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基于均匀设计法评价甘遂与甘草反药组合对小鼠肠功能的影响



全 文 :基于均匀设计法评价甘遂与甘草反药组合对小鼠肠功
能的影响
卢丹丹1,卞勇1,李璘1,徐立1,姜玮2,尚尔鑫2,唐于平2,段金廒2,胡小鹰1*
(1.南京中医药大学药物安全性评价中心,江苏 南京 210046;2.江苏省方剂高技术研究重点实验室,江苏 南京 210046)
摘要:目的 研究甘遂与甘草不同配比及剂量的变化对小鼠肠功能的影响。方法 采用均匀设计法,按2因素7水平以小鼠
肠推进率和肠质量为指标,观察合并液和合煎液对肠功能的影响。结果 对肠推进率的影响:合并液促进肠推进率,存在协
同作用,总剂量低于5g/kg时,甘遂醇提物与甘草合并后各组对小鼠肠推进率未见增加;大于5g/kg各组对小鼠肠推进率的
影响呈现增加趋势,随着甘遂或甘草配比增加,肠推进率作用逐渐减弱。对肠质量的影响:总给药剂量在0~30g/kg范围内,
合并液与合煎液肠质量随甘遂剂量增加而增加,但未见交互作用。结论 合并液1∶1对小鼠肠推进功能的影响与剂量有密
切关系,合煎液对肠道平滑肌无明显影响,该与临床上甘遂以粉末入药可能存在一定的相关性。该研究为甘遂-甘草反药组合
的毒效表征奠定了一定的研究基础。
关键词:甘遂;甘草;反药组合;配伍禁忌
中图号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:1672-0482(2012)02-0143-04
Evaluating the Combination of Kansui Radix and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and its Effects on Mice Intestinal Function Based
on the Uniform Design Method
LU Dan-dan1,BIAN Yong1,LI Lin1,XU Li 1,JIANG Wei 2,SHANG Er-xin2,TANG Yu-ping2,DUAN Jin-ao2,Hu Xiao-
ying1*
(1.GLP,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing,210046,China;2.Jiangsu Key Laboratory for High Technol-
ogy Research of TCM Formulae,Nanjing,210046,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the effect of blend medicine of Kansui Radix (KR)and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma
(GRR)which extracted separately(KR was extracted by ethanol and GRR was decocted),decoction of KR and GRR which de-
cocted together at different dose or ratio on intestinal function in mice.METHODS The uniform design method was used by
two factors and seven levels to investigate the intestine propulsive rate and bowel weight in mice.RESULTS The influence of
the intestine propulsive rate:the blend medicine obviously promoted the intestine propulsive rate and had certain synergy,
when total dose was lower than 5g/kg,each group of mice on intestine propulsive rate had not seen the increase,when the to-
tal dose was more than 5g/kg,intestine propulsive rate increased when the dose was in the increasing trend,and when the rati-
o was 1∶1,the intestine propulsive rate increase obviously.The influence of the intestine weight:when the dose is between 0
~30g/kg,the intestine weight increased when the dose of KR increased in blend medicine and joint decoction,but there was
no interaction effect between KR and GRR.CONCLUSION The dose infects intestinal function mostly when the ratio of KR
combined with GRR is 1∶1in blend medicine.The Joint decoction group on intestinal propulsion in mice does not fit a regres-
sion equation,prompting the intestinal smooth muscle without apparent effect,which have correlation with clinicaly using
kansui powder frequently.This research laid a foundation for the systematic toxicity evaluation on combination of KR and
GRR.
