全 文 ：广东林业科技
1 9 9 4年第 2期
南洋楹丛枝病病原的研究
华南农业大学
张景宁 吴爱萍
广东省林业厅 肇庆市林业局
程伟文 叶新丰
摘要 南洋祖丛枝病的病原为类菌原休 (M L o ) , 存在筛管细胞 内 , M L O 形态多为团形 、
椭 圆形 , 乃至不规则 形 。 大 小 直径为 1 2 0一 50 0 n m , 单位膜厚度 6 . 5一 8 . 0 n m 。 病组织经 iD en ce ,s
液染色后 , 筛管细胞不规则地染成深 蓝色 , 健康组织不着色 。 病抹经四环素或土霉素处理后 ,
效果较为明显 , 症状减退或消失 。
南洋楹 (肠众汕 了欧 u 勿 ) 是我省 6 大造林
树种之一 , 它具有生长快 、 材质优 良的特点 ,
深受人们的欢迎 。 然而 , 由于丛枝病的为害 ,
植株生长受到抑制 , 严重的造成整株死亡 。该
病既为害幼树 , 也为害老树 , 这是值得研究
的 1个新课题 。 为此 , 我们对南洋楹丛枝病
进行调查研究 , 现将工作情况报道如下 .
1 病株症状特征
南洋楹丛枝病的主要症状是形成典型的
丛枝状 , 发病初期 , 植株往往由 1个枝条开
始 , 随后扩展到全株 , 使植株生长停滞 , 腋
芽或侧芽大量萌发 , 继而节间缩短 , 小枝亦
不断长出新芽 , 形成典型的丛枝状 。 病叶具
有典型的斑驳症状 , 叶脉透明 , 肿大黄化 , 叶
片变小 、 变硬 、 变形 , 甚至扭曲 (见图 1 ) , 普
遍出现花变叶现象 , 结实少 。 发病后期 , 枝
条干枯 , 长势极差 , 最后死亡 。
大学的南洋楹林内选择自然感病的幼枝 、 叶
柄 、 叶脉作材料 , 用立地相同的健康植株作
对照 。
.2 L 2 方法 把上述的健 、病组织分别切成
大小为 1 m m 的样本 , 先用 4%戊二醛固定
2一 4 h , 用 0 . Z M 磷酸缓 一冲液洗涤 2 次 , 后用
1%饿酸的 M il on ig 氏磷酸缓冲液 固定 Z h ,
再用 0 . Z M 磷酸缓冲液洗涤 30 m im , 之后 ,
在不同浓度的乙醇逐级脱水 , 脱水后 , 用不
同浓度的环氧丙烷进行渗透 , 最后用环氧树
脂 8 1 2 # 包埋 , 在 60 ℃恒温下聚合 48 h , 用
U R E I c H E R T 超薄切片机切片 , 厚度约为 50
n m
, 用醋酸双氧铀与柠檬酸铅进行双重染
色 , 用 P H IL I p S E M 4 0 透射电子显微镜观察 。
么 2 观察结果
病原体电镜观察
材料与方法
.2 L l 试脸材料 1 9 8 8 年春 , 在华南农业
一 2 4 一
病株的组织电镜观察结果 , 在韧皮部筛
管细胞观察到类菌原体 (M L o ) , 病原体形态
为圆形 、 椭圆形或不规则形 , 直径大小为
1 2 0一 5 0 0 n m , 单位膜厚度为 6 . 5一 8 . 0 n m ,
细胞内含许多核糖颗粒和纤丝状物 , 类似脱
氧核糖核酸 ( D N A ) , 还观察到哑铃状或芽殖
细胞 (见图 2 )。 而健康的嫩枝和 叶片组织中 ,
没有发现类菌原体 。 因此 , 我们认为这些类
菌原体就是南洋楹丛枝病的病原体 .
4
.
2 试验结果
3 n ie n e e ,s 液染色试验
3门 试验方法
用甲基蓝 2 . 5 9 、 天青 1 1 . 25 9 , 麦芽搪
1 0 9
. 碳酸钠 0 . 2 5 9 , 溶于 1 0 0 m一蒸馏水中 ,
经滤纸过滤后即配成 iD en ce 、 染色液 。 将所
配的原染 色液用 蒸馏水稀释 , 配成 浓度为
0
.
1%
、
0
.
2%
、
0
.
