全 文 ：现代医药卫生 2013年3月15日 第29卷第5期 J Mod Med Health，March 15，2013，Vol.29，No.5
丹黄丸源于湖南中医药大学附属医院经验方，由丹参、苘麻
子、黄芪和当归四味中药组成，具有活血化瘀、益气、清热解毒之
功效，临床用于治疗非酒精性脂肪肝及脂肪性肝炎，疗效确切。研
究表明，处方中丹参和苘麻子主要为脂溶性有效成分 [1-2]，而黄芪
与当归主要为水溶性有效成分。因此，本研究对丹黄丸中丹参配
伍苘麻子醇提工艺进行了系统研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器 高速中药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、水
浴锅、药典筛、LC-2010A 液相色谱仪和 SPD-10A 紫外检测器（日
本岛津公司）、ME215P 型分析天平（Sartorius）。
1.2 材料 经中南大学药学院李劲平副教授鉴定，丹参为唇形科
植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，苘麻子为锦葵
科植物苘麻 Abutilon theophrasti Medic.的干燥成熟种子（二药均
购于湖南九芝堂医药有限公司）。丹参酮ⅡA对照品（110766-200417，
中国药品生物制品检定所），药用乙醇、甲醇（色谱纯，Tedia），其
他试剂均为分析纯，重蒸水（自制）。
1.3 方法
1.3.1 丹参酮ⅡA 含量测定方法
1.3.1.1 色谱条件 色谱柱 ：Elite C18 色谱柱 （4.6 mm×250 mm，
5 μm）；流动相：甲醇 ∶ 水=80 ∶ 20；检测波长：270 nm；柱温：25 ℃；
流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。
1.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥
至恒重的丹参酮ⅡA 对照品适量，置 50 mL 棕色容量瓶中，加甲
醇至刻度，制成浓度为 182.2 μg/mL 的对照品储备液。
1.3.1.3 供试品溶液的制备 称取处方量丹参、苘麻子粉末适量，
置 250 mL 圆底烧瓶中，加热回流提取一定时间，滤过，放至室温，
定容。精密量取 1 mL置 5 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，备用。
1.3.1.4 阴性供试品溶液的制备 精密称取处方量苘麻子粉末
适量，按照“供试品溶液制备”方法制备缺丹参的阴性供试品溶液。
1.3.1.5 标准曲线的制备 精密吸取对照品储备液适量，加甲醇
稀释，分别制成浓度为 1.46、2.92、7.29、14.58、36.44、91.10 μg/mL
的丹参酮ⅡA 标准溶液，以测得的峰面积作为纵坐标 Y 轴，对照
品进样量作为横坐标 X 轴，绘制标准曲线。
1.4 浸膏得率的测定 精密量取各提取液 25 mL，置已干燥至恒
重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，于 105 ℃ 干燥 3 h，移至干燥器中
冷却 30 min，精密称定质量，计算浸膏得率。
1.5 单因素试验考察
1.5.1 吸醇率测定 按处方比例称取丹参、苘麻子粉末 3 份，分别
加入 5 倍量 90%乙醇，浸泡 15、30、45、60、75 min 后，测定吸醇率。
1.5.2 提取温度考察 按处方比例称取丹参、苘麻子粉末适量，以
90%乙醇，分别于 60、65、70、75、80、85、90 ℃ 提取 2 次，每次提取
1 h，料液比 1︰18，第 1 次用 10 倍溶剂，第 2、3、4 次用 8 倍溶剂
（10；8）。
丹黄丸中丹参和苘麻子醇提工艺研究
潘 娟 1，2，张 杰 1，2，王 慧 1，2，李劲平 1，潘 阳 1，王小静 1，余承群 1（1. 中南大学药学院，湖南 长沙
410013；2.中南大学湘雅三医院， 湖南 长沙 410013）
【摘 要】 目的 优选丹黄丸中丹参和苘麻子的醇提工艺。 方法 以丹参酮ⅡA 转移率及浸膏得率为考察指标，首
先采用单因素试验分别对提取温度、药材粒径、乙醇浓度、料液比、提取次数、提取时间等进行考察；再采用 L9（34）正交试
验设计优选丹黄丸中丹参和苘麻子的醇提最佳工艺。 结果 最佳提取工艺为药材粉碎成 85 目粉末，以 90%乙醇为提取溶
