全 文 ：收稿日期:2007-03-15;　修订日期:2007-04-30
基金项目:湖北省计划生育委员会资助项目(No.Js2003.01)
作者简介:王建刚(1960-),男(汉族),河南三门峡人 ,现任华中科技大学教
授 ,在读博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事生殖药理及生殖毒理研究工作.
＊通讯作者简介:熊承良(1954-), 男(汉族),湖南华容人 , 现任华中科技
大学教授 ,博士生导师 ,主要从事生殖医学研究与临床工作.
鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用
王建刚1 , 熊承良 1＊ , 王学廷 2 , 郭险峰 2 , 李　艳 2 , 王娟锐2
(1.华中科技大学同济医学院计划生育研究所 ,湖北 武汉　430030;
2.河南科技大学医学院 ,河南 洛阳　471003)
摘要:目的 研究鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用。方法 (1)鹿藿醇提取物按照国际计划生育基金会认可的杀精
子实验方法 , 对 10只小鼠附睾精子悬液和 10例人精液进行体外杀精实验。 (2)用试管法及琼脂平皿稀释法观察鹿藿醇
提取物对几种临床常见致病菌的体外抑菌作用。 结果 鹿藿醇提取物对小鼠和人精子最低杀精浓度分别为 50和 100
mg/ml;对标准菌金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌 、大肠埃希菌 、肺炎克雷伯菌 MIC(试管法)分别为 1.0, 1.0, 4.0, 4.0 mg/
ml。对临床分离菌金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌 、大肠埃希菌 MIC(试管法)分别为 0.5, 2.0, 8.0mg/ml。结论 鹿藿醇
提取物对小鼠和人精子有一定杀精作用 ,对临床常见致病菌有比较强的抗菌作用。
关键词:鹿藿醇提取物;　体外杀精;　抗菌作用
中图分类号:R979.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)10-2387-02
StudyontheSpermicidalandAntibacterialEffectofEthanolExtractofRhynchosiavolu-
bilisLourrootsinvitro
WANGJian-gang1 , XIONGCheng-liang1＊ ,WANGXue-ting2 , GUOXian-feng2 ,LIYan2 ,WANGJuan-rui2
(1.FamilyPlanningResearchInstitute, TongjiMedicalColege, HuazhongUniversityofScienceandTechnolo-
gy, Wuhan430030, China;2.DepartmentofPharmacology, MedicalColege, HenanUniversityofScienceand
Technology, Luoyang471003, China)
Abstract:ObjectiveTostudythespermicidalandantibacterialefectofethanolextractofRhynchosiavolubilisLourroots.
MethodsEthanolextractofRhynchosiavolubilisLourrootswasappliedinvitroinspermicidaltestswith10mousespermsamples
and10 humanspermsamples.TheantibacterialeffectsofethanolextractofRhynchosiavolubilisLourrootsonstaphylococcusau-
reus, Pseudomonasaeruginosa, Escherichiacoli, andpneumobacilluswereobserved.ResultsThelowestspermicidalconcentra-
tionofethanolextractofRhynchosiavolubilisLourrootsonmouseandhumanspermwere50mg/mland100mg/ml, respectively.
Thelowestinhibitingconcentration(MIC, tubetestingmethod)ofethanolextractofRhynchosiavolubilisLourrootsonstaphylococ-
cusaureus, Pseudomonasaeruginosa, Escherichiacoli, andpneumobaciluswere1.0, 1.0, 4.0, 4.0mg/ml, respectively.Conclu-
sionTheethanolextractofRhynchosiavolubilisLourrootshasspermicidalandantibacterialefect.
