全 文 ：肾茶对 UUO大鼠肾组织 FaS、FasL表达的影响
王丽敏，田玉凤，谭振香，郭佳丽，Amrita Shrestha(尼泊尔)，王 超
(佳木斯大学附属第一医院儿科，黑龙江 佳木斯 154003)
摘要:目的:探讨肾茶对 UUO大鼠肾组织 Fas(Fas蛋白)、FasL(FasL 蛋白)表达的影响。方法:将清洁级 SD 大鼠随机分
为模型组、假手术组、肾茶组。模型组、肾茶组分离、结扎左侧输尿管，并离断;假手术组只分离左侧输尿管，不结扎、离断。肾
茶组给予剂量为 8g /kg的肾茶煎剂灌胃，模型组、假手术组给予等体积的生理盐水灌胃，分别于术后 3d，7d，14d在每组大鼠中
随机取 8 只，麻醉后心脏取血测定血尿素氮、血肌酐，处死大鼠，摘取左侧(术侧)肾脏后采用免疫组化方法检测大鼠肾组织中
Fas和 FasL的表达。结果:同模型组相比，术后 3d、7d、14d肾茶组血尿素氮、血肌酐下降，肾间质纤维化程度减轻，Fas、FasL表
达下调，各组间差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论:肾茶能够延缓单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化程度，其疗效可能是
使进行性纤维化的肾组织 Fas、FasL的表达降低。
关键词:肾茶;SD大鼠;UUO;Fas;FasL;肾小管上皮细胞
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:1008 － 0104(2014)03 － 0036 － 03
肾茶作为传统民间药物已流传使用了几百年，民间常用
来治疗急慢性肾炎、泌尿系统结石、膀胱炎、痛风、动脉硬化、
黄疸、咽炎，风湿性关节炎等疾病。毒性小，使用安全。本实
验旨在研究肾茶对 UUO大鼠肾小管上皮细胞 Fas、FasL表达
的影响，揭示肾茶在肾间质纤维化形成中保护作用的可能机
制。
1 材料与方法
1． 1 实验动物与分组
72 只清洁级 SD大鼠，雄性，体重(100 ± 5)g，购自长春
实验动物中心。随机分为假手术组、模型组、肾茶组 3 组，每
组 24 只，模型组、肾茶组分别行左侧输尿管结扎、离断，假手
术组只将左侧输尿管分离，不结扎、离断。肾茶组给予剂量
为8g /kg的肾茶煎剂灌胃，模型组、假手术组则给予等体积
0． 9%生理盐水代替灌胃。
1． 2 建立 UUO模型
按照董飞侠，何立群等人报道的方法进行［1］。采用
10%水合氯醛(0． 35mL /100g计算)将大鼠麻醉，待麻醉起效
后将大鼠固定为左侧俯卧位，在其左侧肋脊角下方约 0． 5cm
的皮肤处纵行切开，将其皮下组织及肌层钝性分离，暴露左
侧肾脏，分离其左输尿管，并于中上 1 /3 处结扎，离断，使左
肾梗阻，逐层缝合完毕后，背部皮下注射 5 万 U 青霉素钠。
假手术组大鼠暴露左肾后只分离输尿管，不结扎。
1． 3 实验方法
购置大鼠后，放置在清洁级饲养房并适应性喂养 1 周，
造模成功后，分别于术后 3d、7d、14d各组分别随机选取 8 只
大鼠，麻醉后心脏取血，用来测定血尿素氮、血肌酐，处死大
鼠并摘取其左侧肾脏，左肾组织采用免疫组化法检测蛋白
Fas和 FasL。
1． 4 试剂及检测
免疫组化试剂盒购自天津所罗门生物制品公司，其中一
抗 Fas、FasL为兔抗大鼠蛋白抗体。经 DAB 显色后，将含有
黄色颗粒的肾实质及间质细胞视为阳性，免疫组化的结果采
用多功能彩色计算图像分析系统进行半定量分析，每例分别
随机选取 5 个高倍视野，计算每个视野内染色区域的面密度
值。
1． 5 统计学方法
采用 SPSS 18． 0 软件，三组均数间比较用随机区组方差
分析;两组均数间差别用 t检验，检验水准 α = 0． 05。
2 结果
2． 1 大鼠血肌酐，尿素氮测定
造模后 3d，7d，14d 模型组及肾茶组大鼠血 Scr、BUN 升
高，与假手术组相比，各组间比较差异具有统计学意义
(P ＜ 0． 05);其中模型组上升明显，同假手术组相比，差异
有统计学意义(P ＜ 0． 05);肾茶组与模型组相比各时间点
Scr、BUN下降，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。见表 1。
表 1 各组大鼠各时间点血 Scr、BUN的变化(mmol /L，x ± s，n = 24)
组别
BUN(mmol /L)
3d 7d 14d
Scr(umol /L)
3d 7d 14d
假手术组 4． 00 ± 0． 61 4． 74 ± 0． 49 5． 45 ± 1． 15 36． 92 ± 4． 10 36． 56 ± 3． 27 33． 82 ± 2． 67
模型组 5． 47 ± 0． 98* 7． 24 ± 0． 21 11． 36 ± 1． 88* 42． 61 ± 1． 32 47． 61 ± 0． 94* 52． 08 ± 2． 37*
肾茶组 5． 31 ± 0． 38▲＊ 5． 87 ± 0． 49▲＊ 10． 06 ± 2． 10▲＊ 39． 02 ± 0． 94▲＊ 42． 15 ± 3． 12▲＊ 50． 46 ± 2． 69▲＊
F值 10． 571 72． 010 24． 983 10． 220 34． 400 122． 677
P 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01
注:* 与假手术组比较 P ＜ 0． 05;▲ 与模型组比较 P ＜ 0． 05。
2． 2 免疫组化法检测 Fas和 FasL
2． 2． 1 Fas及 FasL的表达
Fas、FasL主要表达于近端肾小管上皮细胞，其中皮髓
质交界处表达强，而在远端肾小管、系膜细胞、炎症细胞等表
达极少。见图 1。
