全 文 ：白蔹、乌头单用及合用对人胃腺癌细胞 SGC － 7901
增殖、凋亡的影响
贾 敏1，张 寒2
(1． 西安医学院科研中心，陕西 西安 710021;2． 西安医学院药学院，陕西 西安 710021)
［摘要］ 目的 研究白蔹、乌头单用及合用时对 SGC － 7901 人胃腺癌细胞增殖、凋亡的
影响。方法 体外培养 SGC － 7901 细胞，MTT法测定白蔹、乌头单用及合用时 SCG － 7901 细
胞增殖情况;Hoechst33258 荧光活染法观察凋亡细胞核形态学改变。结果 白蔹、乌头合用
对胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用;作用后胃腺癌细胞表现为凋亡特征性的形态改变;
还可将细胞阻滞于 G1 和 G2 期并浓度依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡。结论 白蔹、乌头合用对
体外培养的 SGC － 7901 人胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用，可促进其凋亡。
［关键词］ 白蔹;乌头;胃腺癌;凋亡
［中图分类号］ R735． 24 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1008 － 8849
(2011)27 － 3388 － 03
Effect of Ampelopsis japonica and aconite alone and their combination on proliferation and apoptosis of
human gastric cancer cell SGC －7901
Jia Min1，Zhang Han2
(1． Research Center of Xi’an Medical University，Xi’an 710021，Shaanxi，China;2． Medicine School of Xi’an Medical U-
niversity，Xi’an 710021，Shaanxi，China)
Abstract:Objective It is to observe the influence of Ampelopsis japonica and aconite alone and their combination on
proliferation and apoptosis of human gastric cancer cell SGC － 7901． Methods SGC － 7901 cells were cultured in vitro． The
proliferation of SCG － 7901 cell for the ation of Ampelopsis japonica and aconite single or combined was detected by MTT
method;the morphological changes of apoptotic cell nucleus of Hoechst33258 were observed by fluorescent staining． Results
Ampelopsis japonica and aconite combination on gastric adenocarcinoma cell growth was inhibited;after the action，gastric ad-
enocarcinoma cells showed apoptosis characteristic morphological changes;and blocked the cells in G1 and G2 phase;and the
concentration dependence of the induction of apoptosis in tumor cells． Conclusion Coadministration of ampelopsis japonica and
aconite can inhibite the growth of cultured SGC － 7901 of human gastric cancer，and promote their apoptosis．
Key words:ampelopsis japonica;aconite;gastric carcinoma;apoptosis
［作者简介］ 贾敏(1980—) ，女，助教，主要从事心血管药理和
免疫药理学研究。
中药十八反、十九畏配伍禁忌使中药在中医临床的应用
受到限制，但近年有研究者提出配伍禁忌药可能用于难治性
疾病［1 － 2］，譬如肿瘤，但尚缺乏足够理论依据，因此笔者研究
了白蔹、乌头伍用对 SGC － 7901 人胃腺癌细胞增殖和凋亡形
态的影响，现报道如下。
1 实验资料
1. 1 材料 人胃腺癌细胞株(SGC － 7901)由西安医学院细
胞生物教研室苟兴春老师惠赠。37 ℃恒温，5% CO2 密闭传
代培养。SD大鼠由第四军医大学动物中心提供，合格证号:
SCXK(陕)2008 － 002。白蔹、乌头、白蔹 －乌头水煎液，由西
安医学院药学院天然药物研究室提供，批号:20100517。临用
前用蒸馏水配成所需浓度，含 1 g /mL。5 －氟尿嘧啶购自上
海瀚鸿化工科技有限公司，4 ℃冷藏备用;RPMI － 1640 培养
粉购自 GIBCO 公司，临用配以 2 g NaHCO3，10 万 IU /L 青霉
