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大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类和酸模素生物量的影响



全 文 :中 药 研 究
大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类
和酸模素生物量的影响
门敬菊1,2,姚文1,王振月2
(1.解放军第 210 医院,辽宁 大连 116031;2.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的: 研究两种大豆多肽即大豆多肽 2 号粉和 3 号粉对 1 年生毛脉酸模根中蒽醌类和酸模素生
物量的影响。方法: 将大豆多肽以叶面喷洒和根部灌注两种施加方法分别以高中低三种浓度施加于 1
年生毛脉酸模植株,两因素完全随机的实验设计,采用高效液相法测量其根中的蒽醌类成分含量。结果
与结论: 大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类成分和酸模素的含量没有显著性影响,而对其产量及根折干率
均有显著性影响。
关键词:大豆多肽; 毛脉酸模; 蒽醌;生物量
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2013)02 - 0006 - 04
Effect of Soybean Peptideon on Nepodin Biomass and Anthraquinones in the Root
of Rumex Gmelini Turcz
MEN Jing - ju1,2,YAO Wen1,WANG Zhen - yue2
(1. The No. 210 Hospital of the Chinese People’Liberation Army ,Dalian 116031,China;
2. Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China)
Abstract:Objective:To study the effects of soybean polypeptide on biomass,anthraquinones and musizin in
Rumex gmelini Turcz. Method:Soybean polypeptide No. 2 powder and No. 3 powder were confected into the
high,middle and low aqueous solution of density respectively,then were made experiments on one - year
Rumex gmelini Turcz. With roots poured and leaves sprayed randomly. HPLC method was applied to determi-
nate the contents of anthraquinones in R. gmelini. Result and Conclusion:The ratio of dry weight to freash
weight of root and content of anthraquinones in the Rumex gmelini T. were affected significiantly under fertili-
zing soybean polypeptide. But they had no significant effect on anthraquinones content in Rumex gmelini T.
Key words:Soybean polypeptide;Rumex gmelini Turcz;Anthraquinones;Biomass
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270156)
作者简介:门敬菊(1978 -) ,女,硕士研究生,药师,主要研究方向:中药
资源开发与生物技术。
通讯作者:姚文(1964 -) ,女,主任药师,主要研究方向:药物制剂。
收稿日期:2012 - 08 - 28
修回日期:2012 - 09 - 10
大豆多肽是指大豆蛋白质水解成具有 3 ~ 6 个氨
基酸的多肽[1]。大豆多肽的特点,它有很好的水溶
性、热稳定性、易消化吸收、抵抗原性、降低胆固醇和血
压、调节人体生理机能等[2]。其生物学活性为易消化
性和易吸收性、降低血清中胆固醇作用、低过敏性、降
血压作用、促进脂肪代谢作用[3]。大量的研究表明,
肽是人体代谢、吸收和利用蛋白质的最佳方式,因此大