KEY WORDS:Kansui Radix;Glycyrrhizae Radix et Rhizoma;combination of two imcompatible herbs;imcompatibility
  甘遂和甘草为临床常用中药。甘遂功用为泻水 逐饮,破积通便[1]。甘草具有补脾益气,清热解毒,
—341—
南京中医药大学学报2012年3月第28卷第2期
JOURNALOF NANJING UNIVERSITY OF TCM Vol.28 No.2 Mar.2012
收稿日期:2011-12-05;修稿日期:2012-02-08
基金项目:国家重点基础研究发展计划(“973”计划)(2011CB505300,2011CB505303)
作者简介:卢丹丹(1983-),女,江苏徐州人,南京中医药大学2009级硕士研究生。*通信作者:xyhu2222@yahoo.com.cn
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2012.02.017
祛痰止咳,缓急止痛,调和诸药之功效[2]。古代中医
药文献记载甘遂甘草同用属十八反范围,为临床配
伍禁忌。但历代医案中也可见甘遂与甘草配伍,用
于治疗胃炎、结肠炎、肠结核等病症[3]。有研究认为
甘遂甘草配伍是否合理与两者间比例及剂量等因素
有关[4]。因此,本文采用定量药理学方法评价甘遂
与甘草不同比例组合对肠运动的影响,从而进一步
为甘遂-甘草反药组合的毒效表征奠定基础。
1 材料
1.1 动物
昆明种小鼠,SPF级,体质量(22±2)g,雌雄各
半,由上海斯莱克实验动物有限公司提供,动物合格
证号:SCXK(沪)2007-0005。
1.2 药品与试剂
甘遂产地陕西宝鸡红河谷地区,甘草产地宁夏
灵武市美康甘草基地。由南京中医药大学段金廒教
授鉴定,分别为大戟科植物甘遂Euphorbia kansui
的干燥块根和豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis
Fisch.的干燥根及根茎。
不同比例甘遂醇提物甘草合并液(简称合并
液):批号20110808,不同比例甘遂-甘草合煎液(简
称合煎液):批号:20110714,均由实验室自制。
印度墨汁,50mL/瓶,批号:412423,Waldeck
GmbH &Co.KG。
1.3 仪器
电子天平,型号Sartorius BSA323S-CW,赛多
利斯科学仪器(北京)有限公司;电子天平,型号
JM12001,浙江省纪铭称重校验设备有限公司。
2 方法与结果
2.1 剂量的设计和选择
依据甘遂、甘草药典临床用量范围,选择2因素
7水平,按均匀设计 U7(72)表设计药组配比及剂
量。因素水平及剂量设定见表1、表2。
2.2 小鼠肠运动试验
取小鼠140只,体质量(22±2)g,按均匀设计
(表2)分组,随机分14组,合并液7组,合煎液7
组,每组10只,雌雄各半。给药前禁食24h,不禁
水。分别灌胃给予相应药物,给药容积为0.2mL/
10g。于给药30min后灌胃给予5%印度墨汁混悬
液0.2mL/只,20min后处死动物,剪取小肠,量取
自幽门括约肌至墨汁最前端的距离作为小肠墨汁推
进距离,以幽门至回盲部作为小肠总长度,计算小肠
推进率。同时称取肠质量,并以此作为判定小肠容
积的指标。
小肠推进率=
墨汁推进距离
小肠总长度 ×100%。
表1 2因素7水平均匀设计表[U7(72)]
药组编号 因素1(甘遂) 因素2(甘草)
1  4  4
2  7  3
3  1  5
4  2  2
5  5  1
6  3  7
7  6  6
表2 甘遂与甘草配伍均匀设计剂量表g·kg-1
药组 甘遂 甘草 总剂量 甘遂∶甘草
1  0.59  3.14  3.73  1∶5.32
2  9.21  1.57  10.78  1∶0.17
3  0.04  6.29  6.33  1∶157.25
4  0.09  0.79  0.88  1∶8.78
5  1.48  0.39  1.87  1∶0.26
6  0.24  25.14  25.38  1∶104.75
7  3.68  12.57  16.25  1∶3.42
2.3 数据处理
数据用平均值±标准差(珚x±s)表示,采用 mat-
lab 7.8软件进行多元逐步回归分析,以P<0.05为
有统计学意义。
2.4 结果
2.4.1 甘遂与甘草配伍影响小鼠肠推进率和肠质
量的药物交互作用分析
小鼠单次灌胃给予合并液和合煎液后,各药组
小鼠小肠推进率和肠质量变化结果见表3。
  采用matlab统计软件进行多元逐步回归,以表
中甘遂、甘草因素分别为自变量 X1、X2;以肠推进
率、肠质量分别为因变量Y1、Y2,得出拟合方程,结
果见图1,方程如下:
方程1(合并液:小肠推进率):Y1=aX1*X2+
0.5624(其中a=0.002 734,P<0.05,相关系数r=
0.772 1)
方程2(合并液:小肠质量):Y2=aX1+bX2+
1.312(其中a=0.037 49,b=0.016 8,P<0.01,相
关系数r=0.997 8)
方程3(合煎液:小肠质量):Y2=ax1+bx2+