素，10 万 IU /L 链霉素，加三蒸水配成 1 L，调 pH = 7． 4，用
0. 22 μm微孔滤器过滤除菌，临用前加入 5%小牛血清;小牛
血清为杭州四季青生物材料研究所产品，56 ℃水浴 30 min灭
活后使用，于 － 20 ℃保存备用。胰酶购自 Sigma公司，临用前
用 PBS平衡盐溶液配成 0． 25%胰酶消化液，用 0． 22 μm微孔
滤器过滤除菌，于 4 ℃保存备用。MTT购自 Sigma公司，临用
前用 PBS平衡盐溶液配成 5 g /L，用 0． 22 μm微孔滤器过滤除
菌，于 4 ℃避光保存。
1. 2 主要仪器 应用 Thermo electron Corporation 公司生产
301 型 CO2 培养箱;IX71 倒置荧光显微镜为 Olympus 公司产
品。DG3022A型酶联免疫检测仪购自国营华东电子管厂。
TGL － 16GA型台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂产品。
1. 3 方法
1. 3. 1 含药血清的制备 SD 雄性大鼠 20 只，随机分 4 组，
每组 5 只。白蔹组予白蔹水煎剂 10 g生药 /kg;乌头组予乌头
水煎剂 10 g生药 /kg;白蔹 －乌头组予白蔹 －乌头水煎液 10 g
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生药 /kg;对照组予等体积生理盐水。各组按 10 mL /kg 连续
灌胃给药 7 d。末次给药后 1 h，各组大鼠颈总动脉放血，离心
取血清，56 ℃ 30 min灭活，0． 22 μm微孔滤器过滤除菌，－ 20
℃保存备用。
1. 3. 2 SGC － 7901 细胞增殖的试验方法 将 SGC － 7901 细
胞用胰蛋白酶消化后，收集传代的细胞悬液，离心(1 000 g，10
min) ，弃上清，D － Hank’s平衡盐溶液洗 2 遍，细胞计数后用
含 5%NBS的 1640 培养液调细胞浓度至 1 × 108 L －1，加入 96
孔板，每孔 0． 1 mL，将各组含药血清用 1640 培养液以 1∶ 500
(终浓度为 1∶ 1 000)稀释，分别加入各孔。同时设立阳性对照
组 5 － Fu 250 mg /L，每孔 0． 1 mL，每组设 8 个复孔，37 ℃ 5%
CO2 细胞培养箱中分别培养 24，48，72 h，用 PBS配 MTT药液
5 g /L，于培养结束前 4 h，每孔加 MTT 20 μL，4 h后吸弃上清，
加入 100 μL DMSO。测 490 nm波长处各孔的吸光度 OD值。
1. 3. 3 白蔹 －乌头血清对 SGC － 7901 细胞增殖的影响 将
SGC － 7901 细胞用胰蛋白酶消化后，收集传代的细胞悬液，离
心(1 000 g，10 min) ，弃上清，D － Hank’s平衡盐溶液洗 2 遍，
细胞计数后用含 5% NBS 的 1640 培养液调细胞浓度至 1 ×
108 L －1，加入 96 孔板，每孔 0． 1 mL，将白蔹 －乌头含药血清
用 1640 培养液以 1∶ 250(终浓度为 1∶ 500)、1∶ 500(终浓度为
1 ∶ 1 000、1∶ 1 000(终浓度为1∶ 2000)稀释，正常对照血清以
1∶ 500(终浓度为 1∶ 1 000)稀释，分别加入各孔。同时设立阳
性对照组 5 － Fu 250 μg /L，每孔 0． 1 mL，每组设 8 个复孔，37
℃ 5% CO2 细胞培养箱中分别培养 72 h。用 PBS 配 MTT 药
液 5 g /mL，于培养结束前 4 h，每孔加MTT 20 μL，4 h后，吸弃
上清，加入 100 μL DMSO。测 490 nm 波长处各孔的吸光度
OD值。
1. 3. 4 白蔹 －乌头血清对 SGC － 7901 细胞凋亡的影响 将
SGC － 7901 细胞用胰蛋白酶消化后，收集传代的细胞悬液，离
心(1 000 g，10 min) ，弃上清，D － Hank’s平衡盐溶液洗两遍，
细胞计数后用含 5% NBS 的 1640 培养液调细胞浓度至 1 ×
108 L －1，接种在放置有盖玻片的 24 孔板内，每孔 1． 9 mL，将白
蔹 －乌头含药血清用1640培养液以 1∶ 250(终浓度为 1∶ 500)、1∶ 50
(终浓度为 1∶ 1 000)、1∶ 100(终浓度为 1∶ 2 000)稀释，正常对
照血清以 1∶ 50(终浓度为 1∶ 1 000)稀释，分别加入各孔，同时
设立阳性对照组 5 － Fu 250 mg /L，每孔 0． 1 mL，每组设 4 个
复孔，37 ℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养 72 h。每孔先吸弃 1
mL培养液，加入终浓度为 10 μg /L Hoechst 33258 染色剂作用
7 min，PBS冲洗，取出玻片在荧光倒置显微镜下观察并摄影。
1. 4 统计学处理 实验结果以 珋x ± s 表示，采用单因素方差
分析法。所有实验数据采用 SPSS 11． 5 软件进行统计学处
理。流式细胞术所测得的细胞周期构成以中位数 M 表示，进
行构成比的 2 检验。
2 结 果
2. 1 白蔹、乌头、白蔹 －乌头水煎液含药血清对 SGC － 7901
细胞增殖的影响 白蔹 －乌头含药血清对 SGC － 7901 细胞
的增殖有明显的抑制作用，与对照组比较均有显著性差异(P
均 ＜ 0． 05)。各组具体吸光度值 OD见表 1。