3写 、 0 . 4%和 0 . 5 %的系列
液 , 以供比较试验 . 取南洋楹病 、 健嫩枝茎
和叶柄组织 , 徒手切片 , 分别置于蒸馏水中
10 m in
, 然后放入不同浓度的 D jen ce 、 稀释液
中染色 10 m in , 取出后用蒸馏水冲洗数次 , 最
后用光学镜或暗视显微镜进行观察 。
试验结果见附表 , 从该表可以看到 , 土
霉素与四环素处理病株均有效 , 叶片转青绿 ,
丛枝现象减少或消失 ; 钻孔注射比皮层切割
处理效果好 ; 四环素在皮层切割处理中 , 施
药的浓度要在 40 万单位才有效 ;经抗生素处
理的病株 , 取其组织超薄切片 , 电镜观察结
果表明 , 病原类菌原体本身变形 , 内含物紊
乱 , 甚至变成中空 , 这是由于抗生素进入病
株体内时 , 能直接杀死类菌原体所致 (见图
5 )
。
附表 南洋楹丛枝病抗生素处理结果 ’
3
.
2 观察结果
在光学显微镜下观察到病枝嫩茎或叶柄
切片的木质部呈淡蓝色 , 皮层筛管细胞呈不
规则的深蓝色 , 呈正反应 。 染蓝色的部位即
表示病原类菌原体存在的组织位置 , 各种浓
度的稀释液的染色效果 , 以 0 . 2 %一 0 . 3%的
最佳 。 对照健株的同样部位组织 , 无染上颜
色 , 呈负反应 。 (见图 3 、 4 ) 。
4 抗生素防治试验
4门 材料来源与方法
4
.
1
.
1 试脸材料 药剂采用 四环素和土霉
素 , 以磷酸缓冲液作对照 。 试材为广州岑村
栽培的 2一 3年生的南洋楹病株 。
4
.
1
.
2 试验方法 l( ) 钻孔法 : 每试株在
树干基部向上钻 5一 6 个孔 , 然后分别将药
液注入孔中 , 每种药剂处理 3 株树 ; ( 2) 皮
层 “ T ” 形 切割法 : 在树干基部的皮层切
“
T’ , 形 口 , 施放胶粘状药剂 , 放药后用胶布
封 口 。 对照用 0 . Z M 磷酸缓冲液处理 。
处理 药 株 剂量 / 处理前 处理后症状
方法 物 号 株 (万 症 状单位 )
钻 土 1 3 0 叶黄化 3 株 的丛 枝
孔 霉 2 3 0 轻微丛枝 消 失 , 叶 变
素 3 3 O 绿 。
四 l 3 0 叶黄化 1 、 2 号 株 叶
环 2 3 0 轻微丛枝 变绿 , 未见丛
素 3 3 0 枝 , 3 号株叶
变绿 , 但仍有
丛枝 。
皮 土 l 4 0 叶黄化 1 、 2 号 株 叶
层 霉 2 4 0 轻微丛枝 变绿 ,丛枝减
T 素 3 4 0 少 , 3 号株效
形 果不 明显 , 叶
切 黄化 .
害吐
四 l 4 0 叶黄化 1 、 2 号 株 叶
环 2 4 0 轻微丛枝 变绿 ,仍有部
素 3 4 0 分丛枝 , 3 号
株叶黄化 , 仍
有丛枝 。
又寸 磷 1 2 m l 叶黄化 . 丛枝明显 , 生
照 酸 2 2 m l 轻微丛枝 势极差 。
缓 3 2 m l
冲
液
, 1 9 9 1 0 4施药 , x 99 2 0 3检查 .
一 2 5 一
5 讨论
5
.
1南洋楹丛枝病是一种黄化型病害 ,丛枝
萎缩和黄化为其主要特征 ,通过电镜观察病
组织的筛管细胞存在着类菌原体 ,为此 ,我们
认为南洋楹丛枝病的病原就是类菌原体 。 同
时 iD en ce 、 液组织染色试验结果亦证明 , 类
菌原体存在于韧皮部筛管细胞内 。
5
.
2 用抗生素处理病株 , 能使病株恢复健
康 ,它将进一步证明 ,南洋楹丛枝病是由类菌
原体 引起的 , 同时类菌原体对四环素抗生素
族具有敏感性 ,抗生 素直接破坏类菌原体的
组织结构 。
图 3 、 经 iD e cn e 、 染色后 ,筛管细胞不规则地
染成深蓝色 (病株 )
图 l 南洋楹丛枝病症状
图 4 健株组织经 D ien ce 长液染色后 , 筛管细
胞不着色
图 2 病组织超薄切片电镜观察到筛管细胞
存在着大量的类菌原体 7 5 0 x
图 5 病株经四环素 (或土霉素 )处理后 , 其
组织超薄切片电镜观察显示病原类菌原体细
胞组织受到破坏 ,有的呈中空现象 4 3 2 0 0 X