄
连泻心汤组及其合方组(以下分别简称假手术组 、模型组 、
西药组 、栀豉组 、泻心组 、合方组)。
1.5　造模:各组大鼠均于术前 24 h禁食 , 术前禁水 2 ～
4 h, 应用 1%戊巴比妥钠腹腔注射(30 ～ 45 mg/kg)进行麻
醉 , 固定在手术台上 ,严格按照无菌操作进行模型制作 [ 1]:
沿腹正中线开腹 , 将食管下段分离出迷走神经及血管 , 切
断食管;缝合贲门并荷包包埋入胃中 ,保留全胃 , 在十二指
肠距幽门 1cm处侧壁纵行切开 0.4cm,将其与食管下段进
行端侧吻合 , 用 6-0无创伤缝线进行全层间断密集缝合。
关腹前 , 用无菌纱布吸尽腹腔中的液体 , 注入 2 ～ 3mL含有
庆大霉素的生理盐水(1万 U/mL)。术后 24 h禁食不禁
水 , 术后 1 周内大鼠每日腹腔注射青霉素 (1.6 万 U/
100g)。假手术组行假手术:开腹后等待 10 min,关腹。
1.6　实验步骤:术后 1周 ,开始给药。假手术组 、模型组每
日给予生理盐水 1 mL/100 g体重灌胃;西药组每日灌服莫
沙必利 1 mL/100 g(0.175 mg/mL);栀豉组 、泻心组 、合方
组每日按 1 mL/100 g灌胃相应的汤药。每周禁食称重
1次。连续给药 4周 , 观察大鼠的活动表现 、摄食量 、进水
量及精神状态。末次给药后禁食不禁水 24 h, 用 10%水合
氯醛按 4 mL/kg腹腔注射麻醉。腹主动脉取全血放入肝素
钠管中 , 3 500 r/min, 离心 20 min取上清冷藏待测。将大
鼠食管从咽部至吻合口整段取出 , 纵行剖开 , 电子天平精
密称重后 ,肉眼观察并评分。将食管纵切一分为二 , 一份
放入 4%中性多聚甲醛溶液固定 48 h, 常规组织脱水 、透
明 、浸蜡 、包埋。石蜡切片用于 HE染色 、免疫组化染色。
另一份称重后用生理盐水制备 10%食管匀浆 , 4 ℃,
3 500 r/min,离心 15min,取上清待测。
1.7　指标测定　所用仪器:精密电子天平(AE160型电子
分析天平 ,瑞士 Mettler公司)、电动匀浆机(DY89-Ⅱ型电
动玻璃匀浆机 ,宁波新芝生物科技股份有限公司)、低温离
心机(5810R型德国信肯公司)、紫外分光光度计(UV755B
紫外分光光度计 ,上海精密科学仪器公司)等。
1.7.1　一般状态:对各组大鼠的体重 、毛色 、精神状态 、活
动 、进食 、进水等情况进行观察。
1.7.2　食管系数:食管系数 =食管湿重 /体重。
1.7.3　食管黏膜肉眼表现及病理形态学观察:将食管从咽
部至吻合口整段取出 , 生理盐水轻轻冲洗食管 , 滤干称重
后 ,纵行剖开 , 肉眼观察大体表现并进行 RE分级 , 结果见
表 1。石蜡切片 HE染色后进行光镜观察 , 结果见表 2。 肉
眼表现及病理分级均采用 2003年中华医学会消化内镜学
会颁布的 RE诊断及治疗指南 [ 2] 。
表 1　RE黏膜肉眼表现及分级
分级 　　　食管黏膜大体表现 积分
0级 正常 ,可有组织学改变 0
Ia级 点状或条状发红 、糜烂 <2处 1
Ib级 点状或条状发红 、糜烂≥2处 2
Ⅱ级 条状发红、糜烂 ,并有融合 ,但并非全周性 ,融合<75% 3
Ⅲ级 病变广泛 ,发红 、糜烂融合呈全周性 ,融合≥75% 4
表 2　RE病理分级
　　　病理改变 轻度 中度 重度
鳞状上皮增生 + + +
黏膜固有层乳头延伸 + + +
上皮细胞层内炎性细胞浸润 + + +
黏膜糜烂 - + -
溃疡形成 - - +
Barett食管 - - +/-
1.7.4　食管匀浆中 SOD、MDA、蛋白测定:按照试剂盒说
明书操作 ,用 UV755B紫外分光光度计测定吸光度值。
1.8　数据统计:运用统计学软件 SPSS15.0, 统计后数据用
X±s表示 ,进行正态分布及方差齐性检验后用 F检验进
行多组均数的两两比较 ,方差不齐者用秩和检验 。
2　结果
2.1　一般状态:实验中死亡大鼠共 5只 , 均出现在术后 1