媒，浸泡 1 h，于 85 ℃回流提取 2 次，第 1 次加 12 倍量溶媒，提取 1 h，第 2 次加 10 倍量溶媒，提取 0.5 h。 结论 该提取工
艺合理，稳定，提取效率高。
【关键词】 丹参/分析； 苘麻子/分析； 醇类/分离和提纯； 单因素实验； 正交实验； 丹参酮ⅡA
doi：10.3969/j.issn.1009-5519.2013.05.003 文献标识码： A 文章编号： 1009-5519（2013）05-0647-03
Study on ethanol extract technology of Salvia miltiorrhiza and Abutilon theophrasti in Danhuang Pill Pan Juan1，2，Zhang
Jie1，2，Wang Hui1，2，Li Jinping1，Pan Yang1，Wang Xiaojing1，Yu Chengqun1（1. School of Pharmaceutical Science，Central South U-
niversity，Changsha，Hunan 410013，China；2. Third Xiangya Hospital，Central South University，Changsha，Hunan 410013，China）
【Abstract】 Objective To optimize the extract technology of salvia miltiorrhiza and Abutilon theophrasti in Danhuang
Pill. Methods With the transfer rate of tanshinone ⅡA and the extract rate as indexes，the extraction temperature，partical size，
alcohol concentration，volume of ethanol，extraction times and time were optimized by single-factor test. Finally optimum alcohol
extraction conditions were optimized by L9（34） orthogonal design. Results The optimum extraction process was as follows：smash-
ing the medicinal materials to 85 mesh powder，with 90% ethanol as the extraction solvant，immersing for 1 h，then conducting the
reflux extraction at 85 ℃ for 2 times，adding 12 times amount of 90% ethanol at the first time，extracting for 1 h and at the second
time adding 10 times amount of 90% ethanol for extracting 0.5 h. Conclusion The optimized extraction technology is reasonable
and stable with a high yield.
【Key words】 Salvia miltiorrhiza/analysis； Semen abutili/analysis； Alcohols/isolation & purification； Single factor
experiment； Orthogonal experiment； TanshinoneⅡA
·论 著·
基金项目：湖南省科技支撑计划资助项目（2011RS4076）。
通讯作者：张杰（E-mail：zhangjie68@126.com）。
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现代医药卫生 2013年3月15日 第29卷第5期 J Mod Med Health，March 15，2013，Vol.29，No.5
1.5.3 粒径考察 按处方比例分别称取 10、50、85 目丹参、苘麻
子粉末适量，以 90%乙醇于 85℃提取 2 次，每次提取 1 h，料液比
