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HPLC测定川西高原产狭叶红景天中的红景天苷



全 文 :华西药学杂志
W C J·P S 2016,31(5)∶531 ~ 532
基金项目:四川省科学技术厅应用基础研究计划项目(2016JY0247);四川省教育厅科研重点项目(16ZA0006)
作者简介:李涛,男,副教授,从事天然药物化学成分和质量评价的研究工作。Email:scdxlitao@ scu. edu. cn
HPLC测定川西高原产狭叶红景天中的红景天苷
李 涛,曹 丹,汪元娇
(四川大学华西药学院,四川 成都 610041)
摘要:目的 采用 HPLC法测定川西高原产藏药狭叶红景天中红景天苷的含量。方法 采用 Shim - pack CLC - ODS色谱柱
(150 mm × 4. 6 mm,5 μm),流动相为甲醇 -水(14∶86),检测波长 275 nm,柱温 30 ℃,流速 1. 0 mL·min -1。结果 红景天
苷 0. 05 ~ 5 μg与峰面积呈良好的线性关系(r2 = 0. 9994),平均回收率为 99. 20%,RSD = 1. 92%;狭叶红景天中红景天苷的平
均含量为 0. 409%。结论 所用方法简便可行,结果准确可靠,重复性好,可为狭叶红景天的质量控制和开发利用提供依据。
关键词:狭叶红景天;红景天属;藏药;红景天苷;高效液相色谱法;川西高原;质量标准
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 - 0103(2016)05 - 0531 - 02
DOI:10. 13375 / j. cnki. wcjps. 2016. 05. 029
Determination of salidroside in Rhodiola kirilowii from the western Sichuan plateau by HPLC
LI Tao,CAO Dan,WANG Yuanjiao
(West China School of Pharmacy,Sichuan University,Chengdu,Sichuan,610041 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of salidroside in Tibetan medicine Rhodiola kirilowii
from the western Sichuan plateau. METHODS The separation was performed on Shim - pack CLC - ODS(150 mm × 4. 6 mm,
5 μm)column with the mobile phase consisting of methanol - water(14∶86)at the flow rate of 1. 0 mL·min -1 . The detection wave-
length was 275 nm,and the column temperature was 30 ℃ . RESULTS The linear range of salidroside was 0. 05 - 5 μg(r2 =
0. 9994),and the average recovery rate was 99. 20% with the RSD of 1. 92% . The average content of salidroside from Rhodiola kirilowii
was 0. 409% . CONCLUSION The method is simple,feasible,accurate,reliable and reproducible,and it provides a theoretical basis
for the quality control,the development and utilization of Rhodiola kirilowii from the western Sichuan plateau.
Key words:Rhodiola kirilowii;Rhodiola;Tibetan medicine;Salidroside;HPLC;Western Sichuan plateau;Quality standard
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 - 0103(2016)05 - 0531 - 02
狭叶红景天为景天科红景天属 Rhodiola药用植
物,藏文译音称嘎都尔[1],是四川省藏医临床的常
用品种,主要分布于川西高原各地及边缘地带,生于
海拔 1. 8 ~ 4. 7 km的高山草甸或石质坡地上[2]。狭
叶红景天能清热退烧,解毒,防瘟;可治疗肺炎、发
烧、腹泻、四肢肿胀等[1],具有抗缺氧、抗疲劳、抗衰
老、降血糖等作用[3 - 4]。其中,红景天苷与狭叶红景
天的功效密切相关,是红景天属药用植物的主要活
性成分,可作为狭叶红景天质量评价的指标[5]。目
前尚缺乏对川西高原产狭叶红景天的质量评价方
法,药材质量的差异较大,直接影响了藏医临床用药
的安全性和有效性。现采用 HPLC法测定了 8 批川
西高原产狭叶红景天中的红景天苷,可为狭叶红景
天药材质量标准的制定提供科学依据。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
LC -10AT型高效液相色谱仪(日本岛津)。红
景天苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:
1110818 - 201206);甲醇为色谱纯;水为超纯水;其
余试剂为分析纯;8 批狭叶红景天对口药材采自四
川省川西高原地区,经鉴定为景天科狭叶红景天
Rhodiola kirilowii(Regel)Maxim. 的干燥根及根茎。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件与系统适应性试验 采用
Shimadzu Shim - pack CLC - ODS色谱柱(150 mm ×