周内。其中模型组 2只 、西药组 、泻心组 、合方组大鼠各死
亡 1只。主要死亡原因为梗阻 、腹腔撕裂等 , 死亡动物不进
行统计。假手术组体重下降不明显 , 大鼠被毛紧密贴身 ,
色白光泽 , 两眼有神 , 活动敏捷 ,食量较多 , 大便呈颗粒状;
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术后模型组及各治疗组体重明显下降 , 大鼠被毛较松散 ,
部分大鼠甚至被毛脱落 , 毛色光泽减少 , 活动少而迟钝 , 食
量下降 , 多数大鼠出现便溏现象。一周后 , 模型组及各治
疗组大鼠食量开始增加 , 体重开始上升 , 但增长幅度仍明
显低于假手术组 , 术后两周食量及活动基本恢复正常。各
组大鼠体质量增长情况见表 3。
2.2　食管系数及黏膜损伤评分:见表 3。
表 3　各组大鼠体质量增加 、食管系数和黏膜损伤评分
组别 n 体质量增加(g) 食管系数 黏膜损伤评分
假手术组 12 141.40±36.14 6.77±0.64 —
模型组　 10 73.56±30.731) 13.58±2.322) 3.50±0.97
西药组　 11 81.00±41.52 11.69±1.85 2.73±1.01
栀豉组　 12 102.80±19.913)6) 10.31±1.034)7) 2.42±0.995)
泻心组　 11 81.00±25.638) 10.34±1.154) 2.27±0.905)
合方组　 11 106.33±30.523)6)9) 10.01±0.674)7)2.00±0.825)7)
　　 注:与假手术组比较 , 1)t=-4.685 8, P<0.001;2)t′=
9.001 3, P<0.001;与模型组比较 , 3)t=2.693 1、 2.449 4, P<
0.05;4)t′=-4.130 8、 -3.992 8 、 -4.691 5, P<0.01;5)t′=
-2.571 1、 -3.014 6 、 -3.839 2, P<0.05;与西药组比较 , 6)t′
(经平方变换)=7.528 5、 10.912 9 , P<0.001;7)t′=-2.183 2、
-10.912 9 、 -2.831 9, P<0.05;与栀豉组比较 , 8)t=-2.289 2,
P<0.05;与泻心组比较 , 9)t=2.107 9, P<0.05。
2.3　食管大体形态观察及病理组织学变化:假手术组大鼠
食管黏膜完整 、光滑 ,呈白色(见图 1)。经过造模手术后的
大鼠食管黏膜粗糙 , 散在分布糜烂及溃疡 , 出现不同程度
的 “树皮样”黏膜增生外观 , 吻合口处最重 , 逐渐向上累及 ,
范围可达食管的黏膜各段 , 食管壁明显增厚 , 下段不规则
扩张 , 但以模型组最为明显(见图 2)。其他各治疗组食管
损伤程度明显减轻。光镜下形态学改变:假手术组食管黏
膜除上皮细胞层内间或存在少量炎细胞外 , 无其他明显异
常表现(见图 3)。其余各实验组均可见不同程度的下列几
种组织学改变:1)炎性细胞浸润:主要为中性粒细胞 、淋巴
细胞及少量嗜酸性粒细胞;2)鳞状上皮过度增生:食管上
皮层不同程度增厚 , 以基底层及棘层细胞增生为主 , 成纤
维细胞增生;3)固有层乳头延长 , 向表面延伸达上皮层厚
度的 2/3,角化过度 , 浅层毛细血管扩张 、充血;4)糜烂 、溃
疡:食管上皮部分或全层缺损 , 底部覆以渗出物及肉芽组
织(见图 4)。各组组织学改变由下向上逐渐减轻 ,各治疗
组病理学改变均有不同程度的减轻。
2.4　大鼠食管 SOD活力 、MDA含量测定:见表 4。
3　讨论
中医没有反流性食管炎的病名 , 但根据其临床表现 ,
该病似可归属中医胸痛 、胃痛 、反酸 、嘈杂 、噎膈等病范畴。
中医认为 , 其病位在食管 、胃 , 与肝 、脾关系密切 , 多因饮食
不节 , 如饮酒 ,偏嗜辛辣 、粗糙 、热烫食物等 , 热气伤胃 , 胃