1︰18（10；8）。
1.5.4 乙醇浓度考察 按处方比例称取 85 目丹参、苘麻子粉末适
量，分别加入 60%、70%、80%、90%乙醇于 85℃提取 2 次，每次 1 h，
料液比 1︰18（10；8）。
1.5.5 乙醇倍数考察 按处方比例称取 85 目丹参、苘麻子粉末适
量，分别加入 10（6；4）、14（8；6）、18（10；8）、22（12；10） 倍 90%乙
醇于 85℃提取 2 次，每次 1 h。
1.5.6 提取次数考察 按处方比例称取 85 目丹参、苘麻子粉末适
量，用 90%乙醇于 85 ℃提取，每次 1 h，第 1 次用 10 倍溶剂，第
2、3、4 次均用 8 倍溶剂。
1.5.7 提取时间考察 按处方比例称取 85 目丹参、苘麻子粉末
适量，以 90 %乙醇于 85℃提取 2 次，提取时间分别为 1 （0.5；0.5）、
2 （1；1）、3 （1.5；1.5）、4 （2；2） h，料液比 1︰18（10；8）。
1.6 正交试验 根据单因素试验考察结果，选择提取时间、乙醇
浓度、提取温度、料液比 4 个因素进行正交试验设计，采用 L9（34）
正交试验表安排试验，因素水平见表 1。精密称取处方量丹参及
苘麻子，按正交试验表（表 2）进行正交试验（n=3）。
1.7 验证试验 精密称取处方量 85 目丹参、苘麻子药材粉末，按
优选的工艺制备 3 批样品进行试验，按正交试验优选工艺进行
验证。
1.8 数据处理 以丹参酮ⅡA 转移率和浸膏得率为考察指标，
分别以 0.6 和 0.4为权重系数进行综合评分，并对综合评分进行
统计分析。统计分析软件为 SPSS16.0。
丹参酮ⅡA 转移率（%）=提取所得丹参酮ⅡA 含量/投料丹参
药材中所含丹参酮ⅡA 含量×100%；浸膏得率（%）=干膏质量/投
料药材质量×100%；综合评分=丹参酮ⅡA 转移率×0.6 +浸膏得
率×0.4。
2 结 果
2.1 丹参酮ⅡA 含量测定结果 丹参酮ⅡA 线性回归方程为 Y=
41 469X+8 069.3，R2=0.999 9。结果表明 ，丹参酮ⅡA 在 1.46～
91.10 μg/mL 内线性关系良好。且阴性样品在丹参酮ⅡA 保留时
间处无干扰，方法专属性良好，结果见图 1。
2.2 单因素试验考察结果
2.2.1 吸醇率测定 当浸泡 60 min 时，药材粉末吸醇较为完全。
2.2.2 提取温度 提取温度在 85 ℃后，综合评分无显著改变，故
选择 65～85℃进一步进行正交试验。
2.2.3 粒径考察 综合评分随着药材粉碎粒径的减小而增大，故
确定药材粒径为 85 目。
2.2.4 乙醇浓度考察 综合评分随着乙醇浓度的增大而增加，因
此选择 70%～90%的乙醇进一步进行正交试验。
2.2.5 乙醇倍数考察 随着乙醇倍数的增加，综合评分呈增长趋
势，因此，选择 14～22 倍量乙醇进一步进行正交试验。
2.2.6 提取次数考察 提取次数在 2 次以上时，对综合指标的影
响不大，结合实际生产和节约成本，确定提取次数为 2 次。
2.2.7 提取时间考察 综合评分在 2.0 h 内随着提取时间的延
长而增大，而后随着提取时间的延长而减小，故选择 1.0～2.0 h 进
一步进行正交试验。
2.3 正交试验考察结果 试验结果见表 2，方差分析见表 3。由直
观分析结合方差分析可知，影响工艺因素大小的次序依次是提取
温度（C）＞料液比（D）＞乙醇浓度（B）＞提取时间（A）。表 3 的方差
分析表明，C、B 和 D 均对综合评分具有显著性影响；而提取时间
对综合评分的影响则差异无统计学意义（P＞0.05）。由各因素的 K
值可以看出 ，丹参 、苘麻子乙醇回流提取的最佳提取工艺为
A2B3C3D3，即药材粉碎成 85 目粉末，以 90%乙醇为提取溶媒，浸
泡 1 h，于 85 ℃回流提取 2 次，第 1 次加 12 倍量溶媒，提取 1 h，
第 2 次加 10 倍量溶媒，提取 0.5 h。
HPLC：高效液相色谱；A：丹参酮ⅡA 对照品；B：丹参、苘麻子醇提供
试品；C：丹参阴性对照品；1：丹参酮ⅡA。
图 1 丹参酮ⅡA HPLC 测定色谱图
表 1 正交试验因素水平表
因素
水平
1
2
3
提取时间（h）
0.5；0.5
1.0；0.5
1.0；1.0
乙醇浓度（%）
70
80
90
提取温度（℃）
65
75
85
料液比（倍）
1 ∶ 14（8；6）
1 ∶ 18（10；8）
1 ∶ 22（12；10） 表 2 正交试验设计表及结果（n=3）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
