全 文 ：SAaB inhibits Aβ25-35-induced the release of TNF-α in cultured macrophages and the signaling mechanism
Liu Zhuo1，Jin Ying1，Sui Haijuan1，Yan Enzhi1，Liu Wanzhu2
(1 Department of Pharmacology;2 Department of function Laboratory，Liaoning Medical University，Jinzhou 121001)
Objective :To investigate the signaling mechanism of PI3K /mTOR/p70S6K of Sapoin from Anemarrhena asphdeloids Bge (SAaB)on
the release of tumor necrosis factor-α(TNF-α )induced by amyloid β-protein fragments 25-35 (A25-35)in cultured macrophages． Methods:
Cultured the mouse peritoneal macrophages were preincubated with SAaB (10，30 and 100 mol /L)or specific kinase inhibitors including RA-
PA(0． 05μmol /L )and LY294002(20 μmol /L) ，then stimulated with Aβ25-35(20 μmol /L)． After stimulation with Aβ25-35 for the indicated
time，total cellular extracts were prepared for Western blot analysis of p70S6K． The supernatants of macrophages were collected and analyzed
for TNF-α generation． Results:Aβ25-35 significantly induced increase in phospho-p70S6K protein expression without affecting total protein lev-
els and the production of TNF-α in cultured macrophages． RAPA，LY294002 and SAaB could distinctly inhibit the production of TNF-α and
the expression of phospho-p70S6K． In addition，inhibition of PI3K /mTOR/p70S6K pathway seemed to participate in the anti-inflammatory
effect of SAaB，particularly in cells stimulated with Aβ25-35 ． Conclusion:SAaB could significantly inhibit the over-release of TNF-α induced
by Aβ25-35 in cultured macrophages，which the suppression of PI3K /mTOR/p70S6K signal transduction pathway took part in．
Key words Sapoin from Anemarrhena asphdeloids Bge (SAaB) ;macrophage;Aβ25-35;TNF-α;PI3K;RAPA;p70S6K
相思子蛋白 P2 对 B16 黑色素瘤的抑制作用及机制研究*
秦丹丹1，2，高南南2＊＊，季宇彬1
(1哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨 150076;
2中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193)
摘 要 目的:研究相思子蛋白 P2 对小鼠黑色素瘤 B16 生长的抑制作用及作用机制。方法:MTT 法观察相思子蛋白 P2 对
