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2009年第 3期
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调查研究
3.3　19日龄雏鸡亚慢性毒性试验表明 , 较长时间和大剂量
口服 NAS制剂对动物内脏无影响。该制剂毒性低 , 无副作
用 , 安全可靠。
参考文献:
[ 1] 湖南医学院卫生学教学组.卫生毒理学实验方法 [ M] .
北京:人民卫生出版社 , 1979:132-133.
[ 2] 李义奎 , 王钦茂 , 徐淑云.中药药理实验方法学 [ M] .上
海:科学技术出版社 , 1991:30-40.
[ 3] 徐淑云 ,卞汝濂 , 陈　修.药理实验方法 [ M] .北京:人民
卫生出版社 , 1994:1233-1240.
[ 4] 贵州农学院.生物统计附实验设计 [ M] .北京:农业出版
社 , 1997:21-113.
ToxicologicalstudyonNASpreparations
CUIYing, LIANGJian-ping, LUOYong-jiang, SHANGRuo-feng
(LanzhouResearchInstituteofAnimal＆VeterinaryPharmaceuticsSciences, Chinese
AcademyofAgriculturalSciences, LanzhouGansu730050, China)
Abstract:ToevaluatethetoxicityofNASPreparations, generaltoxicologytestweremadeinmiceandchickens.Acutetoxicity
showedthatLD50 ofNASpreparationswas(9.057 3±0.030 9)g/kgafteroraladministrationinmice.SubacutetoxicitytestingofNAS
preparationsshowedthatnoclinicalsignsappearedinchickensafteroraladministrationatthedosageof1.80, 0.45, 0.15 g/(kg·d)
for14days.Onthecontray, thepreparationshadtheroleofgetingbodyweight, andthegrowthratewasindirectproportiontodosages.
Keywords:NASpreparations;acutetoxicity;subacutetoxicity
地锦草多糖提取工艺研究
黄　浩 ,刘湘新
(湖南农业大学动物医学院 , 湖南长沙　410128)
　　摘　要:　用超声波结合正交试验方法研究了超声波对地锦草多糖提取条件的影响。结果表明 , 在试验条件
限定的范围内 , 对浸出率影响顺序为超声时间(B)>超声温度(C)>料水比(A)>提取次数(D)。其最佳提取工
艺为料水比(1∶30),超声时间 20 min, 提取温度 40 ℃,提取 1次。
　　关键词:　地锦草;多糖提取;超声波
　　中图分类号:S853.74　　　　 　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2009)03-0015-03
　　地锦草为常用中药材。 《中国药典》 2000年版收载的地
锦草为大戟科植物地锦草 EuphorbiahumifusaWild.和斑地
锦 E.maculataRaf.的干燥全草 [ 1] , 具有清热解毒 、凉血止
血之功能 , 目前临床上多用于菌痢 、肠炎 、各种出血症 、病毒
性肝炎 、痈肿疔疮等 [ 2] 。有研究报道地锦草化学成分主要是
多糖 、生物碱 、黄酮 、甾体苷 、卵磷脂 、氨基酸和维生素等 [ 3] 。
为进一步对地锦草多糖进行化学和药理研究 , 笔者等采用超
声提取工艺 ,从地锦草提取分离出多糖 , 探讨多糖提取过程
中的显著影响因素 ,并通过正交试验确定其最适提取工艺参
数 ,以期获得得率高 、稳定性强的地锦草多糖 , 为其开发利用
提供理论基础。
1　材料与方法
1.1　试验材料
1.1.1　地锦草及其处理　新鲜地锦草 , 采自湖南农业大学 ,
收稿日期:2008-12-09
基金项目:湖南农业大学动物医学院科研基金(SR0345)
作者简介:黄　浩(1981-),男 , 在读硕士研究生 ,研究方向:中草药
开发应用。通讯作者:刘湘新 , E-mail:liuyiangsin2005@
126.com
除去泥沙和须根 , 洗净 , 置通风处 , 晒干至重量不再变化 , 粉
碎 ,过 100目筛 ,贮藏备用。
1.1.2　主要试剂　石油醚(60-90 ℃)、95%乙醇 、乙醚 、丙