2． 2． 2 Fas、FasL 面密度半定量分析
假手术组大鼠术侧(左侧)肾各时间点 Fas、FasL 表达均
较弱;同假手术组相比，模型组自造模后 3d 后肾小管上皮细
胞 Fas、FasL表达愈发增强，各时间点差异均具有统计学意义
(P ＜ 0． 05);同模型组相比，肾茶组造模后各时间点 Fas、
FasL表达降低，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。见表 2。
·63· 黑龙江医药科学 2014 年 6 月第 37 卷第 3 期
假手术组(3d) 模型组 (3d) 肾茶组(3d)
假手术组(7d) 模型组(7d) 肾茶组(7d)
假手术组(14d) 模型组(14d) 肾茶组(14d)
图 1 术后各组大鼠 Fas的表达(10 × 40)
假手术组(3d) 模型组 (3d) 肾茶组(3d)
假手术组(7d) 模型组(7d) 肾茶组(7d)
假手术组(14d) 模型组(14d) 肾茶组(14d)
图 2 术后各组大鼠 FasL的表达(10 × 40)
·73·HEILONGJIANG MEDICINE AND PHAＲMACY Jun． 2014，Vol． 37 No． 3
表 2 各组大鼠各时间点 Fas、FasL 面密度半定量分析(x ± s，n = 24)
组别
Fas
3d 7d 14d
FasL
3d 7d 14d
假手术组 14． 51 ± 1． 49 14． 80 ± 1． 52 14． 67 ± 2． 52 16． 13 ± 1． 08 17． 83 ± 0． 91 18． 15 ± 1． 45
模型组 21． 70 ± 1． 30* 39． 16 ± 0． 85* 111． 20 ± 3． 21* 29． 51 ± 1． 96* 34． 48 ± 1． 48* 103． 48 ± 6． 61*
肾茶组 21． 04 ± 0． 77▲＊ 36． 42 ± 1． 83▲＊ 86． 41 ± 7． 12▲＊ 26． 16 ± 0． 26▲＊ 32． 67 ± 0． 92▲＊ 86． 29 ± 6． 01▲＊
F 值 83． 632 671． 600 894． 843 229． 909 518． 255 596． 796
P ＜ 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01 ＜ 0． 01
注:* 与假手术组比较 P ＜ 0． 05;▲ 与模型组比较 P ＜ 0． 05。
3 讨论
各种原因所致慢性肾脏病进展的共同途径是不可逆的
肾脏间质纤维化，这一不可逆的肾损害最终导致肾高血压乃
至肾衰竭，而肾脏细胞凋亡在这一病理生理形成的过程中起
到了重要的作用［2］。李彪等［3］研究结果显示肾间质纤维化
的发展与肾小管上皮细胞的过度凋亡密切相关，而高表达的
Fas /FasL导致肾小管上皮细胞凋亡，这一机制最终使肾小管
上皮细胞数目减少，临床表现为肾功能下降，这说明 Fas 系
统介导了肾小管上皮细胞的凋亡［4］。UUO 模型是结扎单侧
输尿管以造成肾功能损伤、间质纤维化、肾小管细胞凋亡及
炎症细胞浸润为特征的经典模型，也是目前应用最广泛的肾
间质纤维化模型［5］，显著改善 UUO 模型的肾脏损伤可以通
过调控肾小管细胞凋亡而实现［6］。膜 FasL、抗 Fas －特殊的
抗体和块状可溶的 FasL的刺激可引起诱导的含有 Fas 蛋白
的细胞发生凋亡［7］。多种肾脏疾病的发生、发展及修复过程
与细胞凋亡有关，而这一过程受多种因素调控［8］，在众多凋
亡调控因素中 Fas /FasL最具代表性，因其可直接参与启动细
胞凋亡［9］。有研究用 DNA 断裂的原位末端标记法测得急性
肾衰竭时肾小动脉、肾小管及周围区域的细胞凋亡数目增
加，肾功能的下降与凋亡小体的不断增加相一致;同时免疫
组化结果显示，在 UUO 肾组织的近曲小管远曲小管周围
Fas /FasL表达明显增加，这一结果提示 Fas /FasL途径参与了
肾小管上皮细胞凋亡的发生，而本研究也有相似的发现。
本实验采用经典的 UUO(肾间质纤维化)模型，研究梗
阻性肾病时肾茶干预与否的肾小管上皮细胞 Fas、FasL 的表
达的变化，研究结论提示正常的肾脏组织在各时间点 Fas、
FasL表达少量，当发生肾纤维化时其表达量明显增强，随着
造模时间的延长 Fas、FasL表达量逐渐增加，这与仙淑丽等人
的［10］研究一致。Fas、FasL表达的这种变化可能因为肾发生
梗阻时，肾固有细胞凋亡大于细胞增殖，从而导致增殖与凋
亡关系的失衡，引起临床上一系列病理生理变化。肾茶(C．
Spicatus)是一种多年生草本植物，唇形科猫须草属(Clero-
dendranthus)，又称猫须草、牙路妙、猫须公，此药为印度尼西
亚草药，当地医生常用治结石病，效果颇著。该药从印尼至
南亚诸岛及澳洲均有生长，近年来有应用单味肾茶及其复方
制剂治疗尿路感染，肾病综合征［11］、肾衰竭［12］等临床报道。
本研究结果表明，单味肾茶对 UUO 大鼠肾功能及肾纤
维化的发展具有保护作用，其机制之一可能是通过调节 Fas /
FasL系统，降低 Fas、FasL蛋白的表达水平，从而抑制肾小管
细胞的凋亡。然而，Fas /FasL系统只是凋亡发生过程中众多
传导途径中的其中之一，其抑制凋亡的机制是否还与其他信
号传导途径有关，另外，临床上肾茶若与西药结合治疗肾纤
维化是否效果更好，均尚待进一步探索研究。
参考文献:
［1］董飞侠，何立群，黄迪，等．单侧输尿管结扎再通大鼠模型的建立
方法及其评价［J］．中国比较医学杂志，2010，20(3):30
［2］Maoka T，Tokuda H，Suzuki N，et al． Anti － oxidative，anti － tumor
－ promoting，and anti － carcinogensis activities of nitroastaxanthin
