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2013 NO.03
SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION 学 术 论 坛
青叶胆片收载于中国药典2010版一部
中 ,由为青叶胆经加工制成的片 ,主治清肝
利胆 ,清热利湿。用于黄疸尿赤 ,热淋涩痛。
该标准采用薄层色谱法只对青叶胆片中的
齐墩果酸进行了定性鉴别。本文建立了高
效液相色谱法的外标法对青叶胆片中齐墩
果酸进行含量测定 ,结果表明本文方法简
便、准确、可靠 ,可作为该制剂的含量测定
方法。
1 仪器与试药
日本岛津全自动高效液相色谱仪 ,型
号 :LC-20AT,配备LC工作站 ;UV—2600型
紫外分光光度计。齐墩果酸对照品(中国药
品生物制品检定所 ,批号为110709-200505,
供含量测定用);青叶胆片(云南白药集团丽
江药业有限公司 ,产品批号为 20120901、
20120906、20120907);甲醇为色谱纯,其他试
剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 : Sa p p h i r e C 18柱 ( 20 0 mm×
4．6 mm,5 mm);流动相 :甲醇 -0.2％冰醋酸
溶液(85∶15);检测波长 :210 nm;柱温 :30℃ ;
流速 :1.0 mL／min;进样量 :10 μL。按外标
法以峰面积计算含量。
2.2 溶液制备
对照品溶液的制备 :取齐墩果酸对照
品约10 mg,精密称定 ,置50 mL量瓶中 ,加
甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取
1 mL,置25 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得对照品溶液。
供试品溶液的制备 :取重量差异项下
的样品 ,研细 ,细粉末约3.5 g,精密称定 ,置
锥形瓶中 ,精密量取100 mL甲醇 ,加入锥形
瓶中 ,称定重量。加热回流30 min,放冷 ,称
定重量 ,以甲醇补充失去的重量 ,摇匀 ,滤
过 ,取滤液作为供试品溶液。
阴性对照溶液的制备 :按青叶胆片处
方比例制成不含青叶胆的阴性对照品 ,按
供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
2. 3. 1 阴性干扰试验
取供试品溶液、对照品溶液及阴性对
照品溶液 ,按拟订的色谱条件测定。供试品
溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留
时间的色谱峰 ,而阴性无干扰。
2.3.2 线性关系考察
精密称取齐墩果酸对照品11.50 mg,置
50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精
密吸取对照品溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL,
分别置25 mL量瓶中 ,加流动相溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为系列对照品溶液 ,分别
吸取10 mL,按2.1项下色谱条件测定 ,以进
样量(ng)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标
绘制标准曲线。(表1)
得回归方程y=5487x+39280,R2=0．9991。
结果表明齐墩果酸进样量线性范围是
46～230 ng。
2. 3. 3 精密度试验
取齐墩果酸对照品约10 mg,精密称定,
高效液相色谱法测定青叶胆片中齐墩果酸含量
刑爽 1 刘鹏 2
( 1 .黑龙江省鹤岗市哈星药业集团有限公司; 2 .哈药集团三精千鹤制药有限公司 黑龙江鹤岗 1 5 4 1 0 1 )
摘 要:目的 :建立青叶胆片中齐墩果酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法 ,Sapphire C18柱(200 mm×4．6 mm,5 μm);
流动相:甲醇-0.2％冰醋酸溶液 (85∶15);检测波长 :210 nm;柱温 :30℃。结果 :齐墩果酸进样量线性范围为46～230 ng,y=5487x+39280,
R2=0．9991,平均加样回收率为100.00％ ,RSD为1.24％ (n=6)。结论 :HPLC法简单可行、结果可靠 ,可用于定量控制青叶胆片的质量。
关键词:青叶胆片 齐墩果酸 高效液相色谱法
中图分类号 :R284 文献标识码 :A 文章编号 :1672-3791(2013)01(c)-0244-01
置50 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,精密吸取 1 mL,置25 mL量瓶中 ,
加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得对照
品溶液。精密吸取对照品溶液10 mL,连续进
样 6次 ,依法测定。结果的 R S D =0 . 4 4％
(n=6),表明仪器精密度良好。
2. 3. 4 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 ,在放置0,2,
4,6,8 h时分别进样测定。(表2)
结果含量的RSD=1.27％ (n=5),表明供
试品溶液在8 h内稳定。
2. 3. 5 重现性试验
分别称取同批号20120901重量差异项
下样品 6份 ,研细 ,细粉末约 3. 5 g,精密称
定 ,置锥形瓶中 ,精密量取 100 mL甲醇 ,加
入锥形瓶中 ,称定重量。加热回流30 min,放
冷 ,称定重量 ,以甲醇补充失去的重量 ,摇
匀 ,滤过 ,取滤液作为供试品溶液。按供试
品溶液制备方法制备溶液 ,依法进样测定。
结果含量的RSD=1.21％ (n=6),表明方法
重现性良好。
2. 3. 6 加样回收试验
在已知含量的样品粉末中 ,加入一定
量的齐墩果酸对照品 ,按供试品溶液制备
方法制备溶液 ,依法测定并计算回收率。由
结果可见 ,回收率在95％～105％之间 ,RSD
值为1.24％。测定方法回收率良好。
2 .4 样品含量测定(表 3 )
3 讨论
取齐墩果酸对照品适量 ,用流动相溶
液溶解 ,在200～400 nm波长范围内扫描 ,结
果齐墩果酸在210 nm处有最大吸收 ,故选
210 nm作为检测波长。
在试验过程中 ,曾采用乙腈 -水 (20∶
80)、甲醇-0．3％磷酸酸溶液(80∶20)等多种
流动相 ,结果色谱峰分离效果均不理想而
未被采用。文中选用的流动相甲醇 -0．2％
冰醋酸溶液 (85∶15)分离效果较好 ,且保留
时间较短。实验中还考察了不同柱温 (10、
25、35、40℃)对色谱分离效果的影响 ,结果
各柱温对分离效果、保留时间的影响有明
显区别 ,柱温为30℃分离效果好。因此确定
以柱温为30℃。
HPLC法简单可行、结果可靠 ,可用于
定量控制青叶胆片的质量。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典 [M].化学工业出
版社，2010,一部 .
对照品进样量(μL) 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
齐墩果酸进样量(ng) 46 92 138 184 230
色谱峰面积 214586 624555 853129 1047611 266338
表 1 含量线性试验结果
时间(h) 0 2 4 6 8
峰面积 623680 626589 602444 632554 619883
RSD 1.27%
表 2 供试品溶液稳定性试验结果
产品批号 高效液相法含量(m g/g)
20120901 0.222
20120904 0.226
20120905 0.253
表 3 3 批样品含量测定结果
DOI:10.16661/j.cnki.1672-3791.2013.03.036