全 文 ：网络出版时间:2015 － 7 － 22 10:42 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20150727． 0901． 027． html
头花蓼水提取物对 CYP450 酶诱导和抑制作用研究
陆 苑1，3，潘 洁1，谢玉敏1，郑 林1，3，黄 勇1，3，王永林1，3，李勇军2，3
(1． 贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004;2． 贵阳医学院药学院，民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，
贵州 贵阳 550004;3． 贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2015． 08． 024
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2015)08 － 1147 － 06
中国图书分类号:R-332;R284． 1;R329． 24;R345． 99;R977． 3
摘要:目的 考察头花蓼水提取物对人肝微粒体 CYP450 5
种亚型酶的体外抑制作用和对小鼠的体内诱导作用，从而预
测发生药物相互作用的可能性，为临床合理用药提供科学依
据。方法 以探针底物代谢物生成法，考察头花蓼水提取物
体外对人肝微粒体主要 I 相代谢酶 CYP1A2、CYP2E1、
CYP2C9、CYP2C19 和 CYP3A4 活性的影响;采用微粒体体外
孵育法，考察小鼠经高、低剂量(1. 16、0. 58 g·kg －1)头花蓼
水提取物分别连续灌胃 7 d和 14 d后，小鼠肝微粒体中主要
I相代谢酶活性的变化，以评价头花蓼水提取物对小鼠肝微
粒体主要 CYP450 酶是否有诱导作用。结果 头花蓼水提
取物对人肝微粒体中主要的 CYP450 I相代谢酶的抑制作用
均不强，IC50值在 849. 6 ～ 2 287 mg·L
－1;与空白对照组比
较，1. 16 g·kg －1 7 d 组小鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性分别增
加了 49. 9 %和 21. 1 %(P ＜ 0. 01 和 P ＜ 0. 05) ，0. 58 g·
kg －1 14 d组小鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性分别增加了 27. 6
%和 15. 5 %(P ＜ 0. 01 和 P ＜ 0. 05) ，1. 16 g·kg －1 14 d组小
鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性分别增加了 67. 5 %和 32. 1 %
(P ＜ 0. 01) ，头花蓼提取物对其余 CYP亚型活性未见明显影
响。结论 在临床剂量下，头花蓼水提取物对人肝微粒体
CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19 和 CYP3A4 无明显抑
制作用，对小鼠肝微粒体 CYP2C9 和 CYP3A4 显示诱导作
用。
关键词:头花蓼水提取物;CYP450 酶;酶抑制;酶诱导;药物
相互作用;肝微粒体
收稿日期:2015 － 05 － 18，修回日期:2015 － 06 － 13
基金项目:国家科技支撑计划课题(No 2013BAI11B01) ;贵州省科技
重大专项项目(黔科合重大专项字［2011］6019 号) ;贵州
省中药现代化科技产业研究开发专项(黔科合 ZY 字
［2013］3020 号，黔科合中药字［2013］5062 号) ;贵州省中
药现代化科技产业研究开发专项(黔科合重 G 字［2013］
4001)
作者简介:陆 苑(1988 －) ，女，博士生，研究方向:中药药效物质基
础与药代动力学，Tel:0851-6908899，E-mail:314521537
@ qq． com;
李勇军(1973 －) ，男，硕士，教授，硕士生导师，研究方向:
中药药效物质基础与药代动力学，通讯作者，Tel:0851-
6908486，E-mail:liyongjun026@ 126． com
头花蓼(Polygonum capitatum Buch． － Ham． ex
D． Don)。头花蓼又名石莽草、四季红、红酸杆等，
属于蓼科(Polygonaceae) ，蓼属(Polygonum) ，头状蓼
组(Cephalophilon)多年生草本植物，是少数民族地
区的常用药。主要用于清热解毒、利尿通淋、肾盂肾