Keywords:EthanolextractofRhynchosiavolubilisLourroots;　Spermicideinvitro;　Antibacterialefect
　　鹿藿 RhynchosiavolubilisLour又称鹿豆 、野绿豆 、老鼠眼等。
其功能消积散结 , 消肿止痛 , 舒筋活络。用于小儿疳积 , 牙痛 ,神
经性头痛 ,颈淋巴结结核 , 风湿关节炎 , 腰肌劳损;外用治痈疖肿
毒 , 蛇咬伤等 [ 1] 。徐惠敏 、丁钉生等 [ 2, 3]用鹿藿根水煎液经过初
步研究 , 发现有体外杀精及抗菌作用。本实验进一步探讨鹿藿乙
醇提取物的抗菌及体外杀精作用 ,为其作为阴道杀精剂提供实验
依据。
1　材料
1.1　药物 鹿藿根购于湖北京山县 , 由中科院武汉植物所专家
鉴定。 6.2 kg鹿藿根晾干 , 粉碎 , 70%乙醇溶液浸泡 7 d, 乙醇提
取液用旋转蒸发仪进行减压蒸馏(T:50℃, P:-0.09 MPa)制得
乙醇浸膏 0.48 kg,冷藏备用。壬苯醇醚(NP-9),北京中惠制药
厂生产 , 批号:000505。
1.2　精液来源
1.2.1　动物精液 KM雄性小鼠 10只 ,体重(26.3±4.5)g, 由
华中科技大学同济医学院动物实验中心提供(SCXK鄂 2004 -
0007)。颈椎脱臼处死 ,取附睾置无菌小烧杯中 , 生理盐水清洗 ,
加入精子营养液(Tyrode),剪开附睾尾部 , 37℃孵育 10 min,检查
精子活动并计数 ,用精子营养液稀释到精子数为 107 /ml,置 37℃
水浴中待用。
1.2.2　人精液 年龄 30 ～ 40岁健康男性自愿献精者 10例 , 禁欲
3 ～ 5 d,手淫法取精液。 37℃液化 30 min, 精子计数不低于 50×
106 /ml, 活率 >70%。
1.3　菌株 标准菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、大肠埃希
菌(ATCC8099)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)购于中国微生物菌
种保藏管理委员会普通微生物中心;肺炎克雷伯菌(ATCC13883)
购于卫生部临床检验中心(北京万泰生物药业有限公司)。分离
菌株由河南科技大学第一附属医院检验科细菌室分离并鉴定。
金黄色葡萄球菌(对阿奇霉素 、氨灭菌 、环丙沙星 、庆大霉素 、左
氧氟沙星 、四环素 、氨苄西林 、氯霉素 、苯唑西林 、复方新诺明 、青
霉素 、头孢噻肟 、头孢吡肟耐药)、铜绿假单胞菌(对头孢曲松 、头
孢吡肟 、头孢噻肟 、头孢他啶 、头孢西丁 、氨曲南 、氯霉素 、左氧氟
沙星 、庆大霉素 、氨苄青霉素 、阿米卡星 、复方新诺明耐药)、大肠
埃希菌(阿奇霉素 、氨灭菌 、四环素 、氨苄西林 、氯霉素 、苯唑西
林 、复方新诺明 、青霉素 、头孢噻肟 、头孢吡肟耐药)。
2　方法
2.1　体外杀精实验 根据国际计划生育联盟标准方法略加改
进 [ 4] 。将准备好的精液 50 μl加入鹿藿根乙醇提取物不同浓度
的药液中 ,即刻混匀。迅速取一滴于载玻片上 , 室温(28±2)℃
下 , 连续观察 5个高倍镜视野 ,以全部精子失活为终点 ,测出药物
2min内杀精子情况。每次均采用不同浓度的壬苯醇醚溶液
(0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.03125 mg/ml)及生理盐水为对照 ,
每份标本重复测 3次。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.10 时珍国医国药 2007年第 18卷第 10期
2.2 　体外抑菌实验
2.2.1　菌液的制备 取形态相同的菌落数个接种于培养管内 ,
36℃, 4 ～ 6h后纠正浓度 ,使其混浊度相当于 0.5麦氏比浊管 ,约
为 1.5×108CFU/ml,立即用于实验。
2.2.2　最低抑菌浓度(MIC)测定 方法参照《全国临床检验操作
规程》关于最低抑菌浓度的检测方法用胨水或琼脂将药物配成
所需浓度 [ 5] 。琼脂平皿稀释法:选用直径为 10 cm的玻璃平皿 ,