豆多肽蛋白粉是人类生命活动、身体成长和康复不可
缺少的营养素。大豆多肽在其它领域也有应用,发酵
行业大豆多肽可为双歧杆菌、乳酸菌和霉菌的繁殖提
供有效氮源,促进酵母产气,是微生物发酵营养基质和
促进剂,已广泛应用于面包、酸奶、干酪、醋、酱油、味
精、赖氨酸等有机酸行业。日化行业中大豆多肽可广
泛应用于高档系列保健功能护肤品、化妆品中,并成为
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21 世纪护肤美容的新趋势。制药行业中大豆多肽可
作为细菌培养基,适用于包括真菌在内的极广泛的细
菌生长,目前国外已研制成多种抗 SARS 病毒的多肽
药物,中国科学院微生物研究所的科学家已确认多肽
物质对冠状病毒具有阻断作用,还可用于治疗癌症,
HIV病毒和免疫系统功能减退,对传统抗生素产生抗
体的感染以及疫苗等。农化行业中大豆多肽对植物生
根、生长具有促进作用,可应用于中草药、树木移植、无
土栽培、生态养殖等领域。本实验研究大豆多肽对毛
脉酸膜生长发育及其次生代谢的影响,并探讨大豆多
肽在药用植物中的应用价值。
毛脉酸模(Rumex gmelini Turcz)为蓼科(Polyo-
naceae)酸模属多年生宿根草本植物,广泛分布于黑龙
江省大小兴安岭及张广才岭等地区,是黑龙江省、吉林
长白山地区的重要药用资源植物,在民间以根入药,对
淋病、上呼吸道感染、癣病和疮毒有确切疗效[4]。毛
脉酸模根中的化学成分是二苯乙烯类、蒽醌类、酸模
素,因此,毛脉酸模作为一种新药材或原料药有相当重
要的生产和研究价值[5 - 7]。本文主要研究大豆多肽对
毛脉酸模根中蒽醌类成分和酸模素的含量、产量及生
物量的影响,为今后毛脉酸模的规范化种植提供了理
论依据。
1 仪器与材料
毛脉酸模样品采于黑龙江中医药大学药用植物
园;大黄酚苷(大黄酚 - 1 - O - β - D -葡萄糖苷)、大
黄素、大黄酚、大黄素甲醚(中国药品生物制品检定
所) ;酸模素(由课题成员从毛脉酸模植物中提取分离
得到) ;实验用大豆多肽(乐能公司)。
美国 Waters 高效液相色谱仪(Waters 2695 型泵,
2996 型二极管阵列检测器,Empower 色谱工作站) ;
Mettler电子天平 AE 240;ZK - 82B 型真空干燥箱(上
海市实验仪器总厂) ;高速万能粉碎机(天津市泰斯特
仪器有限公司,型号 FW80) ;甲醇(色谱纯,美国 DIK-
MA试剂公司) ;磷酸(分析纯,天津市天河化学试剂
厂)。
2 方法
2. 1 大豆多肽与植物生长调节剂的配制 大豆多肽
2 号粉(水分 6%,总蛋白质 40%,大豆蛋白肽 39%,氨
基酸 15%) ;大豆多肽 3 号粉(水分 5%,总蛋白质
45%,大豆蛋白肽 33%,氨基酸 17%)均用纯净水配成
0. 4%、0. 6%、0. 8%三个浓度,以叶面喷洒和根部灌注
施加给毛脉酸模。
2. 2 实验设计及样品采集与含量和产量的测量 采
用两因素(大豆多肽处理与处理时间)完全随机实验
设计,每个实验处理重复 3 次,设立空白对照,处理后
间隔 15 天随机采样 1 次,共采样 4 次。将称好的鲜根
阴干再放入干燥箱(50 ~ 60℃)恒温干燥至恒重,称
重。(大黄酚苷、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、酸模素
成分)含量 ×根干重 =(大黄酚苷、大黄酚、大黄素、大
黄素甲醚、酸模素)产量。
2. 3 色谱条件 Planetsil C18分析柱(5μm,200mm ×
4. 6mm) ,预 柱 Phenomenex ODS - C18 (4mm ×
3. 0mm) ;流动相为甲醇,0. 1%磷酸水;梯度洗脱条件:
流动相从 30%甲醇到 100%甲醇,分析时间为 50min;
流速 1ml /min;检测波长:蒽醌类为 254nm,酸模素为
225nm;柱温为 40℃;进样量:15μL。
2. 4 对照品溶液的制备 精密称取大黄酚苷、大黄
酚、大黄素、大黄素甲醚、酸模素对照品适量,分别精密
吸取标准溶液,溶于甲醇配制,浓度依次为 0. 15、
0. 194、0. 010 4、0. 104、0. 55mg /ml,注入高效液相色谱
仪,以进样量 X(μg)为横坐标,峰面积 Y 为纵坐标绘
制标准曲线,结果见图 1、表 1。
图 1 对照品的 HPLC图(254nm)
1 -大黄酚苷;2 -酸模素;3 -大黄素;4 -大黄酚;5 -大黄素甲醚
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表 1 样品线性关系
成分 回归方程 相关系数 线性范围(μg)
大黄酚苷 Y =3. 190 × 104 + 2. 205 × 106X 1. 000 0 0. 019 ~ 12. 600
大黄酚 Y =7. 012 × 103 + 3. 992 × 106X 1. 000 0 0. 012 ~ 5. 250
