全 文 ：网络出版时间:2014 －12 －4 13:45 网络出版地址: http: / /www． cnki． net /kcms /doi /10． 3969 / j． issn． 1001 －1978． 2015． 01． 029． html
◇复方药物药理学◇
甘遂与甘草合用对甘遂毒性成分甘遂萜酯 A、
甘遂萜酯 B代谢的影响
景欣悦1，彭蕴茹2，王新敏3，段金廒3
( 1．南京中医药大学第二临床医学院，江苏 南京 210023; 2．江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028;
3． 南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏 南京 210023)
收稿日期:2014 － 09 － 02，修回日期:2014 － 10 － 08
基金项目:国家重点基础研究发展计划(973 计划)资助项目(No
2011CB505300，2011CB505303) ;南京中医药大学青年自
然科学基金(12XZＲ17) ;江苏省高校自然科学基金
(13KJB360006)
作者简介:景欣悦(1978 －) ，女，博士，助理研究员，研究方向:药物
代谢，Tel:025-85811234，E-mail:jing_xinyue@ 163． com;
段金廒(1956 －) ，男，博士，教授，博士生导师，研究方向:
中药复方与中药资源化学，通讯作者，E-mail:dja@ njutcm．
Edu． cn
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2015． 01． 029
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2015)01 － 0136 － 05
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ282． 71;Ｒ284． 1;Ｒ285． 5;
Ｒ345. 99;Ｒ977. 3
摘要:目的 研究甘遂与甘草合用对甘遂中毒性成分甘遂萜
酯 A (Kansuinine A，KA)和甘遂萜酯 B (Kansuinine B，KB)
代谢的影响。方法 将正常对照组、甘草组、甘遂与甘草合
用组大鼠给予相应药物处理 10 d 后，制备肝微粒体。将甘
遂的毒性成分 KA、KB与各组肝微粒体进行体外共孵育，测
定孵育后体系中 KA、KB的浓度，用于评价 KA、KB的代谢情
况。另取正常大鼠肝微粒体，分别加入 CYP3A4、CYP2D6、
CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 的抑制剂红霉素、盐酸苯海拉
明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑，与 KA、KB 进行体外共孵
育，检测孵育后体系中 KA、KB 的浓度，阐明参与 KA、KB 代
谢的 CYP酶亚型。取正常大鼠肝微粒体，分别加入甘草酸
与甘草次酸，与 KA、KB体外共孵育，测定孵育后体系中 KA、
KB的浓度，评价甘草酸与甘草次酸对 KA、KB 代谢的影响。
结果 甘遂与甘草合用组微粒体中 KA、KB的含量明显高于
正常对照组和甘遂组，表明甘遂与甘草合用使甘遂中毒性成
分 KA、KB的代谢受到抑制。与红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴
马隆、西咪替丁和氟康唑共孵育的微粒体中 KA、KB 的含量
均明显高于空白对照组，表明 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、
CYP1A2、CYP2C19 均参与了 KA、KB的代谢。与甘草酸和甘
草次酸共孵育，体系中 KA、KB的浓度明显高于空白对照组。
CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2 表明甘草酸和甘草次酸
能够抑制 KA、KB 的代谢。结论 CYP2C19 均可能参与了
甘遂毒性成分 KA、KB 的代谢，甘遂与甘草合用能够抑制
CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2 及 CYP2C19 的活性，而
使 KA、KB的代谢减慢，产生蓄积;另外，甘草中主要成分甘
草酸和甘草次酸能够抑制 KA、KB 的代谢，这可能是甘遂与
甘草合用毒性增加的原因之一。
关键词:甘遂萜酯 A;甘遂萜酯 B;CYP2C19;酶抑制剂;甘草
酸;甘草次酸
甘遂始载于《神农本草经》，言其“味苦寒，主大
腹疝瘕，腹满，面目浮肿，留饮宿食，破症坚积聚，利
水谷道”。现行药典记载甘遂为大戟科(Euphobiace-
ae)大戟属(Euphorbia)植物甘遂(Euphorbia kansui，
EK)的干燥块根，具有泻水逐饮的功能。用于水肿
胀满、胸腹积水、痰饮积聚、气逆咳喘、二便不利［1］。
毒性研究表明，过量使用易引起腹痛、腹泻，严重时
会出现剧烈呕吐、血压下降、脱水和呼吸衰竭等症
状。功效研究表明，甘遂化学成分具有抗癌抗肿瘤
活性、抗病毒、抗胰腺炎等作用，亦可影响免疫系统
的特异性［2］。
中药配伍禁忌概括为歌诀“本草名言十八反，
半蒌贝蔹及攻乌，藻戟遂芫俱战草，诸参辛芍叛藜
芦”最早见于金元时期张子和的《儒门事亲·卷十
四·十八反》。“甘遂反甘草(Glycyrrhiza uralensis，
GU)”为中药配伍禁忌之一，但从古到今，不断有医
家报道配伍使用后无明显毒副作用，而实验研究的
结果亦不尽相同［3 － 4］。后世医家对其从各个角度进