and nitrolutein，the reaction products of astaxanthin and lutein with
peroxynitrite［J］． Mar Drugs，2012，10(6) :1391 － 1199
［3］李彪．肾小管上皮细胞在肾间质纤维化中的作用［J］． 国外医学
·生理 －病理科学与临床分册，2004，24(1):65 － 66
［4］刘宏宝，赵峰，于艳，等．骨髓间充质干细胞对缺血 /再灌注损伤肾
小管上皮细胞．细胞 Bcl － 2，Fas /FasL表达的影响［J］．中国急救
医学，2008，28(1):39 － 42
［5］张新志，何立群．肾小管间质纤维化动物模型的研究进展［J］．时
珍国医国药，2010，21(4):969
［6］谢潮鑫，孟猛，殷先锋，等．天然虾青素对抗肾纤维化及细胞凋亡
的作用［J］．基础研究，2013，33(2):305 － 308
［7］Gordon N，Kleinerman ES． The role of fas / fasL in the metastaticpoten-
tial of osteosarcoma and targeting this pathway for the treat － ment of
osteosarcoma lung metastases［J］． Cancer Treat Ｒes，2010，(152) :
497 － 508
［8］Shah S N，Ｒesar L M． High mobility group A1 and cancer:Potential
biomarker and therapeutic target［J］． Histol Histopathol，2012，27
(5) :567 － 579
［9］Steller H． Mechanisms and genes of cellular suicide［J］． Science，
1995，267:1445 － 1449
［10］仙淑丽，刘英莉，沈波，等． bMSCs 移植对单侧输尿管结扎大鼠
肾小管上皮细胞凋亡的影响［J］．上海交通大学学报(医学版)，
2009，(4) :421 － 425
［11］王丽敏，王蕾，徐海波，等． 肾茶对阿霉素肾病大鼠血清 NF －
KB、IL － 8 水平的干预研究［J］．黑龙江医药科学，2013，36(1):
19 － 20
［12］王立强，孟萍萍，智利，等．肾茶提取物防治大鼠慢性肾功能衰竭
的实验研究［J］．中国医药科学，2011，1(1):33 － 35
(收稿日期:2014 － 03 － 14)
作者简介:王丽敏(1964 ～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，教授，硕士研究生导师。
通讯作者:田玉凤(1986 ～)女，河北保定人，在读硕士研究生。E － mail:519190672@ qq． com。
(下转第 40 页)
·83· 黑龙江医药科学 2014 年 6 月第 37 卷第 3 期
医学教育探索，2006，(7) :646
［4］Blatt B，PlackM，M aring J，et al． Acting on reflection :the effect of
re － flection on students． clinical perfor mance on a standardized pa-
tient exam － ination［J］． J Gen Intern Med，2007，22(1) :49 － 54
［5］哈灵侠，张灵武．学生标准化病人在医学生临床技能培训中的应
用［J］．山西医科大学学报:基础医学教育版，2008，10(5):594
［6］Shaw lerC． Standardized patients :a creative teaching strategy for
psych － iatric － mental hea lth nurse practitioner students［J］． JNurs
Educ，2008，47(11) :528 － 531
(收稿日期:2014 － 03 － 05)
作者简介:张立海(1979 ～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主治医师。
通讯作者:陈福军(1966 ～)男，黑龙江鸡西人，学士，主任医师。E － mail:35159149@ qq． com。
Study on the construction of clinical teaching mode in the department
of anus ＆ intestine surgery by applying SP teaching method
ZHANG Li － hai1，WANG Jiao1，WANG Yue － sheng1，LIU Ying － lan1，
JI Zhi － wu1，JIN Feng1，CHEN Fu － jun1，ZHOU Li2
(1． General Surgery，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China;2． The School of Basic Medicine，Jiamusi Universi-
ty，Jimusi 154007，China)
Abstract:Objective:To study the application effect of standardized patient(SP)teaching mode on the con-