大黄素 Y =3. 000 × 106X - 61 957 0. 997 0 0. 022 ~ 0. 4217
大黄素甲醚 Y =7. 973 × 103 + 1. 715 × 106X 0. 999 9 0. 020 8 ~ 2. 08
酸模素 Y =4. 639 × 106X - 1. 318 × 10 4 0. 999 9 0. 013 ~ 11. 050
2. 5 供试品溶液的制备 毛脉酸模根部阴干后,粉碎
过 80 目筛,在 50℃干燥至恒重。每个样品精密称取
0. 2g,置索氏提取器内加 50%乙醇 70ml 提取 4h,滤
过,滤液置蒸发皿中蒸干。残渣用 10ml甲醇溶解并定
容至刻度,此溶液再过 0. 45μm的微孔滤膜,弃去初滤
液,取续滤液作为供试品溶液。
3 结果与分析
3. 1 大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类成分与酸模素
含量的影响
本文用 DPS软件对数据进行方差分析,结果见图
2 ~ 3,处理组与空白对照组相比较,大豆多肽 2 号粉及
3 号粉的叶面喷洒和根部灌注施加方式以及高中低三
种浓度对毛脉酸模根中蒽醌类成分与酸模素含量没有
显著性影响。因此,大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类
成分和酸模素含量没有影响。
3. 2 大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类成分与酸模素
产量的影响
由图 2 ~ 3 可知,大豆多肽 2 号粉及 3 号粉的叶面
喷洒和根部灌注施加方式以及高中低三种浓度对毛脉
酸模根中蒽醌类成分与酸模素产量均有显著性影响。
由图 2B和 3B可知,叶面喷洒处理组与空白对照组比
较,第一、二次处理几乎对毛脉酸模根中大黄酚苷产量
没有作用,第三次处理有明显的促进作用,其中大豆多
肽 3 号粉中浓度的促进作用最明显。根部灌注处理组
与空白对照组比较,第一、二次处理几乎对毛脉酸模根
中大黄酚苷产量没有作用,第三次处理有明显的促进
作用,其中大豆多肽 3 号粉高浓度的促进作用最明显。
由图 2D和 3D可知,叶面喷洒处理组与空白对照组比
较,第一次处理几乎对毛脉酸模根中大黄酚产量没有
作用,第二次处理毛脉酸模根中大黄酚产量稍微有抑
制作用,第三次处理有明显的促进作用,其中大豆多肽
3 号粉中浓度的促进作用最明显。根部灌注处理组与
空白对照组比较,第一次处理几乎对毛脉酸模根中大
黄酚产量没有作用,第二次处理毛脉酸模根中大黄酚
产量稍微有抑制作用,第三次处理有明显的促进作用,
其中大豆多肽 3 号粉高浓度的促进作用最明显。图
2F和 3F显示,大豆多肽叶面喷洒、根部灌注对毛脉酸
模根中大黄素产量的影响趋势同对毛脉酸模根中大黄
酚产量的影响趋势。由图 1H和 2H可知,大豆多肽叶
面喷洒、根部灌注对毛脉酸模根中大黄素产量
图 2 大豆多肽叶面喷洒对毛脉酸模根中蒽醌类成分及酸模素的含量和产量的影响
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图 3 大豆多肽根部灌注对毛脉酸模根中蒽醌类成分及酸模素的含量和产量的影响
的影响趋势同对毛脉酸模根中大黄素甲醚产量的影响
趋势。图 1J和 2J显示,大豆多肽叶面喷洒、根部灌注
对毛脉酸模根中酸模素产量的影响趋势同对毛脉酸模
根中大黄酚产量的影响趋势。
3. 3 大豆多肽对毛脉酸模根折干率的影响
经方差分析结果表明,大豆多肽对毛脉酸模根折
干率有显著性影响。
综合分析以上结果,大豆多肽对毛脉酸模根中蒽
醌类成分和酸模素的含量没有作用,而对毛脉酸模根
中蒽醌类成分、酸模素的产量和根折干率有显著性影
响。因此,本研究对提高毛脉酸模的产量具有重要
意义。
4 讨论
植物的生长既要受到自身遗传物质或基因的调
控,又要受到植物所生长的周围环境的影响与调
控[8]。环境因子包括气候、营养、地形、其他生物和人
类活动等各种环境因子,其变化影响着基因的表达,从
而植物体在不同的生长发育阶段及不同的环境中有着
不同的基因表达产物,这些产物或者是形成植物体结
构的基本成分,或者是具有不同功能的生长调节物质、
酶、信号传递物质等。
经查阅大量资料得知,大豆中有许多鲜为人知的
具有特殊生物学特性的生物活性物质。如大豆低聚
糖、大豆多肽、大豆异黄酮等,它们都对人体有很好的
保健作用[3],而这些特殊的活性物质在药用植物中的
应用的研究报道却极少。植物的生长发育与人体有相
似之处,植物生长也需要营养物质向植物体提供足够
的能量来维持植物生长发育以及抵御外来侵害。本研
究利用了大豆多肽水溶性、稳定性、无毒性及无污染等
特点首次将大豆多肽应用于毛脉酸模研究,探讨其对
毛脉酸膜的生长发育及其根中活性物质的影响。研究
结果表明,大豆多肽对毛脉酸模根中蒽醌类成分和酸
模素的含量没有作用,而对毛脉酸模根中蒽醌类成分