行了的实验验证。对大鼠心、肝、肾病理形态影响显
示存在较明显毒性增强的情况［5］。
目前研究报道，甘遂主要化学成分主要为二萜
类和三萜类化合物。活性研究也主要是针对二萜类
和三萜类化合物的单体成分进行的。研究表明，二
萜类化合物有较强的刺激作用，但也有抗肿瘤活性，
提示其毒性成分与有效成分之间有一定的内在联
系。三萜类成分也具有一定的药理活性，但其毒性
方面的研究较少。甘遂本身所含巨大戟萜醇及其衍
生物和一些二萜酯类如甘遂萜酯 A、甘遂萜酯 B 均
为毒性成分，具有激活 EB 病毒早期抗原活性、皮肤
刺激及促进肿瘤发生作用［6］。所以，甘遂毒性成分
的代谢可能影响其毒性作用。甘遂与甘草合用，可
·631· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Jan; 31( 1) : 136 ～ 40
能影响了参与甘遂毒性成分代谢的酶，而使甘遂毒
性成分代谢减慢，产生蓄积，导致毒性增强。本实验
拟从甘草与甘遂合用对甘遂中毒性成份代谢的影响
的角度入手，阐明二者合用增毒的可能原因。
1 材料与方法
1． 1 试剂与仪器
1． 1． 1 仪器 Waters Acquity UPLC(美国 Waters 公
司) ，XevoTriple四极杆检测器(美国Waters公司) ，配
置电喷射离子源(ESI) ，自动进样器，MS /MS 检测器，
MassLynx软件;METTEＲ AL104 电子天平(梅特勒—
托利多仪器上海有限公司) ;XW-80A 型漩涡混合器
(上海沪西分析仪器厂有限公司) ;Milli-Q Gradient
A10 超纯水器(Millipore Inc． USA) ;AllegraTM 21Ｒ
Centrifuge台式离心机(BECKMAN COULTEＲTM)。
1． 1． 2 试剂 甘草水提物，甘遂 95%醇提物由南
京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室提
供。甘遂萜酯 A、甘遂萜酯 B、甘草酸、甘草次酸由
南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室
提供，红霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和
氟康唑购于中国药品检验所。
甘遂萜酯 A、甘遂萜酯 B的配制:精密称取 KA、
KB粉末各 1 mg，加入 200 μL DMSO溶解后，加 PBS
定容至 1 mL。配制成 1． 0 g·L －1的储备液。
甘草酸和甘草次酸的配制:精密称取甘草酸 1
mg，加热水溶解并定容至 10 mL，终浓度为 100 mg·
L －1的应用液，临用现配，并置于热水浴中保持溶解
性;精密称取甘草次酸 1 mg，加入 100 μL 乙醇溶解
后，加入 PBS 定容至 1 mL 浓度为 1 g·L －1。红霉
素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑的
配制:均用 PBS配制成 1． 0 g·L －1的溶液。
1． 2 实验动物与分组 健康♂ Sprague-Dawley 大
鼠，体质量 180 ～ 200 g，由上海西普尔—必凯实验动
物中心提供。自然昼夜环境饲养，给予标准饲料，自
由摄食、饮水，室温保持(22 ± 2)℃，相对湿度为
50% ～60%。动物实验由南京中医药大学动物伦理
委员会批准实施。动物随机分组 3 组，分别为正常
对照组、甘草组、甘遂与甘草合用组，每组 6 只。
1． 3 给药方法与剂量 按组别灌胃给予相应药物
提取物，正常对照组给予 0． 25%的 CMC-Na 溶液。
甘草组为 10 g生药·kg －1，甘遂与甘草合用组为 20
g生药·kg －1。连续灌胃给予各组提取物 10 d，每
天 1 次。于末次给药 8 h后禁食 16 h。
1． 4 肝微粒体的制备 采用差速离心法制备肝微
粒体［7，8］。动物于末次给药 8 h 后开始禁食，禁食
16 h后，采用乙醚麻醉各组大鼠，股动脉放血后，颈
椎脱臼处死，迅速取下肝组织，置于 0 ～ 4℃冰板上。
将肝组织剪碎，用 0. 15 mol·L －1 KCl － 0. 1 mol·
L －1磷酸盐缓冲液反复冲洗 3 次，除去血红蛋白后加
入上述磷酸盐缓冲液制成肝匀浆，在 4℃下以 9 000
× g离心 20 min 后，取上清液，于 4℃下以 100 000
× g 离心 60 min，将粉红色沉淀物(微粒体)悬浮于
含 30%甘油的磷酸盐缓冲液中，使用 Bradford 法［9］
测定试剂盒测定肝微粒体蛋白浓度，分装后置于
－ 80℃冰箱内保存。
1． 5 体外孵育法研究甘遂与甘草合用对甘遂中毒性
成分 KA、KB的影响 KA、KB分别与正常对照组大
鼠肝微粒体、甘遂处理组肝微粒体和甘草与甘遂合用
组肝微粒体共孵育。反应体系中含 NADPH 再生系
统(NADP 500 μmol·L －1，G-6-P 10 mmol·L －1，G-
6-P-OH 1 kU·L －1，MgCl2 0. 5 mmol·L
－1) ，微粒体
蛋白终浓度为 1 g·L －1。先将反应体系置于 37℃水
浴预温孵5 min后，加入KA、KB启动反应，KA、KB的
终浓度均为 2. 0 mg·L －1。孵育 30 min 后，加入 50
μL乙腈中止反应。反应总体积为 200 μL。
1． 6 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、
CYP2C19 的抑制剂对 KA、KB 代谢的影响 取正
常大鼠肝微粒体，反应体系中含微粒体蛋白终浓度
为 1 g·L －1、NADPH 再生系统(NADP 500 μmol·