B16 细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪检测对 B16 细胞周期和细胞凋亡的影响，JC-1 染色法检测相思子蛋白 P2 对 B16 细胞线粒体
膜电位的影响;相思子蛋白 P2 50、75、100 μg /kg连续灌胃给药 10 天，观察对小鼠黑色素瘤 B16 移植性肿瘤生长的抑制作用。结果:
相思子蛋白 P2 对 B16 细胞具有显著的生长抑制作用，IC50值为 4． 6 × 10
-3 μg /ml，浓度为 1 μg /ml时抑制率可达 95． 45%;流式细胞
仪分析显示，相思子蛋白 P2 主要将细胞周期滞留在 S期，阻断向 G2 /M期发展，从而抑制肿瘤细胞增殖。相思子蛋白 P2 可明显诱
导 B16 细胞凋亡。荧光显微镜检测结果显示相思子蛋白 P2 可显著降低 B16 细胞线粒体膜电位。相思子蛋白 P2 口服给药对小鼠
B16 移植性肿瘤生长有抑制作用，100 μg /kg抑瘤率达 53． 75%，有明显剂量-效应依赖关系，且对胸腺和脾脏质量指数的影响较环磷
酰胺小。结论:相思子蛋白 P2 于体内外均可显著抑制 B16 细胞的生长，此作用与阻止肿瘤细胞增殖周期，降低线粒体膜电位，诱导
细胞凋亡有关。
关键词 相思子蛋白 P2;小鼠黑色素瘤 B16 细胞;细胞周期;细胞凋亡;线粒体膜电位
黑色素瘤是恶性程度很高的皮肤癌，可循血液和淋巴转移
至全身各器官粘膜，临床缺乏有效治疗手段，因此需寻求更为
有效的治疗药物或治疗途径。相思子蛋白 P2 是从豆科藤本植
物相思子(Abrus precatorius L．)的种子中分离得到的一种新的
单体糖蛋白，是一种新型抗肿瘤药物。国外对类似物如相思子
毒蛋白 a(Abrin-a)的抗恶性肿瘤作用进行过研究，证明 Abrin-a
对小鼠黑色素瘤、Lewis肺癌、艾氏腹水癌(EAC)及人白血病杀
伤作用明显［1，2］。但对相思子蛋白 P2 的抗肿瘤作用及作用机
制未见研究报道。本实验主要观察相思子蛋白 P2 对体外培养
B16黑色素瘤细胞及动物接种B16细胞的抗肿瘤作用，并对其
作用机制进行探讨，为相思子蛋白 P2 抗黑色素瘤的药理作用
提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 受试药物 本研究所用相思子的种子采集于云南省昆明
市，经中国医学科学院药用植物研究所资源研究与保护中心郭
宝林教授鉴定为豆科植物相思子(Abrus precatorius L．)的干燥
种子。相思子种子粉碎后经 Sepharose4B亲和层析柱、半乳糖梯
度洗脱、浓缩、脱盐，分离得到相思子蛋白 P2，分子量 60923，等
22 中药药理与临床 2011;27(6)
* ［基金项目］科技部重大新药创制科技重大专项-创新药物研究开发侯选药物研究———一类抗恶性肿瘤新药相思子蛋白 P2 的研究
(2009ZX09103-384) ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2011.06.008
电点 6． 2，含糖量 3． 3%，HPLC 检测纯度为 99%。由中国人民
解放军防化研究院李丽琴教授制备和提供。使用时取所需量
用 RPMI 1640 培养基配制用于体外实验，用蒸馏水溶解配制用
于体内实验。注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司产
品。
1． 2 瘤株与动物 小鼠黑色素瘤 B16 细胞株购自中国医学科
学院肿瘤医院。C57 BL /6J 小鼠，♂，18 ～ 22 g，由中国医学科学
院实验动物中心提供，合格证号:SCXK(京)2009-0007。
1． 3 试剂 RPMI1640 培养基(美国 HyClone 公司) ;胎牛血
清(杭州四季青生物工程材料有限责任公司) ;细胞凋亡 Annex-
in V /PI、线粒体膜电位 JC-1 试剂盒(Invitrogen 公司) ;周期 PI
试剂盒(BD公司)。
1． 4 仪器 BIOTEK ELX800 全自动酶标仪(美国 Bio-Tek 公
司) ;FACS Calibur 型流式细胞仪 (美国 BD 公司) ;Leica
DM4000B型倒置荧光显微镜(德国 Leica公司)。
1． 5 方法 小鼠黑色素瘤 B16 细胞于含体积分数为 10%的胎
牛血清、100 U /ml青霉素、100 μg /ml链霉素的 RPMI 1640 培养
基中，37 ℃、5% CO2 及饱和湿度的培养箱中培养，传代时先倾
去培养液，然后用 0． 25%胰酶消化 3 ～ 5 min，用吸管轻轻吹打
贴壁细胞，分瓶培养。