炎、尿路结石、膀胱炎、痢疾、风湿痛、跌打损伤、尿道
感染、疮疡湿疹等症［1］。目前开发出以头花蓼为主
要原料的有“热淋清胶囊”、“热淋清颗粒”、“四季草
颗粒”和“泌淋胶囊”等制剂。这些制剂广泛用于治
疗泌尿道系统疾病，但是药品说明书中均未提及药
物相互作用的相关信息。
细胞色素 P450(CYP450)超基因家族是人类药
物代谢酶系统中最重要的一种酶，CYP1A2、
CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19 和 CYP3A4 是其重要的
亚型［2］，普遍认为 90%的药物代谢是由 CYP酶系介
导的。CYP450 酶系被抑制或被诱导是导致药物代
谢性相互作用的主要原因，其中酶抑制作用所致药
物相互作用的临床意义远大于酶诱导作用，约占代
谢性相互作用的 70%［3］。
基于头花蓼水提取物对 CYP450 的抑制和诱导
作用研究未见相关报道，本课题以头花蓼水提取物
(头花蓼相关制剂均为水提取物)为研究对象，采用
人肝微粒体研究头花蓼水提取物对人肝微粒体细胞
色素 P450 酶 5 种亚型的体外抑制作用，采用 ICR小
鼠研究头花蓼水提取物对小鼠细胞色素 P450 酶 5
种亚型的诱导作用，以探讨头花蓼相关制剂对
CYP450 酶亚型的调控作用，及推测与常用药物联
用时是否产生药物相互作用，对促进临床合理用药
并最大限度地避免盲目联合用药导致不良后果，保
证临床用药的安全性和有效性具有重要意义。
1 材料
1． 1 仪器 超高效液相色谱系统(ACQUITY UP-
LC，美国沃特世公司，包括二元梯度泵、真空脱气
机、自动进样器、柱温箱、电喷雾三重四级质谱仪、
Masslynx 4． 1 质谱工作站) ;Allegra 64R低温高速离
心机(美国 Beckman Coulter公司) ;AE240 十万分之
一电子天平(梅特勒 －托利多仪器上海有限公司) ;
·7411·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Aug;31(8) :1147 ～ 52
超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司) ;DK-
98ПA恒温水浴锅(泰斯特) ;GILSON 移液器(四川
吉尔森仪器有限责任公司) ;700 系列超低温冰箱
(美国 Thermo公司) ;PHS-3C型 pH计(上海仪电科
学仪器股份有限公司)。
1． 2 试剂 人肝微粒体(购于美国 BD 公司) ;
NADP +(购于 Roche公司) ;6-磷酸葡萄糖、6-磷酸葡
萄糖脱氢酶(购于 Sigma 公司) ;氯化镁、氯化钠、氯
化钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾均为分析纯;甲醇为
色谱纯;屈臣氏蒸馏水;乙腈为德国默克试剂公司。
1． 3 药品与药材 非那西丁(批号 81105)、奥美拉
唑(批号 90925)、甲苯磺丁脲(批号 20321) ;咪达唑
仑注射液(批号 20120903)江苏恩华药业股份有限
公司;氯唑沙宗(批号 100364-200301)、对乙酰氨基
酚(批号 100018-200408)购于中国食品药品检定研
究院;羟基甲苯磺丁脲(批号 1-PSB-27-2)、5 羟基奥
美拉唑(批号 1-PSB-27-2)和 6 羟基氯唑沙宗(批号
6-QFY-28-2)均购于加拿大 TRC 公司;α-羟基咪达
唑仑(批号 FN101512-07)购于美国 Cerilliant 公司;
头花蓼药材采自贵州施秉的头花蓼 GAP药材基地。
2 方法
2． 1 头花蓼水提取物的制备和主要成分的含量
头花蓼干燥全草，去除泥沙后，剪成小段，准确称量
为 2. 67 kg，取 10 倍体积蒸馏水，浸泡 30 min，煎煮
2 h后过滤，再以 8 倍体积蒸馏水煎煮 2 h，合并煎煮
液浓缩，微波真空干燥，粉碎后准确称量，得棕色提
取物固态粉末 475 g。结果测定其水萃取产率
17. 79 %。
用 UPLC-MS /MS 法［4］测定本次提取的头花蓼
水提取物中各成分的含量(n = 6) :没食子酸(14. 41
± 0. 95)‰(R. S. D. = 6. 57 %) ，原儿茶酸(0. 43 ±
0. 03)‰(R． S． D． = 5. 92 %) ，杨梅苷(0. 25 ±
0. 02)‰(R． S． D． = 8. 26 %) ，陆地棉苷(0. 56 ±
0. 03)‰(R． S． D． = 4. 54 %) ，槲皮苷(2. 11 ±
0. 15)‰(R． S． D． = 7. 22 %) ，槲皮素-3-O-a-L-鼠
李糖苷(0. 46 ± 0. 03)‰(R． S． D． = 5. 38 %) ，槲皮