按表 1添加含鹿藿根乙醇提取物的培养基。用微量加样器接种 ,
每个平皿接种 7种菌 , 每个接种点接种 20 μl稀释好的菌液 , 形
成一个直径为 8 ～ 10 μm的小液滴 ,最终接种菌量约每个接种点
含 107个菌。放置 10 min,待菌液稍干后倒置放入 37℃恒温培养
箱培养 24 h,观察结果。以培养皿上菌落生长完全被抑制的最低
药物浓度为鹿藿根乙醇提取物对该菌的 MIC。
表 1　琼脂稀释法配方
管号 培养基V/ml
鹿藿乙醇
提取物药液 V/ml
鹿藿乙醇提
取物含量 m/mg
含药浓度
C/mg· ml-1
1 13 2 2 000 133.3
2 13 2 1 000 66.7
3 13 2 500 33.3
4 13 2 250 16.7
5 13 2 125 8.3
6 13 2 62.5 4.2
7 13 2 31.25 2.1
8 13 2 15.6 1.0
9 13 2 7.8 0.5
10 13 2 3.9 0.25
11 15 0 0 0
试管法:每组排列无菌试管 13只 , 于第 2 ～ 12号管内放相应
培养基 2ml, 取制备好的药液分别加入 2 ml1号 2号管 ,第 2管混
匀后取 2 ml加入第 3号管 , 如此依次对倍稀释至第 10号管 , 吸
出 2 ml弃去。这样第 1 ～ 10号管内含药液浓度倍量稀释 , 浓度
分别为每毫升含药 64, 32 , 16 , 8, 6, 4, 2, 1, 0.5, 0.25 mg,第 11和
第 12号管内为无菌培养基 , 第 13号管内加入 1∶25的 84消毒
液 2 ml,作为阳性对照。除第 11号管外 , 每管内接种菌液 100
μl, 37℃恒温摇床震荡 24 h观察结果。肉眼未见细菌生长的最
低药物浓度为鹿藿乙醇提取物对该菌的 MIC。
3　结果
3.1　体外杀精实验 鹿藿乙醇提取物对小鼠和人精子的杀灭作
用见表 2。
表 2　鹿藿乙醇提取物对小鼠和人精子的杀灭作用
药物 浓度 C/mg· ml-1 小鼠 人
鹿藿乙醇提取物 200.0 - -
100.0 - -
50.0 - ±
25.0 ± +
12.5 + +
壬苯醇醚 0.5 - -
(NP-9) 0.25 - -
0.125 - ±
0.062 5 ± +
0.031 25 + +
生理盐水 + +
　　-:精子完全固定不动 ±:<10%精子颤动 +:活动精子;n=10
3.2　体外抑菌实验 鹿藿乙醇提取物对常见致病菌的最低抑菌
浓度见表 3。
表 3　鹿藿乙醇提取物对常见致病菌的最低抑菌浓度
mg· ml-1
菌种 琼脂平板 试管法
标准菌株　　　
金黄色葡萄球菌 2.1 1.0
大肠埃希菌　　 2.1 4.0
铜绿假单胞菌　 1.0 1.0
肺炎克雷伯菌　 2.1 4.0
临床分离菌株　
金黄色葡萄球菌 2.1 0.5
大肠埃希菌　　 16.7 8.0
铜绿假单胞菌　 2.1 2.0
4　讨论
从实验结果得知 ,鹿藿乙醇提取物无论对小鼠还是对人均有
杀精作用 ,不仅如此 , 鹿藿乙醇提取物还有抗菌及抗支原体 、衣原
体的作用 [ 6] , 尤其对金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌的作用较
强。虽然对大肠杆菌作用较弱 ,但在杀精时的用量也可显示很强
的抗菌作用。阴道杀精剂具有使用简便 、安全 、有效 ,在计划生育
用药研究方面占据重要位置。 壬苯醇醚是一个作用很强的典型
阴道杀精剂。但是 ,近年来对壬苯醇醚的对照研究已经揭示 , 此
药不仅不能预防主要性传染疾病和艾滋病毒感染 ,且长期使用反
而还会提高经由性交所致传染疾病的风险 [ 7 ～ 9] 。 目前性传播疾
病发病率不断上升 ,有关性传播疾病发病率预防措施的研究越来
越引起各国学者的关注 [ 10 , 11] 。如果阴道杀精剂同时具有抗微生
物及某些性传播疾病的作用又起到杀精抗菌作用应该有比较广
泛的市场。鹿藿杀精又抗菌的特性 ,为其应用奠定了基础。鹿藿
醇提物所含成分较多 ,有必要对其进一步的分离及对杀精抗菌作
用进行进一步研究。
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