酮 、苯酚 、硫酸 、葡萄糖等 , 均为 AR级。
1.1.3　主要仪器　DWF-100电动植物粉碎机(湖北黄骅
市科研器械厂), RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器
厂), DGF-4电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公
司), UV2000紫外 -可见分光光度计(上海精密科学仪器有
限公司分析仪器总厂), SK8210LH型超声波清洗仪(上海科
导超声仪器有限公司)。
1.2　方法
1.2.1　提取工艺流程　(1)称取地锦草 10 g, 用滤纸包裹
装入索氏蒸馏器中 , 加入地锦草体积 2倍的石油醚 , 在水浴
锅中 75 ℃加热水浴 16 h, 以脱去地锦草中的脂质。 (2)将
烧瓶中的石油醚倾出 ,加入相同量甲醇 , 75 ℃水浴 6 h,以脱
去其中的色素。 (3)将地锦草取出晾干 , 直至无试剂气味。
称取适量上述地锦草干粉 , 把样品置于圆底烧瓶中 , 按一定
料水比 、一定温度 、超声一定时间内提取数次 , 分离出提取
液 ,合并上清液。 (4)将滤液装入离心管中 3 000 r/min离心
DOI :10.13823/j.cnki.j tcvm.2009.03.005
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调查研究
20min,收集上清液,倾入圆底烧瓶中冷凝回流浓缩至 100mL,于
大烧杯中冷却。 (5)于浓缩液中加 95%乙醇使乙醇浓度达到
80%, 4℃静置 12h,醇沉 ,后 3 000 r/min离心 20min, 弃去上
清液, 将沉淀重复醇沉 3次。 (6)于沉淀中加 95%乙醇混合均
匀后 3 000r/min离心 10min, 弃去上清液 ,在沉淀中加入无水
乙醇 ,同样处理 ,后依次加入丙酮和乙醚进行脱水、晾干 、称重。
1.2.2　多糖含量测定
1.2.2.1　测定波长的选择　精密称取一定量多糖样品置
小烧杯中 , 加水溶解 , 定量转移至 100 mL容量瓶中 , 加水
至刻度 , 混匀。 吸取该样品 1.0 mL至试管 , 加 6%苯酚水
溶液 1.0mL混匀 ,迅速加入 5.0 mL浓硫酸 , 振摇 5 min, 在
热水浴中加热 15 min, 取出冷却 , 以苯酚 -硫酸溶液为空
白 , 于 UV2100上 400-800 nm扫描 , 结果选择测定波长
490.0 nm。
1.2.2.2　总糖含量的标准曲线　精密称取 105 ℃干燥至恒重
的标准葡萄糖 0.010 0g,加水溶解至 100 mL,配成 0.01mg/mL
的标准储备液。取 10 mL具塞试管 , 分别加入上述标准液
0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0 mL加水稀释至 1.0mL, 摇匀。每
个试管中各加 6%苯酚水溶液 1.0 mL, 混匀 , 再迅速加入浓
硫酸 5.0mL,振摇 5 min,在沸水浴中加热 15 min, 然后置冷
水浴中冷却 30 min。随行空白 , 在 490.0 nm处测定各标准
液吸收度 ,得回归方程 A=11.15C+0.015, r=0.999 2(A为
吸光度 , C为浓度)。
1.2.2.3　换算因素测定　精密称取干燥的多糖 22.5 mg, 用
蒸馏水溶解后定容到 100 mL容量瓶中 , 混匀 ,作为多糖供试
液。 精确量取多糖供试液 0.2 mL, 加水至 1.0 mL, 按测
定标准曲线同样的方法测其吸光度值 。按下式计算换算
因素:F=W÷(C×D), 其中 W为供试品多糖质量(μg),
C为多糖液中葡萄糖的浓度(μg/mL), D为多糖的稀释因
素 ,测得 F值。
1.2.2.4　地锦草多糖含量的测定　精密量取供试液 1.0 mL,
按总糖含量标准曲线项下操作 , 代入回归方程计算。
多糖含量计算公式:多糖含量(%)=C×D×F÷W×
100,其中 C为供试液葡萄糖浓度 , D为供试液的稀释因素 , F
为换算因素 , W为供试品的重量。
1.2.3　提取工艺优化　根据预实验结果及相关报道 , 选定
以提取时间 、料液比 、提取温度 、提取次数因素设计为 4因
素 、3水平的正交试验 L9(34),对地锦草多糖提取工艺进行
优选 ,以确定地锦草多糖超声提取的最适工艺。因素水平见
表 1。
2　结果
表 1　地锦草多糖超声波提取正交试验
水平 因素A料水比 B时间 /min C提取温度 /℃ D提取次数
1 1∶10 20 40 1
2 1∶20 40 60 2
3 1∶30 60 80 3
　　地锦草多糖超声提取工艺结果见表 2。由表 2可知 , 在地
锦草 /水各水平中 ,以水平 3(1∶30)多糖提取率最高。时间各