1.41(其中a=0.035 29,b=0.008 74,P<0.05,相
关系数r=0.905 0)
合煎液小鼠肠推进率指标未呈现出规律性变
化,没有拟合出回归方程。
—441— 南京中医药大学学报2012年3月第28卷第2期
表3 合并液和合煎液对小鼠肠推进率及肠质量的影响(珚x±s,n=10)
组别
小肠推进率/%
合并液 合煎液
小肠质量/g
合并液 合煎液
药组1  60.05±7.24  72.29±6.86  1.40±0.10 1.56±0.19
药组2  58.90±22.23 69.39±7.35  1.69±0.27 1.75±0.25
药组3  58.58±15.52 57.23±16.68  1.41±0.12 1.44±0.11
药组4  58.59±9.43  49.36±6.45  1.34±0.11 1.33±0.10
药组5  48.54±16.29 59.23±7.29  1.36±0.13 1.50±0.22
药组6  58.93±20.50 75.41±10.02  1.75±0.33 1.65±0.21
药组7  69.11±11.20 69.51±10.37  1.65±0.19 1.62±0.13
   
合并液对小鼠肠推进率的影响      合并液对小鼠肠质量的影响      合煎液对小鼠肠质量的影响
图1 合并液和合煎液对小鼠肠推进率及肠质量影响的三维效应图
  结果:方程1表明,合并液中甘遂醇提物和甘草
促进小肠推进率存在正交互作用,两药合用较单药
作用增强,并且有一定的协同作用。方程2、方程3
提示,合并液与合煎液均增加小肠质量,且甘遂的贡
献度大于甘草,但未见明显交互作用。
2.4.2 甘遂与甘草配伍影响小鼠肠推进率和肠质
量的药组配伍比例和用药剂量相关性分析
由以上方程1、2、3进行外延推论,分别以药物
总剂量、不同比例(甘遂∶甘草)因素作为自变量D、
k;以肠推进率、肠质量为相应的因变量 Y3、Y4,得
理论拟合方程,结果见图2,方程如下:
方程4(合并液:小肠推进率):Y3=(0.002734
*D^2*k)/(k+1)^2+0.5624
方程5(合并液:小肠质量):Y4=(0.0168*
D)/(k+1)+(0.03749*D*k)/(k+1)+1.312
方程6(合煎液:小肠质量):Y4=(0.00874*
D)/(k+1)+(0.03529*D*k)/(k+1)+1.41
   
合并液均匀设计对小鼠肠推进率的影响  合并液均匀设计对小鼠肠质量的影响 合煎液均匀设计对小鼠肠质量的影响
图2 甘遂与甘草配伍对小鼠肠推进率和肠质量的影响
  拟合分析得出:合并液总剂量低于5g/kg时,
各组对小鼠肠推进率未见增加;大于5g/kg各组对
小鼠肠推进率的影响呈现增加趋势,随着甘遂或甘
草在配伍中比例增多,肠推进率作用逐渐减弱,1∶1
时总剂量大于5g/kg,对肠推进率的增加最明显。
总给药剂量在0~30g/kg范围内,合并液与合煎液
—541—卢丹丹,等:基于均匀设计法评价甘遂与甘草反药组合对小鼠肠功能的影响 第2期
肠质量随甘遂在药组中比例升高而增加,即甘遂甘
草18∶1时,对肠质量的增重最明显。见图2。
3 讨论
近年来,围绕中药十八反药物的毒效以及物质
基础的研究报道众多,但其结果不一,如何采用现代
科学方法阐释其毒效与配比及剂量的关系,是当前
亟需解决的问题之一。均匀设计由方开泰和王元提
出[5],该方法所用实验次数少且与水平数相等,结果
用相关软件进行回归分析,可判定相关因素对作用
效果的贡献大小,是一种中药配伍研究的方法[6]。
本研究以中医药配伍禁忌理论和定量药理学为指
导,采用均匀设计方法研究探讨甘遂与甘草反药组
合的对小鼠肠功能的影响。
实验结果表明:合并液促进肠推进率,存在协同
作用,两药合用大大增加肠推进功能。有文献报道
甘遂水煎液的泻下作用较醇提物缓和[7];甘草水煎
剂对小肠推进作用随着给药剂量的不同而不同,小
剂量3.75g/kg时抑制小鼠小肠的推进功能,高剂
量20g/kg促进肠蠕动[8]。本试验拟合分析得出:
合并液总剂量低于5g/kg(相当于药典临床用量高
限的2.8倍),各组对小鼠肠推进率未见增加;大于
5g/kg各组对小鼠肠推进率的影响呈现增加趋势,
随着甘遂或甘草在配伍中比例增多,肠推进率作用
逐渐减弱。1∶1时,总剂量大于5g/kg对肠推进率
的增加最明显,说明1∶1合并液对小鼠肠推进功能
的影响与剂量有密切关系。合并液1∶1总给药剂
量大于30g/kg(相当于药典临床用量高限的16.6
倍),大大促进小鼠肠推进功能,导致泻下作用加剧,
可能与导致电解质紊乱有关。总给药剂量在0~30
g/kg范围内,合并液与合煎液肠质量随甘遂剂量增
加而增加,甘遂的贡献度大于甘草,但未见交互作
用。合并液与合煎液对肠质量的影响与相应的肠推
进率指标无相似作用,其原因有待进一步研究。合
煎液对小鼠肠推进率的影响未拟合出回归方程,提
示合煎液对肠道平滑肌无明显影响,这与临床上甘
遂以粉末入药可能存在一定的相关性。本研究为甘
遂-甘草反药组合的毒效表征奠定了一定的研究基
础。
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(编辑:董宇)
—641— 南京中医药大学学报2012年3月第28卷第2期