中蕴热 , 又兼情志不畅 , 肝失条达 ,气郁化热 , 横逆犯胃 , 胃
气上逆 , 损伤食管而发病。 其主要表现为烧心 、胸痛 、反
酸 、恶心 、嗳气 、吞咽困难等 , 严重者可以并发食管狭窄 、食
管溃疡 、Barret食管等。
栀子甘草豉汤见于《伤寒论 》第 76条。条文中提到的
表 4　大鼠食管 SOD活力 、MDA含量比较(X±s)
组别 n SOD(U/mg) MDA(nmol/mg)
假手术组 12 13.86±1.77 1.41±0.36
模型组　 10 8.50±1.371) 2.45±0.422)
西药组　 11 11.79±1.403) 2.00±0.354)
栀豉组　 12 13.92±1.523)5) 1.83±0.324)
泻心组　 11 13.63±1.563)5) 1.79±0.294)
合方组　 11 14.17±1.173)5) 1.63±0.234)6)
　　注:与假手术组比较 , 1)t=-7.812 2, P<0.001;2)t=6.257
7, P<0.001;与模型组比较 , 3)t=5.433 3、 8.703 4、 7.923 9、
10.228 7, P<0.001;4)t′=-2.676 8、 -3.930 8 、 -4.225 0、
-5.622 9, P< 0.05;与西药组比较 , 5)t= 3.485 3、 2.911 4、
4.326 4, P<0.001;6)t=-2.930 1, P<0.01。
“虚烦不得眠”、“心中懊恼” , 以及栀子豉汤类方主治病证
可能见到的 “胸中窒”、“心中结痛”等症状 , 与 RE的烧心 、
反酸 、胸痛等临床表现颇为相似 , 故后世有用于治疗 RE
者。栀子能上入心胸而清热除烦 , 常用于心热 、肝热及胃
热诸症 ,能迫热下行而利小便 , 清除胃中积热;生甘草能益
气补中 、缓急止痛 、调和药性;淡豆豉性凉 , 味甘辛 , 能解表
除烦 ,又能和降胃气。甘草 、淡豆豉二药与栀子苦寒药同
用 ,可护胃 、益气 、和中 , 防其苦寒伤胃。三药同用可以清宣
郁热 ,益气和中。
大黄黄连泻心汤见于《伤寒论》第 154条和第 164条。
用于治疗热痞 , 临床表现为自觉胃脘部有堵闷痞塞感觉 ,
吞咽不利 ,口干等。 《伤寒论》载方仅大黄 、黄连两味药 , 其
中是否有黄芩 , 历来存在很大争议 , 然多数医家认为该方
当有黄芩 ,故该实验所用大黄黄连泻心汤由大黄 、黄连 、黄
芩三味组成。三药皆为苦寒之品 ,大黄泻热 、和胃 、开结 , 又
有推陈致新之力;黄芩 、黄连清心胃之火。三药合用 , 邪热
得除 ,气机流畅。
该研究中 ,我们模拟制作了胃十二指肠混合反流性食
管炎大鼠模型 , 观察栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其
合方对反流性食管炎的疗效 ,初步探讨其作用机制。选择
栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其合方主要出于以下考
虑:栀子甘草豉汤在原文中用于热郁胸膈证 , 大黄黄连泻
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心汤用于治疗热痞 , 二者治疗的病位均偏于中上二焦 , 与
RE的病位食管相近;二者的病症与 RE的烧心 、反酸 、胸痛
等临床表现相似;栀子甘草豉汤合大黄黄连泻心汤中间嵌
入了栀子金花汤的基本组成 , 同时加入了淡豆豉 、生甘草
和大黄。栀子金花汤偏于治疗三焦热证 , 因 RE病位偏于
中上二焦 , 故减善清下焦之火的黄柏。淡豆豉 、甘草可护
胃和中 , 防止苦寒伤胃 , 大黄泻热和胃 , 推陈致新。诸药合
用可以清热开结 , 疏畅气机 ,益气和中。
体质量变化是反应动物营养状态及其生存质量的客
观指标。在该研究中 , 术后各组大鼠的体质量增加情况均
明显低于假手术组 , 这可能与术中损伤较大或术后病变形
成较重而影响营养有关。栀豉组与合方组的平均体质量