素(1. 10 ± 0. 05)‰(R． S． D． = 4. 56 %)。
2． 2 动物实验 ICR小鼠，♂，体质量 18 ～ 20 g，清
洁级，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供，动物质量
合格证:医动字第 SCXK (渝)2012 － 0008 号。饲养
及管理均严格按照实验室动物的要求及规则，在温
度为(22 ± 2)℃，湿度为(50 ± 10)%的空调间饲养。
2． 3 小鼠肝微粒体制备 小鼠禁食过夜(自由饮
水) ，颈椎脱臼后，剖腹，暴露肝脏，立即以 4 ℃生理
盐水洗去肝脏中血液，取出肝脏，按钙沉淀法［5］制
备肝微粒体，置 － 80 ℃保存备用，采用考马斯亮蓝
试剂盒测定肝微粒体蛋白浓度［6］。
2． 4 分析条件
2． 4． 1 液相条件 色谱柱:Waters BEH C18(2. 1
mm ×50 mm，1. 7 μm)柱，保护柱:Waters Van Guard
BEH C18(2. 1 mm × 5 mm，1. 7 μm) ，流速:0. 35 mL
·min －1，柱温:45 ℃，流动相:0. 1 %甲酸乙腈(A)
－ 0. 1 %甲酸水溶液(B) ，检测 5 种专一性代谢产物
的梯度条件 0 ～ 3. 0 min 5 % ～ 65 % A，3. 0 ～ 3. 5
min 65 % ～90 % A，3. 5 ～ 4. 5 min 10 % A;进样体
积 1 μL。
2． 4． 2 质谱条件 电喷雾电离源(ESI) ;毛细管电
压:3 kV;离子源温度:120 ℃;去溶剂气温度:350
℃;去溶剂气:N2，流速 650 L·h
－1;反吹气:N2，流
速:50 L·h －1;碰撞气:Ar，流速:0. 16 mL·min －1;
质谱数据采集及处理软件为 MassLynx V4． 1 工作
站，扫描方式为多反应离子监测模式(MRM) ;对乙
酰氨基酚、6-羟基氯唑沙宗、羟基甲苯磺丁脲、α-羟
基咪达唑仑、5-羟基奥美拉唑和葛根素(内标物)的
离子对条件见 Tab 1。
Tab 1 Mass spectrometric conditions
Test drugs ESI
Parent
/m /z
Daughter
/m /z
Cone
/v
Collision
/ev
Acetaminophen + 152． 0 110． 0 30 15
6-Hydroxy chlorzoxazone － 183． 8 120． 0 30 20
Hydroxy tolbutamide － 285． 0 186． 0 35 18
α-Hydroxy midazolam + 342． 0 324． 0 35 20
5-Hydroxy omeprazole + 362． 2 214． 0 20 15
Puerarin (internal standard) + 417． 0 267． 0 40 30
2． 5 头花蓼水提取物对人 CYP450 酶的抑制作用
考察
2． 5． 1 人肝微粒体体外孵育体系［7］ 采用 NADPH
再生系统，终体积为 200 μL的体外孵育体系包含肝
微粒体蛋白 0. 5 g·L －1、NADP + 20 g·L －1、6-磷酸
葡萄糖 20 g·L －1、MgCl2 13. 3 g·L
－1、6-磷酸葡萄
糖脱氢酶 40 kU·L －1，甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、咪达
唑仑、奥美拉唑和非那西丁在溶液中的浓度分别为
100、50、25、50、50 μmol·L －1，以及不同浓度的头花
蓼水提取物，其余为 pH为 7. 4 的 0. 1 mol·L －1 PBS
缓冲溶液。37℃预孵 3 min，加入各探针底物开始反
应，孵育 60 min，每次加入反应体系中有机试剂终浓
度不超过 1 % (V /V)。反应完毕后加入 100 μL 甲
醇终止反应，再加入 2 mg·L －1葛根素溶液 100 μL，
涡混，超声 3 min，15 000 r·min －1离心 10 min，生成
·8411· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Aug;31(8)
相应的 5 种代谢物(羟基甲苯磺丁脲、6-羟基氯唑沙
宗、α-羟基咪达唑仑、5-羟基奥美拉唑和对乙酰氨基
酚)用 UPLC-MS /MS定量分析。
2． 5． 2 头花蓼水提取物 IC50值的测定 将 9 个不
同浓度的头花蓼水提取物(25、50、50、100、200、400、
600、800、1 000 mg·L －1)分别与混合探针药物在人
肝微粒体孵育液中共同孵化，对照组加入等体积的