4. 6 mm,5 μm),流动相为甲醇 -水(14∶86),检测
波长 275 nm,柱温 30 ℃,流速 1. 0 mL·min -1,进样
量 10 μL。在上述色谱条件下,红景天苷对照品和
供试品溶液的色谱图见图 1,理论板数按红景天苷
峰计应≥2 × 103。
1. 2. 2 溶液制备方法的考察 精密称取样品细粉
约 0. 3 g,置具塞锥形瓶中,分别加入 10 mL 50%甲
醇、80%甲醇和甲醇,密塞,称定重量,超声 30 min,
放冷,再称定重量,用相应溶剂补足减失的重量,摇
匀,过滤,取续滤液进样,计算红景天苷的含量。结
0 5 10 15 0 5 10 15
A B
t/min
sa
lid
ro
sid
e
sa
lid
ro
sid
e
图 1 红景天苷对照品(A)和供试品(B)溶液的 HPLC图
Figure 1 HPLC chromatograms of the salidroside control solution
(A)and sample solution(B)
果表明:甲醇对样品中红景天苷的提取率较高,因
此,采用甲醇为提取溶剂。精密称取样品细粉约
0. 3 g,分别置圆底烧瓶和具塞锥形瓶中,加入甲醇
10 mL,密塞,称定重量,分别采用超声和热回流提
取 30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重
量,摇匀,过滤,取续滤液进样,计算红景天苷的含
量。结果表明:超声提取红景天苷的含量较高,因
此,采用超声法提取样品。精密称取样品细粉约
0. 3 g,置具塞锥形瓶中,分别加入甲醇 10 mL,密塞,
称定重量,分别超声 20、30、40 min,放冷,再称定重
量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液进
样,计算红景天苷的含量。结果表明:超声提取 30
min时,红景天苷的含量较高,因此,选择超声提取
30 min。综上,取狭叶红景天粉末约 0. 3 g,精密称
定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 10 mL,密塞,称
定重量,超声 30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足
减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液即得供试品溶液。
1. 2. 3 线性关系的考察 取红景天苷对照品适量,
精密称定,加甲醇溶解,得 0. 5 mg·mL -1对照品溶
液。精密量取对照品溶液 0. 1、1、2. 5、5、10 mL,分
别置 10 mL量瓶中,加甲醇定容,得线性溶液。分别
取上述线性溶液,在“1. 2. 1”项色谱条件下进样,记
录色谱图。以对照品的峰面积为纵坐标、浓度为横
坐标进行线性回归,得回归方程为:Y = 6 × 106X -
4. 7601 × 104(r2 = 0. 9994),红景天苷 0. 05 ~ 5 μg与
峰面积呈良好的线性关系。
1. 2. 4 精密度、重复性与稳定性试验 精密吸取同
一浓度对照品溶液,连续进样 6 次,记录色谱图。计
算得红景天苷峰面积的 RSD = 1. 17%(n = 6),表明
仪器的精密度良好。取同一批狭叶红景天药材样品
6 份,按“1. 2. 2”项方法制备供试品溶液,并按
“1. 2. 1”项色谱条件进样测定,计算得样品中红景
天苷的平均含量为 0. 501%,RSD = 1. 45%(n = 6),
表明方法的重复性良好。取同一份供试品溶液,分
别在 0、2、4、6、8、12 h时进样测定,计算得红景天苷
峰面积的 RSD = 1. 23%(n = 6),表明供试品溶液在
12 h内稳定。
1. 2. 5 加样回收率试验 取同一批已知含量的狭
叶红景天样品粉末(红景天苷含量为 0. 248%)约
0. 15 g,共 9 份,精密称定,分别按已知含量的 80%、
100%、120%水平加入红景天苷对照品,按“1. 2. 2”
项方法制备供试品溶液,进样测定,记录色谱图。计
算得红景天苷的平均回收率为 99. 20%,RSD =
1. 92%(n = 9),表明方法的回收率良好。
1. 2. 6 含量的测定 分别取狭叶红景天样品粉末
各约 0. 3 g,精密称定,按“1. 2. 2”项方法制备供试
品溶液,并按“1. 2. 1”项色谱条件进样测定,以外标
一点法计算样品中红景天苷的含量。8 批狭叶红景
天样品中红景天苷的含量分别为 2. 48‰、0. 69‰、
1. 34‰、0. 22‰、7. 59‰、8. 06‰、7. 32‰、5. 01‰,平
均为 4. 09‰。
2 讨论
四川省川西高原地区产的 8 批藏药狭叶红景天
药材样品中红景天苷的含量为 0. 22‰ ~ 8. 06‰,表
明川西高原地区产狭叶红景天中红景天苷的含量差
异较大,直接影响了藏医临床上用药的安全有效。
文中所用方法简便可行,结果准确可靠,重复性好,
可为狭叶红景天的质量控制和开发利用提供方法。
参考文献:
[1] 中国科学院西北高原生物研究所.藏药志[M].青海:青海人
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[2] 李涛,伍龙,朱小迪,等. 川西高原地区红景天属药用植物种
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[4] 任延明,袁明,文绍敦.狭叶红景天提取物抗衰老的实验研究
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[5] Li T,He X. Quantitative analysis of salidroside and p - tyrosol in
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transform near - infrared spectroscopy[J]. Chem Pharm Bull,
2016,64(4) :289 - 296.
收稿日期:2015 - 03 - 14
235 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