全 文 ：RP-HPLC法测定角花胡颓子中齐墩果酸与熊果酸的含量＊＊
张俊清 1 ,陈文芝 2 ,蒋德锡2 ,张丹2＊＊＊
(1.海南医学院药学系 , 海口 571101;2.四川大学华西药学院 , 成都 610041)
摘要　目的:建立同时测定角花胡颓子中齐墩果酸与熊果酸含量的 RP-HPLC法。 方法:采用 DiamonsilC18(250 mm×4.6
mm, 5 μm),以甲醇 -0.5%乙酸铵(85∶15)为流动相 , 检测波长为 206 nm,流速为 1.0 mL· min-1 ,柱温 30 ℃。结果:齐墩果
酸进样量在 0.06 ～ 0.36μg(r=0.9995)、熊果酸进样量在 0.65 ～ 3.9 μg(r=0.9997)范围内 , 线性关系良好 ,齐墩果酸与熊
果酸的平均加样回收率分别为 99.2%和 102.5%, RSD分别为 8.4%和 6.0%(n=9),重复性试验的含量的 RSD分别为 6.9%
和 4.2%(n=6)。结论:该法简便 、快速 、准确 ,可用于角花胡颓子的质量控制。
关键词:角花胡颓子;齐墩果酸;熊果酸;HPLC;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:0254-1793(2010)07-1305-03
RP-HPLCdeterminationofoleanolicacidandursolic
acidinElaeagnusgonyanthesBenth
ZHANGJun-qing1 , CHENWen-zhi2 , JIANGDe-xi2 , ZHANGDan2＊
(1.WestChinapharmacyschoolofSiChuanUniversity, Chengdu610041, China;
2.AfiliatedHospitalofLuzhouMedicalColege, Luzhou646000, China)
AbstractObjective:ToestablishanRP-HPLCfordeterminationofoleanolicacidandursolicacidinElaeagnus
gonyanthesBenth.Methods:TheanalyticalcolumnwasDiamonsilC18 column(250 mm×4.5 mm, 5 μm).The
mobilephaseconsistedofmethanol-0.5% ammoniumacetate(85∶15).Thedetectivewavelengthwas206nm.
Theflowratewas1.0mL· min-1 andthecolumntemperaturewas30degrees.Results:Oleanolicacidandursolic
acidshowedagoodlinearityinrangeof0.06-0.36 μg(r=0.9995)and0.65-3.9 μg(r=0.9997).The
averagerecoveryofoleanolicacidwas99.2% withrelativestandarddeviation(RSD)of8.4% andtheursolic
acidwas102.5%withRSDof6.0%(n=9), thereproducibilitytestofcontentwas6.9% and4.2%(n=6).
Conclusion:Thismethodissimple, quick, accurateandcanbeusedforqualitycontrolofElaeagnusgonyanthes
Benth.
Keywords:ElaeagnusgonyanthesBenth;oleanolicacid;ursolicacid;HPLC;quantitativedetermination
角花胡颓子(ElaeagnusgonyanthesBenth),又名
假甜酸 、红面将军 、土芋肉等 ,为胡颓子科胡颓子属
植物 , 生于海拔 1000米以下的热带和亚热带地区 ,
主要分布于广东 、海南 、广西 、云南等地 ,以根 、叶 、果
入药。据《海南植物志 》中记载 ,角花胡颓子具有止
咳平喘 、祛风通络 、行气止痛 、消肿解毒 、收敛止泻等
作用 ,主要治疗肠炎 、支气管哮喘 、慢性支气管炎 、风
湿性关节炎 、腰腿痛 、河豚中毒 、跌打肿痛 、泄泻等 ,
是海南黎族地区民间常用的植物药之一 [ 1] 。
目前国内外对角花胡颓子的研究甚少 , 仅见一