和酸模素的产量有显著性影响,因此可推断,大豆多肽
对蒽醌类成分和酸模素的合成途径中的关键酶、信号
传递物质或其它调节物质没有作用;但是大豆多肽对
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毛脉酸模根的生物量有明显的促进作用,进而提高了
活性成分的产量,这其中的原因可能是大豆多肽可以
促进植物根系生长发育,增强养分吸收能力;能激活土
壤,改善养分供给,增强缓冲能力,改善土质结构并能
促进根系生长和提高根系活力,从而大大提高作物从
土壤中吸收氮、磷、钾和其它营养元素;促进作物体内
各种酶的活性,加速细胞分裂,有效地促进作物新陈代
谢,从而提高产量、改善品质[9]。
参考文献:
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[2] 万琦,陆兆新,高宏.脱苦大豆多肽产生菌的筛选及其水解条件的
优化[J].食品科学,2003,24(2) :29 - 32.
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指纹图谱研究[J].植物研究,2005,25(1) :53 - 58.
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醇及白藜芦醇苷的影响[J].中医药学报,2011,39(5) :60 - 62.
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3 - 6.
低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究
崔立然1,2,王桂梅1,孙立冬1,刘颖1,肖艳华1,徐浩3,刘吉成3
(1.齐齐哈尔医学院第一附属医院,黑龙江 齐齐哈尔 161041;
2.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040;3.齐齐哈尔医学院,黑龙江 齐齐哈尔 161041)
摘 要:目的:探讨姬松茸中分离纯化的低分子量多糖对 ICR小鼠免疫功能的影响。方法:采用碳粒廓
清实验,比较经姬松茸多糖免疫的小鼠与未经免疫小鼠的巨噬细胞吞噬功能的影响; MTT 法测定姬松
茸多糖体内外刺激 ICR小鼠的脾淋巴细胞体外培养 60h 的增殖能力。结果:姬松茸多糖可以增强小鼠
巨噬细胞的吞噬功能;体外能刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖;体内诱导脾淋巴细胞增殖的能力不明显。结
论:初步证实了姬松茸多糖具有良好的免疫活性,该研究结果为姬松茸多糖的进一步实验研究奠定基
础,而且也可为设计理想的免疫佐剂提供了有意义的基础研究数据资料。
关键词:姬松茸;低分子量多糖;免疫活性
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2013)02 - 0010 - 04
基金项目:黑龙江省中医药管理局面上项目(ZHY12 - ZB11)
作者简介:崔立然(1974 -) ,女,在读博士,主要从事中药临床药效物质基础研究。
通讯作者:刘吉成(1957 -) ,男,博士研究生导师,教授,主要从事中药临床药效物质基础研究。
收稿日期:2012 - 11 - 12
修回日期:2012 - 11 - 25
Immunoregulation Activities of Low Molecular
Weight of the Agaricus Blazei Murill
CUI Li - ran1,2,WANG Gui - mei1,SUN Li - dong1,LIU Ying1,XIAO Yan - hua1,XU Hao3,LIU Ji - cheng3
(1. The First Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University,Qiqihar 161041,China;
2. Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China;
3. Qiqihar Medical University,Qiqihar 161041,China)
Abstract:Objective:To discover the effect of polysaccharide on the immune adjuvant response in ICR mice by
low molecular weight polysaccharide isolated from the mushroom of Agaricus Blazei Murill. Methods:Use car-
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