1． 5． 1 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞增殖的抑制作用 按文
献［3］用 MTT法进行实验，取对数生长期细胞，调整细胞悬液浓
度为 2． 5 × 104 /ml，每孔 200μl，接种于 96 孔培养板中，设 6 个复
孔。培养 24 h后给药组加入 200μl 含不同浓度(1 × 10 －5，1 ×
10 －4，1 × 10 －3，1 × 10 －2，1 × 10 －1，1μg /ml)相思子蛋白 P2 的
RPMI 1640 培养基，空白组和对照组加入等体积培养基。培养
48 h后，加入 MTT 溶液，继续培养 4 h 后，加入二甲基亚砜，颗
粒完全溶解后用酶标仪在 570 nm处测定每孔的吸光度值(A) ，
实验重复 3 次。细胞生长抑制率(%)=(1 － A 受试组 /A 对照
组)× 100%。采用改良寇式法计算 IC50值。
1． 5． 2 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞周期的影响(PI 单染法［4］)
取对数生长期的 B16 细胞，调整细胞浓度为 2 × 105 /ml，每孔
1 ml，接种于 6 孔板中。培养 24 h后给药组加入 2 ml含不同浓
度(1 × 10-3、1 × 10-2、1 × 10-1μg /ml)相思子蛋白 P2 的 RPMI1640
培养基，对照孔加入等体积培养基。培养 48 h 后离心收集细
胞，加入 PI 溶液，4 ℃避光染色 30 min，用流式细胞仪检测。
ModFit LT软件分析各组细胞周期变化。
1． 5． 3 检测相思子蛋白 P2 对 B16 细胞凋亡的作用(Annexin V
/PI双染法［5］) 按测定细胞周期所用方法处理细胞。离心收
集细胞，用 4 ℃预冷 PBS洗涤细胞 2 次，取 250 μl 结合缓冲液
重新悬浮细胞，并使其浓度为 1 × 106 /ml;取 100 μl细胞悬液于
5 ml流式管中，加入 5 μl Annexin V /FITC 和 2 μl 的碘化丙啶
(PI)溶液。混匀后于室温避光孵育 15 min，在反应管中加 400
μl结合缓冲液，用流式细胞仪检测，实验重复 3 次。CELL
QUEST分析软件分析细胞凋亡率。
1． 5． 4 相思子毒素 P2 对 B16 细胞线粒体膜电位的影响［6］
取对数生长期的 B16 细胞，调整细胞浓度为 5 × 104 /ml，每孔 1
ml，接种于 24 孔板中，培养 24 h后给药组加入 1 ml含不同浓度
(1 × 10-3、1 × 10-2、5 × 10-2、1 × 10-1 μg /ml)相思子蛋白 P2 的 RP-
MI1640 培养基，对照孔加入等体积培养基。培养 48 h后用 4 ℃
预冷 PBS洗涤细胞 1 次，加入 500 μl JC-1 溶液，放至培养箱中
孵育 30 min后，置荧光显微镜下观察拍照。
1． 5． 5 相思子蛋白 P2 对小鼠黑色素瘤 B16 移植性肿瘤生长的
抑制作用［7 ～ 9］ 取接种 B16 细胞 C57 BL /6J 小鼠，将其实体肿
块，剪成碎块，用玻璃匀浆器加生理盐水(1∶ 6)磨成匀浆，调肿
瘤细胞浓度为 2 × 106 /ml，以 0． 2 ml /只量接种于 C57BL /6J小鼠
右前肢腋部皮下。24 h后将动物随机分为对照组、阳性药环磷
酰胺组(30 mg /kg)、相思子蛋白 P2 低(50μg /kg)、中(75μg /
kg)、高(100μg /kg)剂量组，10 只 /组。给药组按剂量灌胃给药，
环磷酰胺腹腔注射给药，对照组灌胃等体积蒸馏水，连续给药
10天。末次给药 24 h后颈椎脱臼处死小鼠，剥离瘤块组织，剔
除瘤块周围脂肪及结缔组织，精确称重，同时取胸腺和脾脏称
重，计算抑瘤率、胸腺和脾脏质量指数。肿瘤生长抑制率 =(对
照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重 × 100%;胸
腺(脾脏)质量指数 =胸腺(脾脏)重量(mg)/体重(g)。
2 结果
2． 1 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞增殖的抑制作用 相思子蛋
白 P2 在 1 × 10-5 ～ 1 μg /ml浓度下作用 48 h，对 B16 细胞生长具
有抑制作用，且呈现浓度-效应依赖关系。IC50值为 4． 6 × 10
-3
μg /ml，最大抑制率达 95． 45%(表 1)。
表 1 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞的生长抑制作用(珋x ± s，n = 6)
