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主成分及聚类分析法对不同产地头花蓼的综合质量评价



全 文 :[收稿日期] 20111108(003)
[基金项目] 黔科合重大专项(20086020) ;十一五科技支撑项目(2009BAI74B01-4) ;贵阳市科技局项目( [2010]筑科农合同字第 1 中 ~
12 号)
[第一作者] 潘雯婷,在读硕士研究生,从事中药质量控制与新药研究,Tel:13639073195,E-mail:panwenting126@ 126. com
[通讯作者] * 张丽艳,教授,硕士生导师,从事中药质量控制与新药研究,Tel:13984870641,E-mail:zly1964@ 163. com
主成分及聚类分析法对不同产地头花蓼的综合质量评价
潘雯婷1,张丽艳1* ,谢宇2,李孟林2,周涛1,魏升华1,何平1
(1. 贵阳中医学院,贵阳 550002;2. 贵州威门药业股份有限公司,贵阳 550002)
[摘要] 目的:综合比较、评价不同产地头花蓼的质量。方法:采用高效液相色谱法、紫外分光光度法、水溶性浸出物测
定法,对不同产地的 41 个野生及栽培头花蓼中槲皮素、槲皮苷、没食子酸、总黄酮、浸出物进行测定,并以上述 5 个指标成分的
含量为指标,运用主成分和聚类分析对不同产地的 41 个野生及栽培头花蓼进行综合质量评价研究。结果:不同产地头花蓼中
槲皮素、槲皮苷、没食子酸、浸出物、总黄酮含量有明显差异,除贵州省毕节县亮岩镇 2 号样品外,其余样品均达到药用要求。
以贵州东部头花蓼药材样品的综合质量较好。结论:头花蓼样品中所含的上述化学成分受产地、土壤类型影响较大,受海拔
影响较小。其中,贵州西部地区头花蓼野生资源较为丰富,但其指标性成分槲皮素含量及综合质量低于贵州东部地区及外省
样品;贵州东部地区头花蓼槲皮素含量较高、综合质量较好,验证了头花蓼基地建在黔东南施秉的合理性。
[关键词] 头花蓼;主成分分析;聚类分析;质量评价
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)10-0153-05
Comprehensive Quality Evaluation of Polygonum Capitatum from Different
Habitats by Principal Component Analysis and Cluster Analysis Method
PAN Wen-ting1,ZHANG Li-yan1* ,XIE Yu2,LI Meng-lin2,ZHOU Tao1,WEI Sheng-hua1,HE Ping1
(1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550002,China;
2. Guizhou Warmen Pharmaceutical Company Limited,Guiyang 550000,China)
[Abstract] Objective: To campare and evaluate the quality of Polygonum capitatum from different
habitats. Method:Quercetin,quercitrin,gallic acid,general flavone and extractives of 41 wild and cultivated P.
capitatum were determined by HPLC,US and water soluble extractive method. Through the content of five
indicated ingredients as the index, the quality of 41 wild and cultivated P. capitatum was assessed by principal
componentanalysis and cluster analysis method. Result: The differeces of quercetin,quercitrin,gallic acid,
general flavone and extractives among P. capitatum from different habitats are significant. In addition to sample 2
from town of Liangyan Bijie County,the remaining samples are up to the medical requirements. The quality of P.
capitatum in east of guizhou is the best. Conclusion:The chemical composition above in P. capitatum is more
influenced by the place of origin and the type of soil comparatively than by the elevation. The wild P. capitatum in
the west guizhou is widespread,but the content of the indicated ingredient-quercetin-is lower than the east one and
other provinces,so reaches the same conclusion to the comprehensive quality. The content and the comprehensive
quality of quercetin of P. capitatum in the east guizhou is better.,which proves the rationality of GAP base of P.
capitatum in the southeast guizhou. This study build up the reference to the quality,excellent provenance selection
and GAP production of P. capitatum.