1
1
1
2
2
2
3
3
3
62.183
62.410
61.860
0.550
因素
A B C D
实验
编号
1
2
3
1
2
3
1
2
3
60.190
62.773
63.490
3.300
1
2
3
2
3
1
3
1
2
58.483
63.057
64.913
6.430
1
2
3
3
1
2
2
3
1
59.677
62.520
64.257
4.580
丹参酮ⅡA
转移率（%）
实验结果
浸膏得率
（%）
综合评分
（分）
67.05
85.14
91.43
82.16
84.05
80.06
81.51
79.48
81.56
-
-
-
-
34.62
32.49
33.82
35.42
32.22
31.04
35.32
33.09
31.73
-
-
-
-
54.08
64.08
68.39
63.46
63.32
60.45
63.03
60.92
61.63
-
-
-
-
注：-表示无此项。
表 3 方差分析表
因素
A
B
C
D
误差
0.458
18.077
65.707
32.077
0.460
2
2
2
2
2
SS f MS P
＞0.05
＜0.05
＜0.05
＜0.05
-
注：-表示无此项；F0. 05（2，2）=19.00。
1.000
39.469
143.465
70.037
-
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现代医药卫生 2013年3月15日 第29卷第5期 J Mod Med Health，March 15，2013，Vol.29，No.5
排列整齐、规律，而位于两边纤维间区的 PMF 分布量多且分布均
匀，说明内有大量成骨细胞聚集。用 ELISA 法测定对照组骨痂内
OPG 阳性细胞数量多，OPGL 阳性细胞数量少。而与对照组比较，
实验组胫骨骨折间隙内新生骨痂明显减少，实验组内原始骨痂中
的 PMF 浅染质前且聚集成团，仅少量分布在骨折断端边缘；而
MCF 与对照组原始骨痂相比明显缩短，分布不均且不齐。
综上所述，T2DM 大鼠骨折牵引骨痂生成障碍，骨痂的生成与
OPGL 的表达呈负相关，与 OPG 的表达呈正相关。高糖环境下骨
组织中 OPGL 的表达增高，OPG 的表达降低，可能是 T2DM 状态
下骨折愈合障碍的原因之一。
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（收稿日期：2012-11-17）
2.4 验证试验结果 见表 4。
3 讨 论
3.1 丹黄丸处方中丹参有效成分为丹参酮类及丹酚酸类成分 [3]，
苘麻子有效成分为脂溶性成分 [1-2，4]，黄芪有效成分为皂苷、黄酮及
多糖类，当归含阿魏酸及多糖类有效成分。故将丹参、苘麻子先行
醇提，再将醇提药渣与黄芪、当归合并进行水提取。
3.2 研究表明，丹参与苘麻子配伍对非酒精性脂肪肝疗效确切，
苘麻子主要活性成分为脂肪酸类，而丹参是处方中的君药，且其
抗非酒精性脂肪肝的活性成分主要为二萜醌类成分，因此，选用
丹参中的丹参酮ⅡA 的转移率作为提取工艺的评价指标。
3.3 丹参酮ⅡA 具有菲醌结构，对光、湿和热均不稳定，对热尤
为敏感，在高温下易降解[5-6]，故一般采用超声或低温回流提取。本
研究表明，以 90%乙醇为提取溶媒，控制提取时间，增加提取溶媒
体积，加热回流提取，可显著提高丹参酮ⅡA 提取效率。
3.4 验证试验结果表明，最佳提取工艺丹参酮ⅡA 转移率达 99%
以上，显著高于文献报道相关工艺 [7-8]。本研究首次将丹参与苘麻
子进行配伍提取，在丹参、苘麻子合提过程中，苘麻子的脂溶性成
分，如亚油酸、棕榈酸等，是否对丹参酮ⅡA 等菲醌类成分具有保
护作用有待进一步研究。
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（收稿日期：2012-12-21）
表 4 验证试验结果
编号
1
2
3
平均值
RSD
丹参酮ⅡA 转移率（%）
99.83
99.52
99.26
99.54
0.29
浸膏得率（%） 综合评分（分）
32.99
33.68
33.48
33.38
1.07
73.09
73.18
72.94
73.07
0.16
注：RSD 为相对标准偏差。
（上接第 646 页）
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