浓度(μg /ml) 吸光度 A570 抑制率(%)
对照组 1． 103 ± 0． 107
1 × 10-5 1． 021 ± 0． 113 7． 416
1 × 10-4 0． 9691 ± 0． 101 12． 14
1 × 10-3 0． 8341 ± 0． 091* 24． 38
0． 01 0． 4693 ± 0． 045＊＊ 57． 45
0． 1 0． 1546 ± 0． 019＊＊ 85． 98
1 0． 0502 ± 0． 007＊＊ 95． 45
与对照组相比 * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01(下同)
2． 2 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞周期的影响 B16 细胞经不同
浓度相思子蛋白 P2 作用 48 h 后，结果表明，与对照组比较，细
胞周期发生明显改变，随药物浓度增加 G0 /G1、G2 /M期细胞比
例明显减少，S期细胞比例明显增加(图 1)。
图 1 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞周期的影响(珋x ± s，n = 6)
32中药药理与临床 2011;27(6)
组别 G0 /G1 期(%) S 期(%) G2 /M 期(%)
对照组 66． 31 ± 8． 96 26． 33 ± 2． 39 7． 36 ± 0． 87
1 × 10 － 3μg /ml 63． 06 ± 7． 02 30． 38 ± 3． 53 6． 56 ± 0． 35
1 × 10 － 2μg /ml 61． 04 ± 6． 11 36． 47 ± 2． 91＊＊ 2． 49 ± 0． 19＊＊
1 × 10 － 1μg /ml 57． 41 ± 4． 25 42． 54 ± 4． 12＊＊ 0． 05 ± 0． 003＊＊
2． 3 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞凋亡的影响 在流式细胞术
双参数图上，图中左上象限为 PI阳性，表示死细胞，右上象限为
Annexin V /PI双染阳性，表示晚期凋亡细胞，左下象限为 Annex-
in V /PI双染阴性，表示正常细胞，右下象限为 Annexin V 阳性，
表示早期凋亡细胞。细胞总凋亡率为右上象限与右下象限总
和。相思子蛋白 P2(1 × 10-3、1 × 10-2、5 × 10-2、1 × 10-1μg /ml)作
用于 B16 细胞 48 h 后，细胞总凋亡率分别为(9． 66 ± 1． 08)%、
(13． 27 ± 1． 71)%、(35． 00 ± 3． 11)%、(76． 89 ± 3． 79)%，随着
浓度的升高，凋亡率逐渐增加，呈现出明显的剂量-效应依赖关
系，见图 2。
图 2 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞凋亡的影响(珋x ± s，n = 6)
2． 4 相思子毒素 P2 对 B16 细胞线粒体膜电位的影响 JC-1
荧光强度的变化反映了线粒体膜电位的变化。当线粒体膜电
位水平较高时，JC-1 主要以聚合物形式存在，呈红色荧光;当线
粒体膜电位水平低时，主要以单体形式存在，呈绿色荧光，且该
细胞很可能处于细胞凋亡早期。结果显示，各加药组荧光强度
均发生改变，随着药物浓度增加，红色荧光逐渐减弱，绿色荧光
逐渐增强，表明相思子蛋白 P2 能引起 B16 细胞线粒体膜电位
降低，见图 3。
图 3 相思子蛋白 P2 对 B16 细胞线粒体膜电位的影响(20 ×)
A:对照组，B:0． 001 μg /ml，C:0． 01 μg /ml，D:0． 05 μg /ml，E:0． 1 μg /ml
2． 5 相思子蛋白 P2 对小鼠移植性黑色素瘤 B16 的生长抑制
作用 相思子蛋白 P2 以高、中、低剂量，连续灌胃给药 10 天，
对黑色素瘤 B16 的生长有明显抑制作用，并且具有剂量依赖
性。环磷酰胺也具有较强的抑瘤作用，但环磷酰胺在抑制肿瘤
生长的同时可明显降低小鼠胸腺、脾脏指数，对免疫功能有较
强的破坏作用。与环磷酰胺组比较，相思子蛋白 P2 各剂量组
对胸腺、脾脏指数影响较小，说明对免疫系统毒性作用较环磷
酰胺低，见表 2。
表 2 相思子蛋白 P2 对小鼠移植性黑色素瘤 B16 生长的抑制作用
及对免疫器官的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(mg /kg)