[Key words] Polygonum capitatum;multi component;cluster analysis;quality evaluation
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第 18 卷第 10 期
2012 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 10
May,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.10.051
头花蓼为蓼科植物头花蓼的干燥全草或地上部
分,收载于《贵州省中药材民族药材质量标准》2003
年版,具清热利湿、抗菌消炎、利尿通淋等功效[1]。
头花蓼是贵州常用苗药,是贵州省中药现代化
重点发展的“十大苗药”和重点培育发展的“十大中
药产业链”的品种之一。贵州威门药业已在贵州施
秉及贵阳乌当区建立了头花蓼规范化种植基地,并
通过国家 GAP 认证。
现在有关头花蓼 GAP 种植及化学成分等方面
的研究已取得一定成果[2],但头花蓼药材现行质量
标准较为简单,仅以单一成分槲皮素为指标进行评
价,无法达到真实、全面反应药材内在品质的目的。
为了更好的综合比较、评价不同产地头花蓼的质量,
本试验以槲皮素、槲皮苷、没食子酸、浸出物、总黄酮
为指标,运用主成分和聚类分析,对贵州、云南等 39
个地区的野生及云南保山、腾冲引种栽培于施秉
GAP 基地的头花蓼药材,共 41 个样品进行综合评
价研究,并结合采集地点、土壤类型、海拔等因素来
探讨可能导致不同产地头花蓼之间化学成分差异的
原因。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪(真空脱
气机,自动进样器,四元泵,DAD 检测器) ,Agilent
1100 液相色谱系统化学工作站。
1. 2 试药 槲皮素对照品(批号 100081-200406,含
量测定用) ,没食子酸对照品(批号 110831-200302,
含量测定用) ,槲皮苷对照品(批号 111538-200403,
含量测定用) ,芦丁(批号 110725-200513,含量测定
用)由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、四氢
呋喃、乙腈为色谱纯,水为纯净水,其他试剂均为分
析纯。
1. 3 头花蓼药材 41 个不同产地头花蓼药材均为
自采。经贵阳中医学院魏升华副教授鉴定为蓼科植
物头花蓼 Polygonum capitatum Buch. -Ham. ex D.
Don 的干燥地上部分。每个样地样本于 40 ℃烘干、
粉碎、密封保存,见表 1。
2 方法
2. 1 头花蓼槲皮素的测定 参照[1]《贵州省中药
材、民族药材质量标准》2003 年版头花蓼项下进行
测定。
2. 2 头花蓼槲皮苷的测定 参照谢宇[3]的试验方
法进行测定。
2. 3 头花蓼没食子酸的测定 参照谢宇[4]的试验
方法;以水为提取溶剂加热回流 2 h,采用高效液相
色谱法,以甲醇-水-N,N-二甲基甲酰胺-冰醋酸
(1∶ 95∶ 3∶ 1)为流动相,在 272 nm 波长下检测。
2. 4 头花蓼浸出物的测定 参照 2010 年版《中国
药典》水溶性浸出物测定法(附录Ⅹ A)项下的热浸
法进行测定。
2. 5 头花蓼总黄酮的测定 参照张丽艳[5]的试验
方法进行测定。
2. 6 数据处理方法 数据处理主要使用 SPSS 17. 0
数据处理软件。
3 结果与分析
3. 1 主成分分析用于头花蓼的质量评价 以头花
蓼 5 个指标的含量为指标,运用主成分分析对 41 个
不同产地头花蓼进行分析评价。第 1 主成分方差贡
献率为 61. 710%,槲皮素贡献率最大,特征向量为
0. 931;第 2 主成分方差贡献率为 17. 886%,没食子
酸贡献率最大,特征向量为 0. 816。前两个主成分
方差累计贡献率达到 79. 595%,当累计贡献率达到
75%即认为比较满意[6],因此,第 1、第 2 主成分即
可基本反映总体情况,达到降维的目的(图 1)。根
据特征向量,可得到主成分线性组合表达式为:
F = 0. 617 1F1 + 0. 178 9F2,(F1 = 0. 931X1 + 0. 846X2 +
0. 523X3 + 0. 636X4 + 0. 908X5;F2 = 0. 037X1 - 0. 255X2 +
0. 816X3 - 0. 402X4 + 0. 011X5)
图 1 41 个不同产地头花蓼样品的聚类分析
按上述函数计算出综合主成分值并排序,可得
到 41 个头花蓼样品质量综合评价值[7-9],结果见表
1。槲皮素、槲皮苷、浸出物、总黄酮特征向量的方向
相同,与没食子酸特征向量方向相反[7]。可见槲皮
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第 18 卷第 10 期
2012 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 10