篇文献对角花胡颓子的挥发油成分进行分析研究的
报道 [ 1] ,为了开发和利用该药用植物资源 , 控制与
评价该药材质量 ,对其主要药效成分进行研究 ,发现
角花胡颓子中含有齐墩果酸和熊果酸。齐墩果酸具
有消炎 、增强免疫 、抑制血小板降集 、降糖等作
用[ 2] ,熊果酸具有抗癌 、肝损伤保护 、抗菌消炎和抗
病毒等作用[ 3] ,因此可将上述 2种五环三萜酸作为
评价角花胡颓子药材质量的指标成分。本文在优化
样品提取条件的基础上 ,建立了同时测定角花胡颓
子中齐墩果酸和熊果酸含量的 HPLC法 ,该法简便 、
—1305—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(7)
＊＊
＊＊＊
基金项目:国家支撑计划项目课题(2007BA︱27B06)
通讯作者 Tel:13668129116;E-mail:zdan321@126.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.07.028
快速 、准确 ,可用于角花胡颓子的质量控制与评价。
1　实验部分
1.1　仪器与试药　日本岛津 LC-10Atvp型高效色
谱仪;美国 AltechChromTek色谱工作站;色谱柱为
DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);齐墩果酸
对照品 (批号:110709 -200505)和熊果酸对照品
(批号:110745-200516)均由中国药品生物制品检
定所提供;甲醇 、乙醚等试剂均为分析纯;角花胡颓
子 , 080901批(夏秋季采收的枝叶), 080902批 (夏
秋季采收的根茎), 090301批 (春季采收的混合样
品), 3批均采于海南省保亭县 ,经中国医科院兴隆
分所陈伟平教授鉴定 。
1.2　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱:Dia-
monsilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇
-0.5%乙酸铵(85∶15);流速:1.0 mL· min-1;柱
温:30 ℃;检测波长:206nm。理论板数按熊果酸峰
计算应不低于 6000,各待测组分峰与相邻成分峰的
分离度应符合规定。
1.3　对照品溶液的配制　精密称取齐墩果酸和熊
果酸对照品适量 ,分别加甲醇制成每 1mL中含齐墩
果酸 0.12 mg与熊果酸 0.26 mg的对照品储备液 。
分别精密吸取上述储备液适量于量瓶中 ,用甲醇稀
释至所需浓度(齐墩果酸 0.012 mg· mL-1 , 熊果酸
0.13mg·mL-1),即得 2种组分的对照品溶液 。
1.4　供试品溶液的制备　取角花胡颓子粗粉(过
20目筛)约 1 g,精密称定 ,置索式提取器中 ,加入乙
醚适量 ,加热回流提取 4h,挥干提取液 ,残渣加甲醇
适量使溶解 ,转移至 5mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇
匀 ,滤过 ,取续滤液 , 经 0.45μm微孔滤膜滤过 ,即
得 。
2　方法与结果
2.1　线性与范围　分别精密吸取 “1.3”项下 2种
组分的对照品溶液 5 , 10, 15, 20, 25, 30 μL, 依法测
定 ,分别以对照品量 C(μg)对色谱峰面积 Y进行线
性回归 ,结果齐墩果酸和的熊果酸回归方程分别为
Y=1.497×105C-110.2　r=0.9995
Y=6.814×104C+3310.8　r=0.9997
线性范围分别为:0.06 ～ 0.36μg和 0.65 ～ 3.9 μg。
2.2　精密度试验
　　进样精密度:精密吸取 “ 1.3”项下齐墩果酸和
熊果酸对照品溶液 10μL, 注入液相色谱仪 ,连续进
样 6次 , 测得齐墩果酸和熊果酸峰面积的 RSD分别
为 1.3%和 1.3%。
中间精密度:取本品(080901批),分别在不同
日期(第 1、5、7d)由不同分析人员 ,按 “1.4”项下方
法制备供试品溶液 ,按外标法分别计算齐墩果酸和
熊果酸的含量 ,测得含量的 RSD分别为 5.2%和 8.
3%(n=5)。
重复性试验:取本品(080901批),按 “ 1.4”项
下方法平行制备 6份供试品溶液 ,按外标法分别计
算齐墩果酸和熊果酸的含量 , 测得含量分别为 0.
0596和 0.7484 mg· g-1 , RSD分别为 6.9%和 4.