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
胸腺指数
(mg /g)
脾脏指数
(mg /g)
对照 1． 57 ± 0． 48 2． 03 ± 0． 03 5． 80 ± 0． 09
环磷酰胺 30 0． 09 ± 0． 03 ＊＊ 94． 29 0． 43 ± 0． 008＊＊ 1． 96 ± 0． 031＊＊
相思子蛋白 P2 0． 050 1． 22 ± 0． 12* 22． 13 2． 03 ± 0． 028 6． 25 ± 0． 11
相思子蛋白 P2 0． 075 0． 93 ± 0． 13 ＊＊ 40． 45 1． 90 ± 0． 031 6． 15 ± 0． 12
相思子蛋白 P2 0． 100 0． 72 ± 0． 31 ＊＊ 53． 75 1． 90 ± 0． 025 5． 77 ± 0． 10
42 中药药理与临床 2011;27(6)
3 讨论
相思子蛋白 P2 对 B16 细胞有显著的杀伤作用，作用 48 h
IC50值为 4． 6 × 10
-3 μg /ml，浓度为 1 μg /ml 时抑制率可达 95．
45%，显示出很强的抗肿瘤作用。体内实验结果表明，相思子蛋
白 P2 对小鼠移植性 B16 黑色素瘤有明显抑制生长作用，100
μg /kg剂量抑瘤率为 51． 9%，与环磷酰胺比较对荷瘤小鼠免疫
器官的损伤较小。
细胞增殖是细胞生命活动的基本表现之一，是一种受到严
格调控的精确有序过程，增殖周期可分为 DNA 合成前期(G1
期)、DNA 合成期(S期)、DNA 合成后期(G2 期)及有丝分裂期
(M期)4 期。当细胞的 DNA 被烷基化、断裂或复制受阻时，细
胞周期出现停滞，不能及时进入下一个时相。肿瘤细胞则表现
为不受节制地无限繁殖。通过作用于周期的某一环节，使细胞
增殖周期受阻，从而抑制肿瘤细胞的生长［10］是抗肿瘤药物作用
途径之一。本实验采用流式细胞仪分析发现相思子蛋白 P2 可
改变 B16 细胞周期的分布，与对照组相比，G0 /G1、G2 /M 期细
胞的比例明显减低，S期细胞所占比例增高，这表明相思子蛋白
P2可阻断 B16 细胞由 S期向 G2 /M期的进程，造成 S期细胞堆
积，S期时相延长到一定时间后，细胞丧失增殖能力，从而使肿
瘤细胞增殖受到明显影响。
肿瘤的发生不仅与肿瘤细胞增殖加快有关，也与肿瘤细胞
死亡受抑制密切相关。细胞凋亡是由基因编码调控的细胞主
动自杀过程，又称程序性细胞死亡，既是生物体维持自身稳定
和平衡的一个重要机制，也是消除异常增殖细胞的理想途径，
细胞凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上占重要地位［11，12］，
随着对凋亡的深人认识，人们发现肿瘤细胞凋亡抑制是肿瘤形
成的一个共同的重要原因。因此，诱导肿瘤细胞凋亡是一条有
效的肿瘤治疗途径。流式细胞仪检测结果显示，相思子蛋白 P2
在 1 × 10-1 μg /ml 浓度下诱导 B16 细胞凋亡率为(76． 89 ± 3．
79)%，明显高于对照组的自然凋亡率(2． 42 ± 0． 17)%，且具有
一定的剂量依赖性，因此认为相思子蛋白 P2 具有极强的诱导
B16 细胞凋亡的作用。
线粒体是细胞内 ATP的主要生产中心，线粒体膜电位是由
于线粒体内膜两侧质子及其他离子不平衡而形成的，是保持线
粒体功能所必需。线粒体膜电位的维持意味着线粒体膜具有
正常的转运功能，细胞凋亡过程中线粒体膜的去极化是最早发
生的重要事件之一［13，14］，一旦膜电位耗散，内膜上的磷脂被氧
化，细胞将进入不可逆的凋亡过程。因此，检测线粒体膜电位的
变化对于探讨各种细胞凋亡机制是非常必要的。以往研究线
粒体膜电位的手段主要是应用流式细胞仪对线粒体膜电位进
行测量［15］，缺少形态学的直观证据。本试验将活细胞用 JC-1
染色后通过荧光显微镜直接观察荧光颜色的转变来分析线粒
体膜电位的变化，将检测手段提高到活细胞观察水平，所获结
果更加科学客观。研究结果表明，相思子蛋白 P2 可引起 B16
细胞线粒体膜电位明显下降，说明干扰线粒体膜电位是相思子
蛋白 P2 诱发细胞凋亡的主要机制之一。其如何影响线粒体膜
电位下降的深入机制有待进一步研究。
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The inhibition of abrin P2 to B16 melanoma and its mechanism
Qin Dandan1，2，Gao Nannan2，Ji Yubin1