纯化水代替，每个样品平行操作 3 次，余下孵育处理
程序同“2． 5． 1”项下，测定方法同“2． 4”项下。使用
GraphPad v5． 0 软件作图并计算 IC50值。
2． 5． 3 体外头花蓼的剂量换算 假设药物全部吸
收经过肝脏代谢。正常成人肝脏重量为 1. 4 kg，每
克肝脏组织可制得 20 mg微粒体酶。孵育体系中药
物浓度为 C，总孵育体积为 200 μL，微粒体酶浓度为
0. 5 g·L －1。那么每个健康肝脏制得微粒体酶量
1. 4 × 103 × 20 = 2. 8 × 104(mg) ;
孵育体系中微粒体酶量 = 0. 2 × 0． 5 = 0． 01(mg) ;
孵育体系中药物量 = 0． 01
2． 8 × 104
×一次给药剂量 = 3． 57
× 10 －6 ×一次口服剂量(mg) ;
孵育体系中药物浓度 C = 3． 57 × 10
－6 ×一次口服剂量
0． 2
= 1. 785 × 10 －5 ×一次口服剂量(g·L －1)。
临床上，头花蓼有关制剂一次口服剂量转化成
生药量为 10 ～ 20 g 生药 /次，根据水提取物的转化
率 17． 79 %，10 ～ 20 g 生药相当于提取物 1. 78 ～
3. 56 g，对应孵育体系中药物浓度 C 为 31. 77 ～
63. 54 mg·L －1。
2． 6 头花蓼水提取物对小鼠肝微粒体 CYP450 酶
的诱导作用研究 ICR 小鼠 (♂，18 ～ 20 g)30 只，
随机分成 5 组，每组 6 只。分为空白对照组(0. 5%
CMC-Na溶液灌胃)、0. 58(7 d)、1. 16(7 d)、0. 58
(14 d)和 1. 16 g·kg －1(14 d)药物处理组(分别给
予 0. 58 g·kg －1和 1. 16 g·kg －1头花蓼提取物的
0. 5% CMC-Na 混悬液灌胃)。在 d 8 和 d 15，以
“2. 3”法制备肝微粒体，小鼠肝微粒体的孵育同
“2． 5． 1”项下，测定方法同“2． 4”项下。
2． 7 统计学处理 实验数据以 珋x ± s 表示，抑制作
用研究，使用 GraphPad v5． 0 软件按照非线性回归，
作图并计算 IC50值;诱导作用研究，使用 GraphPad
v5. 0 软件中 unpaired-t检验分析组间差异。
3 结果
3． 1 头花蓼水提取物对 CYP450 酶的 5 个亚型活
性的抑制作用 结果表明，人肝微粒体中细胞色素
P450 酶 5 种亚型的体外抑制作用随头花蓼水提取
物浓度的增大而逐渐减弱(Fig 1) ，且使用 GraphPad
v5. 0 软件作图并计算孵育液中头花蓼水提取物对
各个亚型的 IC50值远大于 31. 77 ～ 63. 54 mg·L
－1，
IC50值见 Tab 2，揭示头花蓼水提取物对 5 个亚型活
性的抑制作用非常弱。
Tab 2 IC50 values of Polygonum capitatum water extract on five
CYP450 isoforms in human liver microsomes
Probe drugs CYP IC50 /mg·L －1
Tolbutamide CYP2C9 1 780
Chlorzoxazone CYP2E1 2 053
Midazolam CYP3A4(M) 2 214
Testosterone CYP3A4(G) 2 030
Omeprazole CYP2C19 2 287
Acetaminophen CYP1A2 849． 6
Fig 1 Inhibitory effects of Polygonum capitatum water extract on five CYP450 isoforms in human liver microsomes(珋x ± s，n = 3)
·9411·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Aug;31(8)
3． 2 头花蓼水提取物对小鼠 CYP450 酶的诱导作
用 以空白对照组酶活性均值为 100%，1. 16 g·
kg －1 7 d组小鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性分别增加
了 49. 9 %和 21. 1 %(P ＜ 0. 01 和 P ＜ 0. 05) ，0. 58 g
·kg －1 14 d组小鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性分别增
加了 27. 6 % 和 15. 5 % (P ＜ 0. 01 和 P ＜ 0. 05) ，