水平中 ,以 20 min提取率较高。温度各水平中 ,以 40 ℃提取
率较高。在提取次数各水平中 ,以 1次提取率较高。由正交
试验结果和极差分析可知 , 影响地锦草多糖提取率的诸因素
主次关系依次是超声时间(B)、超声温度(C)、料水比(A)、提
取次数(D)。最佳组合为 A3B1C1D1,即在料水比(1∶3), 超
声时间 20 min,超声温度 40℃,提取 1次即可得到较多地锦
草多糖。
表 2　地锦草多糖超声波提取工艺正交试验结果
试验 因素A料水比 B时间 /minC温度 /℃ D次数
多糖提
取率 /%
1 1∶10 20 40 1 3.07
2 1∶0 60 40 2 1.72
3 1∶30 40 40 3 2.82
4 1∶10 40 60 2 1.65
5 1∶20 20 60 3 2.00
6 1∶30 60 60 1 2.14
7 1∶10 60 80 3 1.56
8 1∶20 40 80 1 1.65
9 1∶30 20 80 2 2.61
K1 6.28 7.68 7.61 6.86
K2 5.37 6.12 5.79 5.98K3 7.57 5.41 5.82 6.38
优水平 A3 B1 C1 D1
Rj 1.19 2.27 1.82 0.88
主次顺序 B C A D
3　讨论
3.1　笔者等采用苯酚 -硫酸比色法测定地锦草多糖含量 ,
多糖在浓硫酸作用下先水解成单糖 , 并迅速脱水生成糖醛衍
生物 ,与苯酚反应生成橙黄色溶液 , 此溶液经 400-800 nm
扫描表明在 490 nm处有最大吸收 , 因此选定为测定波长。
此法具有简单 、快速 、灵敏 、重复性好等优点 , 可作为地锦草
多糖含量的测定方法。
3.2　该实验利用多糖易溶于水 、难溶于有机溶剂的性质 ,
用石油醚和甲醇除去脂质及色素等成分;用水提取其中所含
的多糖成分。超声波法提取主要是利用超声波空化产生的
极大压力造成细胞壁及整个生物体瞬间破裂 , 同时超声波产
生振动作用加强了细胞内物质的释放 、扩散及溶解 , 加速植
物中的有效成分进入溶剂 ,使其进一步增大了有效成分进入
溶剂。提取全过程无需高温 ,避免了因高温对地锦草多糖分
子结构的分解 ,而常规提取会破坏多糖分子结构降低多糖的
活性;所用仪器简单 , 操作方便 , 超声波仪自动化程度极高 ,
具有可行性和实用性。
3.3　采用超声波法提取地锦草多糖时 , 通过对料水比
(A)、超声温度(C)、提取次数(D)、超声时间(B)各个因素
的考察 , 得到最佳提取工艺 , 即在料水比(1∶30), 超声时间
20 min, 超声温度 40℃,提取 1次既可得到较多的地锦草多糖。
参考文献:
[ 1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典· 一部
(1995)[ S] .广州:广东科技出版社 , 1995:103.
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调查研究
[ 2] 江苏新医学院.中药大辞典 [ M] .上海:海科技出版社 ,
1977:827.
[ 3] 刘湘新 ,孙志良 , 冯琦华 , 等.地锦草有效成分鉴定及其
抑菌试验 [ J] .中国兽医科技 , 1996, 26(7):30-31.
OptimizationonultrasonicwaveextractionprocessforHerbaEuphorbiaehumifusaeWild.polysaccharides
HUANGHao, LIUXiang-xin
(ColegeofVeterinaryMedicine, HunanAgricultruralUniversity, ChangshaHunan410128, China)
Abstract:Bymeansofultrasonicassistantextractionandorthogonallydesign, theefectsofultrasoniconextractingofEuphor-
biaehumifusaWilld.polysaccharideswerestudied.TheresultsshowedthattheextractionrateofEuphorbiaehumifusaWilld.poly-
saccharideswasobviouslyafectedbyextractingtime, thenwastemperature, theratioofsolidtoliquidandextractivetimesinex-
perimentrange.Theoptimalprogramwasasfolows:theratioofsolidtoliquidwas1∶30, extractedforonceat40 ℃, timeofex-
tractionwas20 min.