May,2012
表 1 不同产地头花蓼含量测定结果及主成分排序
No. 采样地点
海拔
/m
土壤 纬度 经度
槲皮素
/%
槲皮苷
/%
没食子酸
/%
浸出物
/%
总黄酮
/%
主成分
评价结
果排序
1 贵州省兴仁县马家屯 1 384 石灰岩风化沙砾土 25°24. 533 105°08. 734 0. 362 0. 680 0. 173 28. 851 1. 874 6
2 贵州省罗甸罗苏乡 692 黄色沙砾土 25°18. 929 106°33. 439 0. 387 0. 708 0. 202 28. 869 3. 185 1
3 贵州省石阡县中坝镇 685 黄土 27°28. 09 108°12. 45 0. 270 0. 486 0. 205 27. 094 1. 624 11
4 贵州省赫章县达依镇 1 445 风化沙砾土 27°12. 562 104°43. 320 0. 440 0. 773 0. 131 16. 935 2. 749 32
5 云南省师宗县五龙乡 1 380 石灰岩黑色土 24°39. 130 104°10. 907 0. 295 0. 577 0. 147 23. 077 2. 562 17
6 云南省师宗县高良镇 1 459 黄壤 24°28. 574 104°23. 558 0. 376 0. 628 0. 176 27. 255 2. 812 8
7 云南省镇雄中屯乡 1 404 黄色石灰土 27°20. 696 104°51. 861 0. 344 0. 614 0. 176 21. 693 1. 815 24
8 广西省田林县利周乡 1 号 556 水稻土 24°21. 388 106°22. 524 0. 322 0. 546 0. 179 24. 404 2. 000 18
9 广西省田林县利周乡 2 号 1 050 黄色砂砾土 24°23. 033 106°24. 563 0. 390 0. 799 0. 210 26. 909 2. 250 9
10 广西省田林县浪平乡 1 189 石灰岩黄土 24°29. 841 106°21. 152 0. 324 0. 693 0. 163 27. 133 3. 312 4
11 广西省乐业县国营林场 958 黄土 24°51. 920 106°34. 190 0. 331 0. 631 0. 167 28. 350 2. 437 5
12 湖南省古丈县古阳镇 314 石灰岩黄砂砾土 28°35. 319 109°55. 308 0. 321 0. 540 0. 192 29. 322 2. 937 3
13 重庆市南川区三汇场 588 石灰岩黑沙土 29°04. 307 107°01. 435 0. 106 0. 160 0. 216 25. 809 1. 250 21
14 四川省兴文县僰王山镇 372 黑色土 28°20. 484 105°03. 663 0. 248 0. 434 0. 186 24. 434 1. 249 22
15 四川省兴文县石海镇 488 黄色石灰土 28°11. 642 105°09. 258 0. 451 0. 746 0. 186 25. 089 2. 374 12
16 四川省叙永县两河镇 379 黑色砂砾土 28°06. 529 105°22. 894 0. 222 0. 350 0. 161 23. 116 1. 125 25
17 四川省兴文县古宋镇 375 黄色石灰土 28°18. 37 105°13. 03 0. 251 0. 619 0. 206 26. 004 1. 625 15
18 四川省高县沙镇 373 黄色石灰土 28°35. 22 104°44. 12 0. 209 0. 371 0. 219 25. 658 1. 249 19
19 四川省叙永县赤水镇 797 黄色石灰土 27°43. 57 105°34. 38 0. 294 0. 539 0. 271 21. 624 1. 500 28
20 贵州省雷山县西江镇 1 号 794 黄色砂砾土 26°31. 021 108°09. 479 0. 278 0. 627 0. 689 27. 248 1. 251 14
21 贵州省雷山县西江镇 2 号 819 风化沙土 26°28. 130 108°07. 454 0. 196 0. 546 0. 436 24. 509 1. 875 20
22 贵州省雷山县单江镇 855 石灰岩黄色砂砾土 26°21. 691 108°04. 211 0. 174 0. 432 0. 439 28. 021 1. 250 13
23 贵州省毕节县亮岩镇 1 号 986 黄棕壤 27°34. 968 105°29. 340 0. 114 0. 214 0. 833 17. 290 0. 875 40
24 贵州省毕节县亮岩镇 2 号 1 066 黄色砂砾土 27°35. 645 105°29. 495 0. 076 0. 110 1. 024 19. 494 0. 75 39
