全 文 ：收稿日期:2011 － 06 － 11
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30572371;30825047 )
作者简介:许枬(1968 － ) ，女，副教授，博士，研究方向:中药有效
成分及其活性研究。
通讯作者:贾天柱(1951 －) ，男，教授，硕士，研究方向:中药炮制原
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第 29 卷 第 11 期
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中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
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狗脊炮制前后抗氧化活性的研究
许枬1，曹跃1，周翎2，贾天柱1
(1．辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600，2．大连海港医院，辽宁 大连 116101)
摘 要:目的:对比研究狗脊炮制前后，化学成分变化较大的正丁醇提取物的抗氧化作用差异。方法:采用对
氧自由基、H2O2、羟自由基等 3 种自由基反应体系，平行考察狗脊炮制前后清除自由基能力变化。结果:生狗脊
和烫狗脊均具有清除自由基能力，但烫狗脊清除自由基作用强于生狗脊。结论:狗脊砂烫后抗氧化作用增强与炮
制后化学成分变化有关。
关键词:狗脊;炮制作用;抗氧化;自由基
中图分类号:R283． 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2011)11 － 2424 － 03
Study on Anti-oxidation of Raw and Processed Cibotium Barometz
XU Nan1，CAO Yue1，ZHOU Ling2，JIA Tian-zhu1
(1． Laoning University Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China;
2． Dalian Harbour Hsopital，Datian 116101，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To investigate the antioxidation of n － butanol extract of the processed and raw Cibotium
barometz． Method:The antioxidation of Cibotium barometz． and its processed products were comparatively analyzed by
three free radical fraction systems． Result:Cibotium baronetz． and its baked products all showed antioxidation and the an-
4242
DOI：10.13193/j.archtcm.2011.11.50.xuzh.053
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tioxidation of processed Cibotium baronetz． was stronger than that of Cibotium barometz． Conclusion:The antioxidation of
Cibotium baronetz． Enhanced after baked with hot sand．，which was correlated with processing．
Key words:Cibotium barometz．;processing;antioxidation;free radical
狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium barometz(L．)
J． Sm．的干燥根茎，具有补肝肾，强腰膝，祛风湿的功效［1］。
烫狗脊是《中华人民共和国药典》收载的唯一狗脊炮制品。
传统炮制理论认为狗脊生品强于祛风湿，制品强于补肝