L －1，G-6-P 10 mmol·L －1，G-6-P-OH 1 kU·L －1，
MgCl2 0. 5 mmol · L
－1)。分 别 加 入 CYP3A4、
CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 的抑制剂红
霉素、盐酸苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑，
终浓度均为 100 mg·L －1。于 37℃预温孵 5 min，加
入 KA、KB启动反应，温孵 30 min后，加入 50 μL乙
腈中止反应。KA、KB 的终浓度均为 2. 0 mg·L －1。
反应总体积为 200 μL。
1． 7 体外孵育法研究甘草酸、甘草次酸对 KA、KB
代谢的影响 取正常大鼠肝微粒体，反应体系中含
微粒体蛋白终浓度为 1 g·L －1、NADPH 再生系统
(NADP 500 μmol·L －1，G-6-P 10 mmol·L －1，G-6-
P-OH 1 kU·L －1，MgCl2 0. 5 mmol·L
－1)。分别加
入甘草酸和甘草次酸，于 37℃预温孵 5 min，加入
KA、KB启动反应，温孵 30 min 后，加入 50 μL 乙腈
中止反应。KA、KB 的终浓度均为 2. 0 mg·L －1。
甘草酸和甘草次酸的终浓度均为 10 mg·L －1。反
应总体积为 200 μL。
1． 8 色谱条件及 MS 质谱条件 色谱柱为 ACQU-
ITY UPLC BEH C18 柱(100 mm × 2. 1 mm，1. 7
μm) ;流动相为 0. 1%甲酸水 － 乙腈 = 40 ∶ 60;流
速:0. 4 mL·min －1;柱温:30℃;ESI-MS 采用正离子
·731·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Jan; 31( 1)
检测的电喷雾电离方式;KA、KB 的锥孔电压分别为
44V和 56V;去溶剂化温度为 550℃;去溶剂化气流
为 1 000 L·h －1。在该色谱条件下，KA 和 KB 的保
留时间分别约为 3. 909 min 和 5. 932 min (Ｒ ＞
1. 5) ，分离较好，且血浆中的内源性物质不干扰
KA、KB的测定。
1． 9 统计学处理 采用 SPSS 16. 0 软件包进行数
据统计分析。实验数据以 珋x ± s 表示，组间比较采用
方差分析，组间两两比较采用 t检验。
2 结果
2． 1 甘遂与甘草合用对甘遂中毒性成分 KA、KB
代谢的影响 将甘遂中毒性成分 KA、KB 分别与正
常对照组(Control)、甘遂组(EK)、甘遂与甘草合用
组(EK + GU)微粒体体外共孵育，测定孵育后体系
中 KA、KB的浓度。KA、KB 在各组中的浓度见 Fig
1。结果显示，甘遂组微粒体中 KA的浓度与正常对
照组间差异无显著性，而甘遂与甘草合用组微粒体
中KA的浓度明显高于正常对照组和甘遂组，表明
Fig 1 Concentration of KA (A)and KB (B)in hepatic
microsomes of treated and control rats． Incubation mixture
consisted of microsomal protein (1 g·L －1)
Treated rats were prepared as described in Materials and Methods．
Data represent the mean ± SD of two different preparations． * P ＜ 0． 05，
＊＊P ＜ 0. 01 vs control;#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01 vs EK．
合用使 KA的代谢受到抑制;甘遂组微粒体中 KB的
浓度高于正常对照组，表明单独使用甘遂可使 KB
的代谢减慢，而甘遂与甘草合用组 KB 的浓度明显
高于正常对照组与甘遂组，表明合用使 KB 的代谢
受到抑制的程度增加。
2． 2 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、
CYP2C19 的抑制剂对 KA、KB 代谢的影响 取正
常大鼠肝微粒体，分别加入 CYP3A4、CYP2D6、
CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 的抑制剂红霉素、盐酸
苯海拉明、苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑，与 KA、KB
体外共孵育，测定孵育后体系中 KA、KB 的浓度。
孵育后，KA、KB 在各组中的浓度见 Fig 2。结果显
示，各组微粒体中 KA、KB 的含量均明显高于空白
对照组，表明 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、
CYP2C19 的活性受到抑制，KA、KB 的代谢均减慢，
CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 均可
能参与了 KA、KB的代谢，其中 CYP2C9 对 KA代谢
的影响最为明显，CYP2 C19对KB代谢的影响最
Fig 2 Concentration of KA (A)and KB (B)in hepatic
microsomes with enzyme inhibitors of CYP3A4，CYP2D6，
CYP2C9，CYP1A2 and CYP2C19