1. 16 g·kg －1 14 d组小鼠 CYP2C9 和 CYP3A4 活性
分别增加了 67. 5 %和 32. 1 %(P ＜ 0. 01) ，头花蓼
提取物对其余 CYP亚型活性未见明显影响(Fig 2)。
Fig 2 Relative activities of CYP450 isoforms in mouse liver
microsomes after oral administration of
Polygonum capitatum water extract(珋x ± s，n = 3)
a:Control group;b:0. 58 g·kg －1 7 d group;c:1. 16 g·kg －1 7
d group;d:0. 58 g·kg －1 14 d group;e:1. 16 g·kg －1 14 d group．
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0． 01 vs control group．
4 讨论
本实验使用 UPLC-MS /MS 建立了同时测定人
和小鼠肝微粒体孵育系统中 Cocktail 混合探针药物
对应代谢物(CYP1A2-非那西丁 /乙酰氨基酚、
CYP2E1-氯唑沙宗 /6 羟基氯唑沙宗、CYP2C19-奥美
拉唑 /5-羟基奥美拉唑、CYP2C9-甲苯磺丁脲 /羟基
甲苯磺丁脲和 CYP3A4-咪达唑仑 /α-羟基咪达唑
仑)的方法，此方法可特异、快速、准确、灵敏地同时
测定孵育体系中的 5 个代谢物。
实验中采用人混合肝微粒体作为研究对象，可
降低个体和种属差异造成的影响，具有实际指导意
义。5 种亚型酶的特异性抑制剂磺胺苯吡唑、氯美
噻唑、酮康唑、氟康唑、ɑ-萘黄酮均能抑制人肝微粒
体 中 CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19 和
CYP3A4 的活性，并且其 IC50值在文献报道值的 3 倍
以内，说明所建立的“Cocktail 探针药物法”方法成
功。而头花蓼水提取物对这 5 个亚型酶的 IC50值为
849. 6 ～ 2 287 mg·L －1，远大于临床常用剂量 31. 77
～ 63. 54 mg·L －1，说明头花蓼对人肝微粒体中 5 个
亚型酶没有抑制作用。文献报道，小鼠是模拟人肝
脏 CYP450 代谢外源性物质最合适的动物模型。因
此，本实验采用小鼠研究头花蓼水提取物对 CYP450
的抑制和诱导作用［8］。
本实验结果表明，头花蓼水提取物对人肝微粒
体 CYP450 无抑制作用，而在 ICR 小鼠体内对
CYP2C9 和 CYP3A4 产生诱导作用。小鼠体内结果
与头花蓼水提取物对大鼠体内 CYP450 酶活性影响
的文献报道一致［9］。头花蓼相关制剂均为水提取
物，其主要成分为酚酸类和黄酮类，包括原儿茶酸、
没食子酸、槲皮素、槲皮苷、杨梅苷、陆地棉苷等，酚
酸类化合物没食子酸及黄酮类化合物槲皮素和槲皮
苷的单体对 CYP450 酶的体外活性研究表明，其对
CYP2C9 和 CYP3A4 主要为抑制作用［10 － 15］。槲皮
素对 CYP450 酶的活性影响虽有许多报道，但大部
分报道为槲皮素的单体在体外肝微粒体或原代细胞
中对 CYP450 酶的活性影响，其所使用的槲皮素单
体浓度与头花蓼水提取物中的槲皮素浓度也不同，
如和凡等［13］关于槲皮素、山奈酚、芦丁对大鼠肝微
粒体细胞色素 P450 酶的诱导作用研究中，槲皮素单
体的低、中、高浓度分别为 10、50、250 mg·kg －1，而
本水提取物槲皮素含量为 1. 10 mg·kg －1，浓度差
异较大，加之研究对象头花蓼水提取物成分复杂，使
得结果不一致。我们又结合中药药物相互作用研究
的相关文献，同样以黄酮类成分的中药水提取物如
银杏水提取物［16 － 17］与黄芩水提取物［18］对大鼠
CYP450 酶活性的影响，表明对 CYP2C9 与 CYP3A4
存在诱导作用。从查阅文献可知，化合物单体与中
药提取物、体外实验与体内实验之间对 CYP450 酶
活性影响都存在差异，所以暂时无法推测头花蓼水
提取物诱导 CYP2C9 与 CYP3A4 活性的化学成分，
该部分内容也在进一步的研究中。
综上所述，临床上与以头花蓼为主要原料的单
方制剂(如热淋清颗粒)联合用药时，不会出现由于
抑制作用导致的药物不良反应，但可能使 CYP2C9
和 CYP3A4 的底物药物代谢过快，而导致药效降低。
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Inhibitory and inductive effects of Polygonum capitatum water extract on CYP450