25 贵州省毕节县亮岩镇 3 号 1 126 灰棕色沙土 27°36. 136 105°29. 297 0. 124 0. 404 0. 334 18. 948 0. 75 38
26 贵州省盘县柏果镇 1 516 砂岩砂砾土 25°02. 258 104°30. 661 0. 174 0. 468 1. 043 19. 983 1. 000 36
27 贵州省盘县水塘镇 1 561 黄色石灰土 25°39. 847 104°36. 039 0. 202 0. 389 0. 677 22. 752 1. 125 31
28 贵州省盘县刘官镇 1 475 风化砂砾土 25°49. 232 104°44. 407 0. 274 0. 533 0. 335 25. 170 2. 250 16
29 贵州省晴隆县沙子镇 1 号 1 341 石灰岩砂砾土 25°48. 865 105°11. 003 0. 246 0. 541 1. 112 22. 201 1. 875 26
30 贵州省晴隆县鸡场镇 2 号 1 222 黄砂砾土 25°48. 369 105°13. 645 0. 156 0. 462 0. 590 20. 418 1. 000 35
31 贵州省兴义市则戎乡 1 号 1 178 石灰岩黄土 24°53. 272 104°57. 029 0. 171 0. 494 0. 295 20. 561 1. 624 32
32 贵州省兴义市则戎乡 2 号 1 228 石灰岩黄土 24°53. 848 104°57. 497 0. 212 0. 595 0. 450 22. 011 1. 499 29
33 施秉引种于云南腾冲 934 黄土,产地火山
岩黑土
27°08. 149 107°56. 451 0. 300 0. 697 0. 407 22. 542 1. 375 27
34 施秉引种于云南保山 934 黄土,产地石灰
岩黑土
27°08. 149 107°56. 451 0. 364 0. 987 0. 794 26. 766 1. 874 10
35 贵州省水城县鸡场乡 1 185 黄色砂砾土 26°16. 069 104°41. 224 0. 113 0. 353 0. 616 15. 420 0. 750 41
36 贵州省凯里市三棵树镇 695 黄色砂砾土 26°33. 800 108°07. 641 0. 396 0. 896 0. 625 28. 221 3. 502 2
37 贵州省纳雍县沙包乡 1 262 褐色砂砾土 26°49. 142 105°23. 460 0. 228 0. 662 0. 689 19. 231 1. 750 34
38 贵州省普安县江西坡镇 1 358 黄色沙土 25°47. 904 105°03. 663 0. 274 0. 443 0. 436 18. 055 1. 000 37
39 贵州省黔西关门山 1 087 硅铝质砂砾土 27°13. 88 106°14. 350 0. 216 0. 436 0. 439 24. 819 1. 25 23
40 贵州省高坡石门 1 344 黄色砂砾土 25°43. 765 105°21. 003 0. 318 0. 618 0. 833 20. 299 2. 000 30
41 贵州省龙里县湾寨 1 256 黄色砂砾土 25°46. 865 105°73. 033 0. 260 0. 718 1. 024 29. 037 2. 126 7
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潘雯婷,等:主成分及聚类分析法对不同产地头花蓼的综合质量评价
素、槲皮苷、浸出物、总黄酮之间为正相关关系,分别
都与没食子酸成负相关关系(表 2)。
表 2 变量总体描述
项目 1 2 3 4 5
特征根 0. 617 1 0. 178 860. 133 530. 048 0 0. 022 5
方差贡献率% 61. 71 17. 886 13. 353 4. 802 2. 249
方差累积贡献率% 61. 71 79. 595 92. 494 97. 751 100
槲皮素特征向量 X1 0. 931 0. 037 - 0. 224 0. 128 - 0. 254
槲皮苷特征向量 X2 0. 846 - 0. 255 - 0. 394 0. 153 0. 203
没食子酸特征向
量 X3
0. 523 0. 816 0. 206 0. 106 0. 079
浸出物特征向量 X4 0. 636 - 0. 402 0. 648 0. 119 0. 010
总黄酮特征向量 X5 0. 908 0. 011 0. 024 * - 0. 418 0. 019
3. 2 头花蓼质量评价的聚类分析 以头花蓼 5 个
指标的含量为指标,采用 Euclidean distance 系数对
不同产地头花蓼质量指标进行聚类分析。分析结果
见图 2,当阈值为 15 时,41 个不同产地头花蓼样品
被聚为两组:四川兴文县石海镇、贵州盘县刘官镇、
四川兴文县僰王山镇、贵州黔西县关门山、广西田林
县利周乡 1 号、贵州雷山县西江镇 2 号、重庆市南川
区三汇场、四川高县沙镇、四川兴文县古宋镇、贵州