肾［2］。以往化学成分研究表明，狗脊中主要有挥发性成
分［3 － 4］、糖、氨基酸、黄酮和酚酸等类成分［5 － 8］，具有镇痛、
止血、抗炎等活性［9］。鉴于有关狗脊补肝肾的药效研究鲜
有报道，本课题组在“肾主骨生髓”的中医理论指导下，对
狗脊的炮制作用进行了深入的研究［10 － 14］，发现狗脊炮制前
后正丁醇提取物的化学成分差异较大，主要表现为砂烫后，
新增多种糠醛和 γ －吡喃酮类成分。该提取物的抗骨质疏
松药效研究显示，烫狗脊具有明确的抗骨质疏松作用，但生
狗脊的作用不明显(另文发表)。中医理论认为肝藏血，肾
藏精。肝肾得养，则气机调畅，精血充盈，机体康健，故补肝
肾是中医防止早衰、延年益寿的核心［15］。因此有必要在抗
骨质疏松基础上，深入探讨狗脊的其他补肝肾作用途径，以
求多角度、多途径地揭示烫狗脊的补肝肾作用机制，为阐释
狗脊的炮制作用机理提供科学依据。现代医学研究表明，
自由基损伤是机体衰老的主要原因之一［16］。因此本文在
前期化学成分和抗骨质疏松活性研究的基础上，对炮制前
后化学成分发生显著变化的正丁醇提取部位进行抗氧化实
验研究，进一步探索狗脊补肝肾的机制。实验以 Fenton 反
应产生羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢的清除能力，考
察狗脊砂烫前后抗氧化作用的差异。
1 仪器、实验材料与试剂
1． 1 仪器
UV －3010 紫外可见分光光度计(日本岛津公司) ;
KQ23200V 型超声清洗器 (昆山市超声仪限公司) ;
FA2104N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司) ;
pHS225 型精密酸度计(上海仪器厂)。
1． 2 实验材料与试剂
狗脊，由辽宁中医药大学王冰教授鉴定;供试品溶液，
生狗脊及烫狗脊(照中国药典法制备)分别加水提取，提取
液用正丁醇萃取，所得提取物挥去溶剂，加水溶解，配制成
所需浓度，即得;Tris (三羟甲基氨基甲烷) ，上海三浦化工
有限公司提供;邻二氮菲、硫酸亚铁邻苯三酚、过氧化氢，天
津化学试剂厂生产。以上试剂均为分析纯，实验用水为二
次蒸馏水。
2 实验方法与结果
2． 1 生狗脊和烫狗脊对羟自由基(·OH)清除作用
取 12支 10mL 比色管，先分别加入 7． 5mmol /L 邻二氮
菲溶液 0． 3mL、7． 5mmol /L 硫酸亚铁铵溶液 0． 3mL、pH =
7． 47 Tris的 HCl缓冲溶液 1． 0mL。再将 1 号管加入 1． 0mL
水，2 ～12号比色管中分别加入 1． 0mL 的 7． 5mmol /L H2 O2
后，3 ～12号管再分别加入 1． 0mL不同浓度生狗脊和烫狗脊
的供试品溶液。然后各管加水定容至刻度，混匀。在 37 ℃
水浴中反应 1h，冷水冷却，以水为参比在 510nm处分别测定
各样品液的吸光度，上述实验重复 3次，取平均值，分别计算
生狗脊和烫狗脊的羟自由基清除率(P)［16］，结果见图 1。
P =
A样品 － A损
A样品 － A损
× 100%
式中:A样品、A未损、A损— 分别为加入供试品溶液的羟
自由基体系，不加 H2O2及加入 H2O2体系的吸光度。
图 1 狗脊及其炮制品对羟自由基的清除作用的比较
由图 1 可见，烫狗脊在 0． 05 ～ 0． 4mg /mL 的浓度范围
内，对羟自由基有较强的清除作用，随着样品浓度的提高呈
现较好的量效关系，拟合曲线方程为:y = 214． 93x +
0. 8657，r = 0． 9969，EC50为 0． 2286mg /mL。生狗脊对羟自
由基也有清除作用，计算机拟合曲线方程为:y = 114． 93x
－ 3． 1343，r = 0． 9882，EC50为 0． 4623mg /mL。二者相比，烫
狗脊对羟自由基的清除作用明显强于生狗脊。
2． 2 生狗脊和烫狗脊对超氧阴离子自由基(O－2)清除作用
取 13 支干燥的 10mL 比色管，分别加入 4． 4mL(pH =
8． 3)Tris － HCl 缓冲溶液，在 25℃水浴中恒温 20min，然后
在 1 号管加入 0． 5mL水，2 号管加入 0． 5mL 生狗脊供试品
溶液，3 号管加 0． 5mL入烫狗脊供试品溶液，4 － 13 号比色
管中分别加入 0． 5mL 生狗脊和烫狗脊的供试品溶液后再
分别加入 0． 2mmol /L 邻苯三酚溶液 0． 5mL，混匀，在 25℃
水浴中恒温 4min，取出后在各管中加入 8mol /L HCl 3 滴，