LU Yuan1，3，PAN Jie1，XIE Yu-min1，ZHENG Lin1，3，HUNAG Yong1，3，
WANG Yong-lin1，3，LI Yong-jun2，3
(1． Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics in Guizhou Province，Guiyang 550004，China;2． School of Pharmacy，Guiyang Medical
College，Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicines and TCM，Ministry of Education，
Guiyang 550004，China;3． School of Pharmacy，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，China)
Abstract:Aim To evaluate the inhibitive and induc- tive effects of Polygonum capitatum water extract on
·1511·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Aug;31(8)
main cytochrome P450 isoforms in human and liver mi-
crosomes of mouse in vitro for predicting the herb-drug
interactions in clinical application． Methods The in
vitro inhibitory effect was evaluated by incubating Po-
lygonum capitatum water extract with the probe sub-
strates of main phase I metabolic enzymes in human
liver microsomes， including CYP1A2， CYP2E1，
CYP2C9，CYP2C19 and CYP3A4． Mice were adminis-
tered with Polygonum capitatum water extract at dosage
of 0． 58 g·kg －1 and 1． 16 g·kg －1 by gastric lavage
for successive 7 days and 14 days，then the cocktail-
LC-MS /MS method was applied to assess the inductive
effect of main CYP450 isoforms in mouse liver micro-
somes． Results The IC50 values of Polygonum capita-
tum water extract on main CYP450 isoforms in human
liver microsomes were from 849． 6 mg·L －1 to 2 287
mg·L －1 ． Compared with the blank control group，the
activites of CYP2C9 and CYP3A4 in 1． 16 g·kg －1 7 d
group were about 49． 9 % and 21. 1 % higher (P ＜
0. 01， P ＜ 0. 05) respectively， the activities of
CYP2C9 and CYP3A4 in 0． 58 g·kg －1 7 d group were
27. 6 % and 15. 5 % higher (P ＜ 0. 01，P ＜ 0. 05)
respectively，the activities of CYP2C9 and CYP3A4 in
1． 16 g·kg －1 14 d group were 67. 5 % and 32. 1 %
higher (P ＜ 0. 01)respectively，while the activities of
CYP1A2，CYP2E1 and CYP2C19 were not increased
significantly in Polygonum capitatum treatment group．
Conclusions Polygonum capitatum water extract do
