全 文 ：金柑总黄酮解酒功效的体外活性试验初探
陈则夷，王仁才，黄红芳，刘吉凯
（湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128）
摘 要：以浏阳金柑（金弹）为试验材料，用 80％的乙醇水溶液、正丁醇溶液、乙酸乙酯溶液分别提取金柑黄酮，采用瓦勒-霍赫
（Valle & Hoch）改良法检测金柑黄酮对乙醇脱氢酶活性的影响，并分别探讨了 3种金柑总黄酮提取液对乙醇脱氢酶活性的影响。
结果表明：80％的乙醇水溶液提取的金柑总黄酮含量最高，为 0.400 mg/mL，其溶液的解酒效果最佳，并随金柑总黄酮含量的增加
对乙醇脱氢酶活性的激活作用增强。
关键词：金柑；黄酮；乙醇脱氢酶；解酒
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1006-060X（2012）07-0107-02
In Vitro Activity Experiment for Dealcoholization Effect of
Total Flavone Extracted from Kumquat
CHEN Ze-yi, WANG Ren-cai, HUANG Hong-fang, LIU Ji-kai
(College of Horticulture and Landscape, HNAU, Changsha 410128, PRC)
Abstract: Liuyang crispy kumquat (Jindan) was taken as test material. Using 80% ethanol-aqueous solution, n-butyl
alcohol solution and ethyl acetate solution to extract flavone from kumquat, and using improved Valle & Hoch method to
test the effect of kumquat flavone on activity of alcoholic dehydrogenase, and then the influences of the three extraction
solutions on activity of alcoholic dehydrogenase were respectively analyzed. The results indicated that the content of
kumquat flavone extracted with 80% ethanol-aqueous solution was the highest (0.400 mg/mL); the dealcoholization effect
of the 80% ethanol -aqueous solution was the best, and the activation effect of kumquat flavone on alcoholic
dehydrogenase increased with increasing contents of kumquat flavone.
Key words: kumquat; flavone; ADH; dealcoholization
利用天然植物活性成分解酒功效的研究在葛
花[1-2]、枳椇子[3]、橄榄[4]等先后得到证实，但有关金柑
解酒功效的研究尚未见报道。金柑作为传统的药食
同源果实，具有疏肝醒酒的功效。乙醇脱氢酶
（ADH）[5]是参与乙醇在体内代谢的主要酶，在乙醇
代谢中具有加快乙醇代谢，降低血醇浓度，减轻其
对机体的伤害等重要作用。试验主要研究了不同成
分提取液对金柑总黄酮提取差异，以及金柑总黄酮
的剂量对乙醇脱氢酶活性的影响。
1 材料与方法
1.1 材 料
供试材料为浏阳金柑（金弹），采自浏阳官渡金
柑种植园。
1.2 金柑总黄酮的制备
选取 20个金柑，清洗干净，剥皮，将金柑皮放
在托盘中，烘箱中 50℃烘干，中药粉碎机打粉。取金
柑皮干粉 3份，分别称重 5.00 g，用脱脂纸包好置于
3个索氏提取器中（编号为 A、B、C）。分别加入 200
mL分析纯石油醚，在 80℃下脱脂至无色，过滤，去
滤渣，在 A中加入 200 mL 80 %的乙醇溶液，在 80℃
下回流提取 2.5 h，过滤，回收乙醇提取液；在 B中加
200 mL正丁醇，在 80℃下提取 2.5 h，过滤，回收正
丁醇提取液；在 C中加入 200 mL乙酸乙酯，在 80℃
下回流提取 2.5 h，回收乙酸乙酯提取液。
1.3 黄酮含量的检测及金柑黄酮的体外酶
激活测定
黄酮含量的检测：采用紫外分光光度计测定黄
酮含量，分别取 80％乙醇提取液、正丁醇提取液、乙
酸乙酯提取液各 20 mL，真空旋干，用 10 mL 30％
乙醇溶液溶解于 25 mL容量瓶中，加 5%的 NaNO2
溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min 后加入 10%的