(1 Life and Environment Science Research Center，Harbin University of Commerce，Harbin 150076;
2 Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union Medical College，Beijing 100193)
Objective:To investigate the effects of abrin P2 on the inhibition of the proliferation of B16 melanoma cells，and to explore its mecha-
nism．Methods In vitro:The effects of abrin P2 on B16 melanoma cells proliferation were evaluated by MTT assay． Flow cytometry analysis
52中药药理与临床 2011;27(6)
was applied to detect apoptosis，cell cycle distribution． JC-1 staining method was used to detect the effects of abrin P2 on the mitochondrial
membrane potential of B16 melanoma cells． In vivo:Intragastrically administered abrin P2 (50，75，100 μg /kg)to C57BL /6J mice for succes-
sive 10 days，B16 tumors xenografted in mice were used to evaluate the anti-tumor effects of abrin P2． Results:Cell proliferation was inhibited
in B16 cells treated with abrin P2，and the value of IC50 was 4． 6 × 10
-3 μg /ml after 48 h． The inhibitory rate reached 95． 45% when the con-
centration was 1μg /ml． Flow cytometry analysis showed，abrin P2 arrested the cell cycle at S phase and blocked cell grown to G2 /M phase to
inhibit tumor cell proliferation． Abrin P2 can significantly induced B16 cells apoptosis which showed a clear dose-dependent manner． The flu-
orescence microscope detection results showed that abrin P2 significantly reduced the mitochondrial membrane potential of B16 cells． In addi-
tion，the anti-tumor effects of abrin P2 were further confirmed by inhibition growth of B16 tumors xenografted in mice，with a tumor inhibition
rate of 53． 75% at the dose of 100 μg /kg． And the effects on thymus index and spleen index were lower compared to the cyclophosphamide
group． Conclusions :Abrin P2 can inhibit the proliferation of B16 melanoma cells in both vitro and vivo，and the effects may be related with
the reduction of mitochondrial membrane potentia，the change of cell cycle distribution (S phase arrest)and the induction of cell apoptosis．