not show the inhibitory effect on main CYP450 in hu-
man liver microsomes． There is induction on CYP2C9
and CYP3A4 in mouse liver microsomes by Polygonum
capitatum water extract．
Key words:Polygonum capitatum water extract;
CYP450 enzyme;enzyme inhibition;enzyme induc-
tion;herb-drug interaction;liver microsomes
网络出版时间:2015 － 7 － 22 10:42 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20150727． 0901． 028． html
Apelin /APJ系统在脂多糖诱导大鼠肺微血管内皮
细胞损伤中的变化及其作用研究
刘焕龙1，朱忠宁2，江 平2，韩 雨2，苏素文2，陈雪彦2
(1．河北医科大学第二医院药学部，河北 石家庄 050000;2．河北医科大学药理学教研室，河北 石家庄 050017)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2015． 08． 025
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2015)08 － 1152 － 07
中国图书分类号:R-332;R322． 12;R322． 35;R329． 24;R392．
11;R544. 022;R977. 6
摘要:目的 探讨 Apelin /APJ 系统在脂多糖诱导大鼠肺微
血管内皮细胞(PMVECs)损伤中的变化，并研究 Apelin 的作
用及机制。方法 采用植块法培养大鼠 PMVECs，VIII因子
相关抗原免疫细胞化学染色进行鉴定。噻唑蓝(MTT)比色
法测定 PMVECs活力;RT-PCR 法检测 Apelin、APJ mRNA 表
达的变化;Western blot法检测大鼠 PMVECs中 PCNA蛋白表
收稿日期:2015 － 04 － 03，修回日期:2015 － 05 － 05
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 81273600) ;河北省自然
科学基金资助项目 (No H2013206147)
作者简介:刘焕龙(1976 －) ，男，博士，副主任药师，研究方向:心血
管药理学，Tel:0311-86261032，E-mail:lhlong1026 @ 163．
com;
陈雪彦(1978 －) ，女，博士，副教授，研究方向:心血管药
理学，通讯作者，Tel:0311-86265644，E-mail:cxylong@ 126．
com
达及 Akt 的磷酸化水平。结果 LPS 在短时间内能够使
Apelin、APJ mRNA表达水平呈代偿性上升(P ＜ 0. 01) ，但随
着作用时间延长，基因表达受到明显抑制，低于对照组(P ＜
0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，提示 Apelin /APJ系统可能参与了 LPS 诱
导的大鼠 PMVECs损伤。MTT 结果表明，10 －9 ～ 10 －6 mol·
L －1的 Apelin明显促进了大鼠 PMVECs 增殖(P ＜ 0. 05 或 P
＜ 0. 01) ，且具有一定的浓度和时间依赖性。而且，Apelin 还
不同程度地改善了 LPS诱导的 PMVECs 细胞损伤(P ＜ 0. 05
或 P ＜ 0. 01)。另外，Western blot结果显示，Apelin还明显逆
转了 LPS诱导的 PCNA 蛋白表达和 Akt 磷酸化水平的降低
(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。结论 Apelin /APJ系统参与了 LPS
诱导的大鼠 PMVECs 损伤。Apelin 对于维护肺微血管内皮
细胞功能，干预 LPS诱导的 PMVECs 损伤起着重要作用，可
能与其激活 Akt磷酸化通路有关。
关键词:Apelin;APJ;脂多糖;肺微血管内皮细胞;增殖;Akt;
增殖细胞核抗原(PCNA)
肺动脉高压因其基础疾病不同，发病机制也不
·2511· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Aug;31(8) :1152 ～ 8