Al（NO3）3 溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min 后加入
4% NaOH 溶液 10.0 mL，用 30%乙醇定容，摇匀，
以空白为对照，10～15 min 后于 510 nm 处测定吸
光度 A。
收稿日期：2012-03-15
作者简介：陈则夷（1987-），男，湖南长沙市人，硕士研究生，
主要从事功能产品开发与评价研究。
通讯作者：王才仁
湖南农业科学 2012，（07）：107~108 Hunan Agricultural Sciences
DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2012.07.040
表 2 3种溶剂提取的金柑黄酮对
乙醇脱氢酶活性的影响 （%）
80％乙醇提取液
正丁醇提取液
乙酸乙酯提取液
处 理
样品量（mL）
0.1
12.9
3.29
2.19
0.2
20.88
5.49
－15.38
0.3
26.34
－2.20
－3.29
0.4
32.96
6.59
1.09
注：表中数据为激活（抑制）率；“+”表示激活，“－”表示抑制。
表 1 不同提取液的吸光度
处 理
乙酸乙酯提取液
正丁醇提取液
80％乙醇提取液
对照
试验
对照
试验
对照
试验
样品量（mL）
0.1
0.572±0.068
0.583±0.081
0.139±0.061
0.142±0.071
0.068±0.008
0.070±0.006
0.2
0.686±0.071
0.705±0.063
0.197±0.092
0.202±0.101
0.070±0.004
0.056±0.007
0.3
0.787±0.095
0.811±0.077
0.220±0.101
0.218±0.083
0.090±0.006
0.087±0.007
0.4
0.923±0.074
0.953±0.093
0.369±0.092
0.375±0.103
0.100±0.009
0.101±0.008
注：数据为X軍±s。
金柑黄酮的体外酶激活测定：采用瓦勒—霍赫
（Valle & Hoch）改良法检测乙醇脱氢酶活性。在带
塞试管中加入焦磷酸钠缓冲液 1.5 mL，NAD+1.0
mL，乙醇 0.5 mL，分别加入 3种金柑提取液 0.1、
0.2、0.3、0.4 mL，混合 37℃下加盖温育 5 min。温育
后的带塞试管中立即加入乙醇脱氢酶 0.1 mL，对照
管中以蒸馏水代替乙醇脱氢酶，摇匀，37℃温育 5
min，用 722型分光光度计测定吸光度（A340）值，以
后每隔 30 s 读数一次，连续测定 5 min。以对照管
调定零点，计算出每分钟的平均吸光值 ΔA/min。
乙醇脱氢酶活性计算法：
ADH 的活性（U/mL）=ΔA/min×反应总体积
酶的量
×
1
6．3×103 ×10
6=ΔA/min×4 900
抑制（激活）率计算：
抑制（激活）率（%）=酶活性无药对照组－酶活
性加药测定组/酶活性无药×100
2 结果与分析
2.1 标准曲线的确定
芦丁标样品的标准曲线方程为 y=1.072 3 x
－0.010 2，R2=0.999 5，其中 y为吸光度，x为芦丁标准品
浓度，表明芦丁浓度与吸光度具有良好的线性关系。
2.2 不同溶剂提取的金柑黄酮含量
以 1.3方法测得 80％乙醇提取液黄酮含量为
0.4 mg/mL，正丁醇提取液黄酮含量为 0.222 mg/mL，
乙酸乙酯提取液黄酮含量为 0.135 mg/mL。结果表
明，随着提取溶剂非极性的的增大，提取的金柑黄
酮的含量减少。如表 1所示，80% 乙醇提取液的总
黄酮为 0.400 mg/mL，正丁醇的为 0.222 mg/mL，乙
酸乙酯的为 0.135 mg/mL。
2.3 不同溶剂提取的金柑黄酮对乙醇脱氢
酶活性的影响
从表 2中可知，正丁醇提取液和乙酸乙酯提取
液对乙醇脱氢酶激活作用并不明显，在一定含量上
具有一定抑制作用。而 80%乙醇溶液提取的金柑总
黄酮对乙醇脱氢酶的活性激活效果较显著，且随黄
酮含量的增加激活率上升。
3 讨 论
（1）金柑总黄酮提取过程中，以 80%乙醇水溶
液提取液中总黄酮含量最高，由此推断，金柑总黄
酮中主要以极性较大的黄酮类化合物存在。
（2）80%乙醇提取液对乙醇脱氢酶激活作用较
显著，随着提取液含量的增加激活率上升，一定含
量的正丁醇和乙酸乙酯提取液对乙醇脱氢酶具有
抑制作用。由此推测，在金柑总黄酮中主要是极性
较大的黄酮类化合物对乙醇脱氢酶具有激活作用。
结果表明金柑乙醇提取液可以提高乙醇脱氢酶的
活性，具有解酒的功效。
参考文献：
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（责任编辑：高国赋）
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
-0.2
51
0
nm
处
吸
光
度
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
浓 度（mg/mL）
y=1.072 3 x-0.010 2
R2=0.999 5
图 1 芦丁标准曲线
第 07期湖南农业科学108