Keywords:EuphorbiaehumifusaWild.;polysaccharides;ultrasonic;extraction;process
盐穗木抗菌活性成分理化性质研究及药敏试验
周莉娟 ,贾琦珍 ,陶大勇 ,陈　瑛
(塔里木大学动物科技学院 ,新疆阿拉尔　843300)
　　摘　要:　为进一步研究生长于塔里木盆地及其周边荒漠地区盐穗木中有效化学成分 , 对盐穗木全草粉用乙
醇提取 , 乙酸乙酯萃取 ,所得萃取物进行柱层析 , 用不同的洗脱剂分离各组分 ,对各组分进行理化性质研究 、药敏
试验并通过质谱法分析研究其化学结构。结果显示 , 盐穗木乙酸乙酯萃取物及柱层析石油醚 -乙酸乙酯(30∶1)
洗脱物 、石油醚 -三氯甲烷(1∶1)洗脱物对大肠杆菌均有抑制作用 , 其主要化学成分(即盐穗木抗菌活性成份)是
二苯胺 , 其化学结构式和分子式分别为 ○ 　N　　H　 ○ 和 C12H11N。
　　关键词:　盐穗木;抗菌活性成分;药敏试验;理化性质;质谱法
　　中图分类号:S859.7　　　　 　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2009)03-0017-05
　　盐穗木(HalostachysCaspica)属藜科(Clmopodiaceae)盐
穗木属(HalostachysC.A.Mey)盐生植物 ,对盐分适应性极强 ,
是盐土荒漠主要植物之一。含有类似假木贼碱的物质 , 可
作杀虫剂 [ 1] 。在饲料贫乏的新疆南疆荒漠草场是良好的饲
用牧草 , 适口性好 , 山羊 、驴和绵羊皆喜食 , 冬季骆驼喜食。
早春 、秋季和冬季适宜利用 , 但在夏季由于植株含盐度较
高 , 家畜一般不生食。通过初步研究 , 发现盐穗木水提物对
金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌具有较强的抗菌作用 [ 2-5] 。本试
验以乙酸乙酯萃取物 、柱层析石油醚 -乙酸乙酯(30∶1)洗脱
物 、石油醚 -三氯甲烷(1∶1)洗脱物 、甲苯 -甲醇 -乙酸乙酯
(1∶1∶3)洗脱物 [ 5]为基础 , 对盐穗木化学成分进行理化性质
分析及药敏实验 ,为进一步研究其药用价值及化学成分(即
抗菌活性成分)进行探索。
1　材料与方法
1.1　材料
盐穗木乙酸乙酯萃取物及柱层析石油醚 -乙酸乙酯
(30∶1)洗脱物 、石油醚 -三氯甲烷(1∶1)洗脱物 、甲苯 -甲
收稿日期:2008-11-10
基金项目:新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实
验室课题(编号:DR0807)
作者简介:周丽娟(1985-),女 , 在读本科。通讯作者:陶大勇 , E-
mail:tdydky@ 126.com
醇 -乙酸乙酯(1∶1∶3)洗脱物 , 由塔里木大学动物科技学院
课题组提供。大肠杆菌 ,由塔里木大学动物科技学院病理学
学科组提供。
1.2　试剂
0.1 mol/L氢氧化钠 、氯化钠 、磷酸氢二钾 、牛肉膏 、蛋白
胨 、琼脂粉。
1.3　仪器
气相色谱 -质谱联用仪(型号 TRACEGCULTRADSQ,
菲尼根), 洁净工作台(型号 SW-CJ-2F, 上海博讯实业有
限公司医疗设备厂), 立式电热压力蒸汽灭菌器(型号 LDZX
-50KB,上海申安医疗器械厂),数显不锈钢电热培养箱(型
号 HPX-9272MBE, 上海博讯实业有限公司医疗设备厂), 电
热恒温鼓风干燥箱(型号 GZX-9240MBE, 上海博讯实业有
限公司医疗设备厂),电子天平(型号 BS223S), 调温电热套
(型号 PTHW规格 500 mL), 培养皿 、试管 、接种环 、酒精灯。
1.4　方法
1.4.1　药敏试验 [ 2 , 3 , 6]　盐穗木乙酸乙酯萃取物(即为 1号
样品)及柱层析石油醚 -乙酸乙酯(30∶1)洗脱物(为 2-5
号样品)、石油醚 -三氯甲烷(1∶1)洗脱物(为 6-9号样
品)、甲苯 -甲醇 -乙酸乙酯(1∶1∶3)洗脱物(为 10、 11号样
品)用生理盐水以 0.1 mg/mL浓度溶解 , 将直径为 6 mm已