表 1 含药血清对 SGC － 7901 细胞增殖的影响(珋x ± s)
组别 剂量 24 h 48 h 72 h
对照组 1∶ 1 000 0． 371 ± 0． 044 0． 479 ± 0． 045 0． 589 ± 0． 062
5 － Fu 250 μg /L 0． 423 ± 0． 044 0． 301 ± 0． 048 0． 301 ± 0． 052
白蔹组 1∶ 1 000 0． 367 ± 0． 059 0． 479 ± 0． 089 0． 563 ± 0． 121
乌头组 1∶ 1 000 0． 386 ± 0． 079 0． 477 ± 0． 129 0． 575 ± 0． 095
白蔹 －乌头组 1∶ 1 000 0． 329 ± 0． 052① 0． 412 ± 0． 080①0． 479 ± 0． 089②
注:①与对照组比较，P ＜ 0． 05;②与对照组比较，P ＜ 0． 01。
2. 2 白蔹 －乌头水煎液含药血清不同浓度对 SGC － 7901 细
胞增殖的影响 白蔹 －乌头含药血清 1∶ 500 和 1∶ 1 000 浓度
对 SGC － 7901 细胞的增殖有明显的抑制作用，与对照组比较
均有显著性差异(P均 ＜ 0． 05)。见表 2。
表 2 白蔹 －乌头水煎液含药血清不同浓度对 SGC － 7901
细胞增殖的影响(珋x ± s)
组别 n 剂量 72 h吸光度 CD
对照组 8 1∶ 1 000 0． 683 ± 0． 026
5 － Fu组 8 250 0． 345 ± 0． 009②
白蔹 －乌头组 8 1∶ 500 0． 603 ± 0． 024①
白蔹 －乌头组 8 1∶ 1 000 0． 635 ± 0． 043①
白蔹 －乌头组 8 1∶ 2 000 0． 662 ± 0． 025
注:①与对照组比较，P ＜ 0． 05;②与对照组比较，P ＜ 0． 01。
2. 3 白蔹 －乌头水煎液含药血清对 SGC － 7901 细胞凋亡形
态的影响 正常 SGC － 7901 细胞核较大，有凹陷，畸形核或
分叶核，染色均匀;而由 5 － Fu 和白蔹乌头含药血清作用后，
细胞体积缩小，表面出现粗大的突起，核固缩，染色质边集于
核膜下，形成新月形小体，核膜消失或突起呈小泡样，核质浓
缩，发生碎裂，形成凋亡小体，呈早中期凋亡表现的细胞数明
显增多，见图 1。
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A，对照组;B，1 250 mg /L 5 － Fu组;C，白蔹 －乌头 1∶ 1 000 组;
D，白蔹 －乌头 1∶ 500 组
图 1 4 组 SGC － 7901 细胞凋亡形态比较(× 400)
3 讨 论
中药十八反、十九畏是中医处方用药的配伍禁忌。但通
过对《普剂方》及《全国中成药处方集》中含有十八反、十九畏
的内服成药方进行分析发现，含十八反、十九畏的方药多用于
治疗中风瘫痪和癥瘕积聚等疑难病症，说明某些疑难病症，尤
其是肿瘤，有可能从十八反、十九畏对药组方的应用中寻求出
路。近年来，有学者对 119 首包含有十八反药对的方剂进行
了量化分析，为研究十八反、十九畏提供了理论依据［3 － 5］。林
通国［6］对拮抗丸临床应用的研究，提示白蔹、乌头这一组中
药十八反中的配伍禁忌药，具有抗肿瘤作用。本研究通过体
外实验的方法，研究了白蔹、乌头单用及合用时对人胃腺癌
SGC － 7901 细胞增殖及凋亡形态的影响。实验结果表明:白
蔹(1 g生药 /mL)、乌头(1 g 生药 /mL)单药水煎液含药血清
在体外对 SGC － 7901 细胞的增殖无明显影响，而白蔹 －乌头
水煎液(1 g生药 /mL，1∶ 1 配伍)含药血清对 SGC － 7901 细胞
的增殖具有明显抑制作用，且呈浓度依赖。Hoechst 33258 染
色后观察，白蔹乌头(1 g 生药 /mL，1 ∶ 1 配伍)水煎液含药血
清不同浓度作用下，SGC － 7901 细胞出现凋亡的典型形态改
变，核固缩，染色质边集于核膜下，形成新月形小体，核膜消失
或突起呈小泡样，核质浓缩，发生碎裂。这为中药十八反、十
九畏作为抗肿瘤药物用于临床治疗提供了一定的实验依据。
［ 参 考 文 献 ］
［1］ 李杰． 试谈中药十八反、十九畏对药组方对各种肿瘤的特殊疗
效［J］． 医药世界，2007(2) :5 － 6
［2］ 李敏． 疑难病的中医治疗思路［J］． 中国中医药信息杂志，
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［收稿日期］
櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵
2011 － 01 － 18
(上接第 3387 页)入量有关;另外，各组瘙痒发生率比较无显
著性差异，推测其原因可能是 R 组由于镇痛效果差，吗啡入
量多于 SR各组，同样也有较高的瘙痒发生率。
剖宫产术前蛛网膜下腔注射 5 μg舒芬太尼，可以增强术
后镇痛的效果，延长镇痛泵开启时间，减少术后局麻药用量，
特别是在 8 h 后镇痛效果虽有减弱但能持续时间较长，虽有
一定不良反应，但利多弊少，在临床中使用是安全、有效的。
［ 参 考 文 献 ］
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［收稿日期］ 2011 － 02 － 09
·0933· 现代中西医结合杂志 Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine 2011 Sep，20(27)