Incubation mixture consisted of microsomal protein (1 g·L －1)．
Treated rats were prepared as described in Materials and Methods． Data
represent the mean ± SD of two different preparations． * P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0． 01 vs control．
·831· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Jan; 31( 1)
为明显。由此可以推测，甘遂与甘草合用抑制了
CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 等酶
的活性，从而使甘遂中毒性成分 KA、KB 的代谢减
慢，产生蓄积，最终导致甘遂毒性增加。这可能是甘
遂与甘草合用增毒的原因之一。
2． 3 甘草酸、甘草次酸对 KA、KB代谢的影响 取
正常大鼠肝微粒体，分别加入甘草酸和甘草次酸与
KA、KB共孵育，测定孵育后体系中 KA、KB 的浓度。
KA、KB 在各组中的浓度见 Fig 3。结果显示，加入
甘草酸和甘草次酸，温孵体系中 KA、KB 的浓度明
显高于正常对照组，表明甘草酸和甘草次酸能够抑
制 KA、KB的代谢。
Fig 3 Concentration of KA (A)and KB (B)in hepatic
microsomal incubates with glycyrrhizic acid and enoxolone
Incubation mixture consisted of microsomal protein (1 g·L －1)．
Treated rats were prepared as described in Materials and Methods． Data
represent the mean ± SD of two different preparations． * P ＜ 0. 05 vs
control．
3 讨论
本实验通过微粒体体外孵育的方法，研究甘遂
与甘草合用对甘遂中毒性成分 KA、KB 代谢的影
响，结果表明，甘遂与甘草合用使 KA、KB 的代谢受
到抑制;KA、KB 分别与 CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、
CYP1A2、CYP2C19的抑制剂红霉素、盐酸苯海拉明、
苯溴马隆、西咪替丁和氟康唑体外共孵育，测定孵育
后体系中 KA、KB的浓度，以确定是哪种酶的亚型参
与了 KA、KB的代谢。结果表明，几种酶亚型均参与
了 KA、KB的代谢，以 CYP2C9 和 CYP2C19 影响最为
明显。甘遂与甘草合用可能抑制了 CYP3A4、
CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19 当中一种或几
种酶的活性，从而使甘遂中毒性成分 KA、KB的代谢
减慢，产生蓄积，最终导致甘遂的毒性增加。这可能
是甘遂与甘草不能合用的原因之一。
有研究表明，甘遂化学部位 GS-3 可明显促进脾
淋巴细胞增殖，证明 GS-3 为甘遂致炎的毒性部位
群。用 HPLC-MSn 色谱技术对 GS-3 部位进行化学
组成分析，结果共鉴定了其中的 12 个二萜类化合
物［10］。为进一步阐明甘遂毒效作用的物质基础，采
用硅胶柱层析和制备液相等多种色谱手段对甘遂毒
性部位进行了化学分离。结果共分离鉴定了 8 个化
合物，甘遂萜酯 A和甘遂萜酯 B 为其中两个。有文
献报导二萜酯类如甘遂萜酯 A、甘遂萜酯 B 均为毒
性成分［6］，故我们选择甘遂萜酯 A、甘遂萜酯 B 为
目标化合物，考察甘遂与甘草合用对 KA、KB 两个
毒性物质代谢的影响，来阐明合用增毒的原因。
“甘草能解百药毒”、“十方九草”是中医方剂配
伍解毒、调和药性之经典认识。然而，“十八反”则
告诫人们海藻、大戟、甘遂、芫花与甘草相对立不宜
伍用。研究表明，“藻戟遂芫俱战草”致毒、增毒效
应可能的作用机制有: (1)诸药与甘草配伍后其有
毒物质可能与甘草中的甘草酸通过氢键形成复合
物，以及具有表面活性的甘草三萜酸均有助于毒性
成分的溶出，使其在水煎剂中的含量增高; (2)甘草
在一定条件下或可稳定大戟、甘遂毒性成分二萜醇
(酯)和二萜原酸酯类成分的存在状态，或延缓其毒
性成分在体内的消除速率而蓄积增毒。然而，甘草
中主要成分甘草酸和甘草次酸对甘遂中毒性成分代
谢的影响还未见报道。我们的实验采用体外微粒体
温孵的方法考察甘草酸和甘草次酸对 KA、KB 代谢
的影响，以从两味药单体成分相互作用这一角度阐
明合用增毒的可能原因。
当然，中药成分非常复杂，对中药有效成分进行
细胞色素 P450 酶多种亚型的研究及药物相互作用
研究还不能够全面阐释中药相互作用的原因。中药
间、中西药间及中药各成分间的相互作用尚需通过
深入研究其对药物代谢酶系统的影响规律，进而阐
明中药相互作用、毒副作用发生的分子机制及科学
内涵，为中医药相互作用机制赋予现代的、科学的解
·931·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Jan; 31( 1)
释，为临床合理用药提供理论基础，提高中药使用的
安全性和有效性［11］。
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Combined effect of Euphorbia kansui and Glycyrrhiza uralensis on