兴仁县马家屯、贵州龙里县湾寨、广西乐业县国营林
场、贵州罗甸罗苏乡、湖南古丈县古阳镇、贵州凯里
市三棵树镇、云南师宗县高良镇、广西田林县浪平
乡、广西田林县利周乡 2 号、施秉引种于云南保山、
贵州石阡县中坝镇、贵州雷山县西江镇 1 号、贵州雷
山县单江镇聚为Ⅰ组,其余样品聚为Ⅱ组。
A,B. 多为外省样品;C,D. 多为贵州省样品
图 2 41 个不同产地头花蓼样品的散点图
结合主成分分析和聚类分析的结果可以看出,
第Ⅰ组多为贵州东部地区及外省样品,综合质量评
价值排序在 1 ~ 23,综合质量评价值较高;第Ⅱ组多
为贵州西部地区的样品,综合质量评价值排序在 24
~ 41,综合质量评价值较低。贵州西部地区的样品
较多,反映了此地区头花蓼野生资源较为丰富,但通
过综合质量评价,此区头花蓼综合质量评价值较低,
明显低于贵州东部地区及外省样品。
3. 3 头花蓼化学指标与地理分布的相关性评价
为进一步研究头花蓼化学成分与地理分布之间的关
系,应用 SPSS 17. 0 对头花蓼中五指标含量与其所
在地地理分布进行相关分析。结果显示:除槲皮苷
外其余四指标与不同产地、土壤类型相关性显著。
说明不同产地、土壤类型对头花蓼化学指标具有一
定的影响,海拔高度与浸出物的相关性显著。结果
见表 3。
表 3 头花蓼化学指标与地理位置的相关性
地理分布 没食子酸 槲皮素 槲皮苷 浸出物 总黄酮
不同采样地 - 0. 6541) - 0. 3901) - 0. 049 - 0. 3621) - 0. 3721)
海拔 - 0. 108 - 0. 033 0. 085 - 0. 4061) - 0. 023
土壤类型 - 0. 3941) - 0. 0541) - 0. 655 - 0. 3641) - 0. 3741)
注:1)在 95%的置信度下相关性显著。
以主成分分析为基础,运用 SPSS 17. 0 软件,各
采样点的第 1 和第 2 主成分得分系数生成散点图,
结果见图 2。结果显示:A,B 两组多为外省样品,且
槲皮素、槲皮苷、浸出物、总黄酮含量均较高,没食子
酸含量较低。C,D 两组多为贵州省内样品,没食子
酸含量较高,槲皮素、槲皮苷、浸出物、总黄酮含量较
低。且 C,D 两组样品较为集中在贵州省西部地区,
形成此种聚集可能与不同地理环境有关。本实验的
头花蓼采自贵州、四川、重庆、云南、广西、湖南六省
41 个地区。除湖南外均位于云贵高原地区,是我国
地形分布的第二级阶梯,西高东低使得来自太平洋
的暖湿气流可以自东向西爬升,给此地区带来大面
积降水,形成亚热带季风气候。头花蓼种子是以人
畜和风力散布,贵州典型的喀斯特地貌所形成的地
理隔离,可能对头花蓼种质资源交流产生了一定影
响[8]。头花蓼样品在此地区较为集中的聚集,可以
推测地理环境对头花蓼药材影响较大。
4 讨论
运用主成分分析和聚类分析对 41 个不同产地
头花蓼进行分析评价。结果表明不同产地头花蓼药
材中槲皮素、槲皮苷、没食子酸、浸出物、总黄酮含量
有明显差异,其中以贵州省凯里市三棵树镇、贵州省
罗甸县罗苏乡等样品综合质量较好。以槲皮素单一
指标来看,除贵州省毕节县亮岩镇 2 号的样品槲皮
素含量低于 0. 1%外[1],其余样品均达到药用要求。
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第 18 卷第 10 期
2012 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 10
May,2012
头花蓼原有质量标准较为简单,建议采用多指标综
合评价与药效作用相结合的方法对头花蓼进行质量
控制。
王祥培[10-11]等用 HPLC 测定不同产地的头花蓼
中槲皮苷、没食子酸的含量,得出贵州施秉头花蓼中
槲皮苷含量较高、贵州剑河头花蓼中没食子酸含量
较高。周涛[12]等对不同地理种源头花蓼中没食子
酸的含量进行分析,得出贵州东部地区没食子酸含
量要略高于西部地区。本文首次以多指标对头花蓼
进行综合评价得出凯里样品综合质量较好,此地区
属于贵州东部地区,与文献报道结果一致。头花蓼
国家级 GAP 基地就建在贵州东部地区施秉县,此研
究结果进一步验证了基地选址的正确性,云南保山、
腾冲引种栽培于施秉 GAP 基地的头花蓼药材综合
质量评价值排序为 10,27,高于大多数野生药材,可
见栽培品质量较为稳定、可控。建议今后可在贵州
东部地区大力发展头花蓼种植。而罗甸地区样品为
首次采集,以前未见文献报道,应进一步对此地区头
花蓼进行跟踪调查研究。
运用相关性分析,头花蓼样品中化学成分受产
地和土壤类型的影响较大,海拔对头花蓼的化学成
分含量影响较小。因此,有效成分与生境之间的关
联关系值得进一步研究,这对于提高栽培品的质量
具有实际意义。
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[责任编辑 蔡仲德]
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潘雯婷,等:主成分及聚类分析法对不同产地头花蓼的综合质量评价