2%(n=6)。
2.4　回收率试验　精密称取已知齐墩果酸和熊果
酸含量的样品(080901批)9份 ,每份约 1 g,平均分
为 3组 ,每组分别精密加入 0.06 mg· mL-1的齐墩
果酸和 0.73mg· mL-1的熊果酸对照品溶液 0.8, 1.
0, 1.2mL, 按 “1.4”项下方法制备供试品溶液 ,按外
标法测定其含量 ,计算平均加样回收率和 RSD。结
果 ,齐墩果酸的平均加样回收率为 99.2%, RSD为
8.4 %,熊果酸的平均加样回收率为 102.5%, RSD
为 6.0%。
2.5　供试品溶液稳定性试验　按 “ 1.4”项下方法
制备供试品溶液 ,于室温下在同一天内不同时间点
(0, 2 , 4, 8, 12 h)分别进样 10μL,并于 12 h进样后
置 4 ℃冰箱保存 ,于 24, 48 h取出分别进样 10μL,
结果齐墩果酸和熊果酸峰面积的 RSD分别为 4.1
%和 4.1%,表明供试品溶液在 48 h内基本稳定。
2.6　样品测定　取本品 3批 , 按 “1.4”项下方法
制备供试品溶液 ,按外标法分别计算供试品中齐墩
果酸和熊果酸的含量(mg· g-1)。结果见图 1和表
1。
3　讨论
3.1　检测波长的选择　由于齐墩果酸与熊果酸分
子结构中均无长共轭体系 ,因此仅有由羟基等 n※σ
跃迁产生的末端吸收。取其对照品溶液进行紫外扫
描 ,结果二者最大吸收波长均在 206 nm附近 ,故选
择 206 nm为检测波长 。
3.2　流动相和色谱柱的选择　齐墩果酸与熊果酸
为同分异构体 ,结构与性质均极其相似 ,在天然植物
中往往共生互存 ,分离测定较为困难 ,经多次实验 ,
以甲醇 -0.5%乙酸铵(85∶15)体系为流动相 ,选用
DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),实现了
齐墩果酸和熊果酸的良好分离。
—1306— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(7)
图 1　齐墩果酸对照品(A)、熊果酸对照品(B)和 080901批样品
(C)HPLC色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofofoleanolicacidreferencesubstance
(A)、ursolicacidreferencesubstance(B)and080901batchsample(C)
1.齐墩果酸(oleanolicacid)　 2.熊果酸(ursolicacid)
表 1　样品测定结果(n=9, mg· g-1)
Tab1　Analyticalresultsofsample
批号
(Lot.No.)
齐墩果酸
(oleanolicacid)
熊果酸
(ursolicacid)
080901 0.0602 0.7644
080902 0.0250 0.0233
090301 0.0302 0.02053
3.3　提取条件的选择　对索氏提取 、加热回流提取
和超声提取(40kHz, 100 W)3种提取方式和提取条
件进行了考查 。试验证实 ,以索氏提取的提取率最
高。对提取剂(95%乙醇 、甲醇 、乙酸乙酯 、乙醚)以
及提取时间(3, 4, 5, 6 h)进行了选择。结果证明 ,
95%乙醇 、甲醇和乙酸乙酯的提取率与乙醚相当 ,但
前三者由于极性较大 ,提取出的其他成分较多 ,易对
待测组分产生干扰 ,故选择乙醚为提取剂;此外 ,增
加提取时间 ,提取率无明显提高 。故本试验的提取
条件确定为:取本品约 1g,以适量乙醚为提取剂 ,采
用索氏提取器提取 4 h。
3.4　药材的选择　本研究证实 ,角花胡颓子中齐墩
果酸与熊果酸的含量与不同采收季节以及药材的不
同部位关系较大 ,均以夏季和初秋季采收的枝叶中
含量较高 。故在制定质量标准及评价药材质量时 ,
建议规定采收季节以及所用药材的部位 。
参考文献
1　WEINa(魏娜), WANGYong(王勇), ZENGNian-kai(曾念开),
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Advancesinpharmacologyresearchofursolicacid(熊果酸药理学的
研究进展).ForeignMedSci(Pharmacy)国外医学药学分册.
2004, 31(3):133
(本文于 2010年 6月 17日修改回)
—1307—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(7)