metabolism of Kansuinine A and Kansuinine B
JING Xin-yue1，PENG Yun-ru2，WANG Xin-min3，DUAN Jin-ao3
(1． No． 2 Clinical Medical College，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China;2． Jiangsu Provincial
Academy of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210028，China;3． Jiangsu Key Laboratory for High Technology
Ｒesearch of TCM Formulae，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China)
Abstract:Aim To study the combined effect Euphor-
bia kansui of and Glycyrrhiza uralensis on metabolism of
Kansuinine A and Kansuinine B． Methods Control，
GU and GU plus EK groups were treated for 10 days，
respectively． Then the liver microsomes were pre-
pared． KA and KB were incubated with microsomes of
each group，and concentrations of KA and KB were
measured to reflect the metablism of KA and KB． E-
rythromycin，diphenhydramine hydrochloride，benzbro-
marone，cimetidine， fluconazole the inhibitors of
CYP3A4，CYP2D6，CYP2C9，CYP1A2，CYP2C19
respectively，were incubated with KA and KB． Con-
centrations of KA and KB were measured to reveal the
cytochrome P450 isoforms which involved in the metab-
olism of them． KA and KB were incubated with glycyr-
rhizic acid and enoxolone． Then concentrations of KA
and KB were measured to reveal the effects of glycyr-
rhizic acid and enoxolone to KA and KB． Ｒesults
Concentrations of KA and KB in GU plus EK group
were significantly higher than those in control and EK
groups，which showed that the metablisom of KA and
KB was inhibited in GU plus EK group． In addition，
concentrations of KA and KB were higher in micro-
somes incubated with erythromycin，diphenhydramine
hydrochloride，benzbromarone，cimetidine and flucon-
azole than in control group，which revealed that the
metablism of KA and KB was slowed down when
CYP3A4，CYP2D6，CYP2C9，CYP1A2 and CYP2C19
were inhibited． They may participate in the metablisom
of KA and KB． After incubation with glycyrrhizic acid
and enoxolone， the metablism of KA and KB was
slowed down． Conclusions KA and KB may be the
substrates of CYP2C19． GU plus EK can inhibit the
activity of CYP2C19，which resulted in KA and KB
metablism slowing down and accumulation． In addi-
tion，glycyrrhizic acid and enoxolone can inhibit the
metablism of KA and KB． It may be one of the reasons
of increased toxicity of GU plus EK．
Key words:Kansuinine A;Kansuinine B;CYP2C19;
enzyme inhibitors;glycyrrhizic acid;enoxolone
·041· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Jan; 31( 1)