增加明显高于模型组(均为 P<0.05), 西药组与泻心组的
平均体质量增加较模型组有增长趋势 , 但没有统计学意义
(P>0.05)。栀子甘草豉汤及合方均能清宣郁热 、益气和
胃 , 促进正气恢复 , 故大鼠体质量增加效果明显。大黄黄
连泻心汤清热消痞 、宣畅气机 ,但苦寒伤胃 , 不利于体质量
的增加。
依据 2003年中华医学会消化内镜学会颁布的 RE诊
断及治疗指南中 RE肉眼表现及病理分级标准 , 实验结果
显示 , 栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其合方均能减轻
黏膜损伤程度 , 组织病理也较模型组有明显改善。 三方效
果均优于莫沙必利(均为 P<0.05)。
研究表明 , 胃十二指肠内容物反流引起的食管黏膜损
伤与局部生成了过多的氧自由基密切相关 [ 3] , 应用抗氧化
剂可以预防和治疗反流性食管炎 [ 4] , 研究提示在反流性食
管炎的发病中 , 氧化应激可能是反流物导致黏膜损伤的重
要机制之一。正常情况下 ,体内一定的自由基水平是维持
正常生命活动所必需的 ,机体的氧化与抗氧化处于一种动
态平衡中。在某种情况下 , 如一些外源化合物 、电离辐射
等均可使机体的自由基水平明显升高 , 机体的氧化与抗氧
化失衡 , 出现氧化应激。两者之间的失衡启动了超氧自由
基的一系列反应 , 对细胞膜结构的不饱和脂肪酸的损伤会
产生过多的过氧化脂质。所有这些呈一潜隐性渐进性发
展过程 , 使机体出现退行性变 、衰老 、炎症甚至肿瘤。机体
的抗氧化系统分为内源性酶类抗氧化剂和外源性营养抗
氧化剂 ,两者均具有中和与减轻活性氧毒性反应的功能。
内源性酶类抗氧化剂主要有 SOD、GSH-PX、过氧化氢酶
等。正常情况下 , 胃肠道黏膜 、黏膜下层 、肌层和浆膜层所
含的内源性酶类抗氧化剂远远低于肝脏组织 , 而且黏膜组
织的酶活性大多存在于上皮细胞内 , 黏膜固有层仅含有极
少的内源性酶类抗氧化剂 , 这就使得食管黏膜在受到外源
化合物刺激时极易发生氧化应激 , 从而导致黏膜上皮的氧
化损伤。实验结果表明 , 与假手术组相比 , 模型组的 SOD
活性明显降低 , MDA含量明显升高(均为 P<0.001)。栀
子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤及其合方可以明显升高食管
黏膜中 SOD的活性 , 降低 MDA含量 ,对食管黏膜有一定的
保护作用。西药组食管黏膜中 SOD活性升高 , MDA含量
下降 ,但效果不如中药组。 它提示我们反流性食管炎治疗
不应当仅仅局限于抗酸治疗 , 还应与外源性的抗氧化剂联
合应用以减轻或逆转局部炎症反应 , 防止恶性变 , 但确切
的疗效仍有赖于大量的动物实验和临床观察。
总之 ,在该实验中 , 栀子甘草豉汤 、大黄黄连泻心汤以
及合方能显著减轻食管黏膜的损伤程度 , 降低局部组织的
MDA含量 ,升高 SOD水平 ,其中合方的效果最明显。提示
该中药的作用机理为多部位 、多环节 、多靶点 , 研究中医药
治疗反流性食管炎有广泛的前景。
参考文献:
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rabbits[ J] .DigDisSci, 2001, 46(12):2 733-2 743.
(收稿日期:2008-10-22)
本文编辑:王存明
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《山西中医》为月刊 ,大 16开本 , 64页 ,每月 15日出版 , 2009年每册定价仍为 4.50元 , 全年 54.00元。本刊统一刊
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·52· 　山 西 中 医　2009年 1月第 25卷第 1期　　　　　 　　　　　SHANXIJOFTCM　Jan.2009 Vol.25 No.1