混匀。以水为参比在 320nm处测定吸光度，上述实验重复
3 次，取平均值，分别计算生狗脊和烫狗脊的超氧自由基清
除率(P )［17］，结果见图 2。
P =
A0 －(A1 － A2)
A0
× 100%
式中:A 0、A 1、A 2— 分别为不加提取液体系、加入提
取液不加邻苯三酚溶液体系与加入提取液和邻苯三酚溶液
体系的吸光度。
由图 2 可见，在 0． 05 ～ 0． 4mg /mL浓度范围内，生狗脊
对 O －2有较强的清除作用，计算机拟合曲线方程为 y =
149． 23x + 15． 938，r = 0． 9959，EC50为 0． 2282mg /mL。在上
述范围内，烫狗脊对 O －2有显著的清除作用，且呈现良好的
量效关系，计算机拟合曲线方程为 y = 91． 219x + 4． 3797，r
= 0. 9982，EC50 为 0． 5001mg /mL。二者相比，烫狗脊对氧
自由基的清除作用强于生狗脊。
2． 3 生狗脊和烫狗脊对过氧化氢(H2O2)清除作用
取 13 支 10mL比色管，在 1 ～ 12 号比色管中分别加入
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图 2 狗脊及其炮制品对对氧自由基的清除作用的比较
10mmol /L过氧化氢–磷酸溶液(pH = 7． 4)5mL，在 2 － 11
号比色管中分别加入 1mL生狗脊和烫狗脊的供试品溶液，
12 号管加入 1mL生狗脊供试品溶液，13 号管加入 1mL 烫
狗脊的供试品溶液，用水将各比色管稀释至刻度，混匀。以
水为参比在 200 nm处测定吸光度，上述实验重复 3 次，取
平均值，分别计算生狗脊和烫狗脊的 H2O2清除率(P )
［18］，
结果见图 3。
P =
A0 －(A1 － A2)
A0
× 100%
式中:A0、A 1、A 2— 分别为不加提取液的过氧化氢溶
液体系、加提取液和过氧化氢溶液体系与提取液不加入过
氧化氢溶液体系的吸光度。
图 3 狗脊及其炮制品对过氧化氢的清除作用的比较
由图 3 可见，在 0． 012 ～ 0． 030mg /mL 浓度范围内，生
狗脊对 H2O2有清除作用，计算机拟合曲线方程为 y = 3557x
－ 8． 5435，r = 0． 9987，EC50为 0． 0165 mg /mL。在上述浓度
范围内，烫狗脊对 H2O2有显著的清除作用，清除作用随着
样品浓度的提高而显著增强，呈浓度依赖性变化，计算机拟
合曲线方程为 y = 2071． 5x － 10． 378，r = 0． 9976，EC50为
0． 029mg /mL。二者相比，烫狗脊较生狗脊对 H2 O2的清除
作用显著提高。
3 讨 论
自由基是指具有未配对外层电子的化学基团，主要包
括羟自由基(OH·)、超氧自由基(O2 － )、全羟自由基
(H2O·)、CCl3·和过氧化氢(H2 O2)。由于性质不稳定，
自由基极易与细胞内有机物和无机物发生氧化反应，造成
细胞的生物膜和核酸的氧化损伤，导致组织受损和机体老
化。羟自由基是最活泼的，反应速率极快，它是对机体危害
最大的自由基。超氧阴离子自由基是生命代谢过程中产生
的一种重要的自由基，具有很强的氧化能力。过氧化氢
(H2O2)是结构中不含未配对外层电子的自由基。三者在
反应机制上各具代表性，因此本实验选择羟自由基、超氧自
由基和过氧化氢三种自由基为指标，考察炮制对狗脊抗氧
化作用的影响。
实验结果显示生狗脊和烫狗脊均有抗氧化，但烫狗脊
较生狗脊的抗氧化作用有显著提高。我们的前期化学研究
表明，狗脊砂烫后新增多种糠醛和 γ －吡喃酮类成分，如曲
酸、麦芽酚、去甲基麦芽酚等，这些成分具有很强的抗炎和
抗氧化的活性。尤其是曲酸，抗氧化活性非常显著，常作为
抗氧化作用研究的阳性对照品。因此，由自由基清除作用
与炮制前后新产生的化学成分结合分析可见，烫狗脊清除
自由基能力增强是炮制过程中化学成分变化引起的。中医
理论认为药物补肝肾作用的本质是增强机体防御能力，而
且很多补肝肾药物的抗氧化研究表明，其均有一定的抗氧
化作用，由此提示，狗脊炮制后补肝肾作用增强可能与抗氧
化作用增强有关。
由于狗脊砂烫前后对自由基均有清除作用，且烫狗脊
清除自由基作用明显增强，因此可针对自由基所引发的机
体损伤机制，深入研究狗脊炮制前后对细胞损伤保护作用，
深入揭示狗脊炮制后补肝肾作用增强的本质，为狗脊的炮
制工艺和炮制品质量控制提供依据。
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