Key words 相思子蛋白 P2(abrin P2) ;B16 melanoma cells;cell cycle;cell apoptosis;mitochondrial membrane potentia
叶黄素对二甲基甲酰胺所致小鼠急性肝损伤的保护作用
刘淑梅，刘跃新，张慧珠* ，勾向博，白 静，张 晶，温少红
(河北联合大学基础医学院，唐山 063000)
摘 要 目的:用生化及病理学方法研究叶黄素对二甲基甲酰胺(DMF)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将 48 只小
鼠随机分为 4 组，分别为对照组、DMF模型组、20mg /kg及 40mg /kg叶黄素处理组。小鼠连续灌胃叶黄素 5 天，对照组和 DMF模型
组给予等体积玉米油。灌胃叶黄素 3 天后，除对照组腹腔注射生理盐水，其余三组均一次性腹腔注射 1． 5g /kg DMF。DMF染毒 48h
后，所有动物内眦取血，处死后剖取肝脏，检测其 AST、ALT等指标。结果:DMF模型组小鼠血清 ALT和 AST活性显著升高，肝脏组
织匀浆中MDA含量明显增加，SOD活性升高。叶黄素可降低血清 AST及 ALT活性及肝组织 SOD活性、MDA水平，改善肝脏损伤小
鼠病理组织学变化。结论:叶黄素通过抗氧化作用对 DMF所致肝脏毒性具有一定保护作用。
关键词 叶黄素;二甲基甲酰胺;肝毒性;抗氧化剂
二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamide，DMF)是一种性能
优良的有机溶剂，可用于纤维、皮革、染料及制药等工业生产
中［1］。随着现代工业的发展，DMF 使用量逐年增加，DMF 中毒
事故也屡见不鲜。在生产环境中该毒物可经呼吸道、皮肤及消
化道吸收，侵入机体后肝损害最明显［2］，随剂量的增加和染毒
时间的延长，晚期细胞凋亡和坏死数目增加，可导致急性中毒
及一系列慢性病的发生。因此，开发能够拮抗 DMF所致肝脏损
伤的药物显得尤为重要。
叶黄素(lutein)是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果与某些
藻类生物中的天然色素，是一种重要的类胡萝卜素。叶黄素具
有多种生物学功能，其抗氧化性能可以抵御游离基在人体内的
细胞与器官损伤，已有的研究证明，叶黄素通过抗氧化作用，对
化学性肝损伤也具有一定保护作用［3，4］。本研究旨在探讨叶黄
素对 DMF所致急性肝损伤的防治作用，为其进一步的开发研究
奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 叶黄素，药用级，黄色粉末，叶黄素含量为 88．
6%，批号 20100503，北京禹光生物科技研究所产品，临用前用
玉米油溶解，按叶黄素含量折算，配制相当于纯叶黄素浓度为
10g /L、20g /L玉米油溶液，低温避光保存。
1． 2 动物 昆明种雄性小鼠，体重 20 ～ 22g，购于北京维通利
华实验动物技术有限公司(SPF 级) ，许可证编号:SCXK(京)
2006-0009，质量合格证编号:0140738。
1． 3 试剂 甲基甲酰胺(分析纯) ，天津市北方天医化学试
剂厂产品，批号 20100523，临用前用生理盐水稀释成浓度为
150mg /ml溶液;考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒、丙二醛(MDA)试
剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，均购于南京建成生物工程
研究所，批号 20101228。
1． 4 仪器 CHD型光学显微镜(日本，Olympus) ;702 型全自
动生化分析仪(日本，Hitachi) ;SpectraMax M5 型酶标仪(美国，
Molecular Devic) ;图像采集及图像分析系统(美国，Bio-Rad)。
1． 5 方法 实验小鼠适应性喂养一周后将小鼠 48 只随机分
成 4 组，设正常对照组、模型组、20mg /kg 及 40mg /kg 叶黄素预
处理组，每组 12 只。对照组小鼠先连续灌服玉米油 3 天，然后
一次性注射与给药组等量的生理盐水，再灌服玉米油 2 天。模
型组小鼠连续灌服玉米油 3 天后，一次性腹腔注射 DMF 1． 5g /
kg，再灌服玉米油 2 天。叶黄素预处理组分别灌服不同浓度叶
黄素玉米油溶液 0． 2ml /10g(相当于每天叶黄素剂量 20mg /kg
62 中药药理与临床 2011;27(6)
* 通讯作者