struction clinical teaching method in department of anus ＆ intestine surgery． Methods:We carried out SP teaching
method to the fourth grade university interns in department of anus ＆ intestine surgery． Ｒesults:The factory clini-
cal probation teaching applicatied by standardized patient has the following advantages:The first is to provide atypi-
cal case through SP，standard features are clear to ensure the clinical teaching order and standard uniform;The sec-
ond is to protect the privacy of the patient，effectively prevent medical disputes;The third is the ability to communi-
cate． SP teaching method could train students and doctors and patients． However，there are many problems at the
same time:the first is that the teaching mode of construction of SP are typical cases，and the answer to the question
is standard answer，and it is insufficient to strengthen student＇s strain capacity;the second is that it is difficult to imi-
tate some signs，which needs to cooperate with the implementation;the third is the source of the SP genera in junior
intern has no stability． Conclusion:In the clinical teaching，the implementation of standardized patient(SP)teach-
ing method is conductive to teaching in Department of anus ＆ intestine surgery． It has broad application prospect，
but needs to overcome some problems．
Key words:standardized patient;department of anus ＆ intestine surgery;teaching
(上接第 38 页)
Effects of C． spicatus on the Expression of Ｒenal Fas and FasL of UUO rats
WANG Li －min，TIAN Yu － feng，TAN Zhen － xiang，GUO Jia － li，Amrita Shrestha，WANG Chao
(Department of Pediatrics，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)
Abstract:Objective:To discuss the effect of C． spicatus on the rat UUO and Fas，FasL Expression of the Ｒe-
nal． Methods:The clean － level SD rats were randomly divided into sham － operation group，model group，and C．
spicatus (C． s)group． The left ureteral ligation in the model group and C． s group were ligated and broken． The
sham － operated group was only separated the left ureter without ligating or breaking treatment． The C． s group was
given doses of 8 g /kg of C． spicatus decoction to fill in the stomach，the model group and sham － operation group
were given equal volume of 0． 9% saline adm inistered． Eight rats in each group were randomly selected after sur-
gery，on day 3，7and14． We draw blood from cardiac after anesthesia to determine the BUN and SCr，We killed
these rats，and took the left kidney to detect the expression of Fas and FasL by lmmunohistochemical method． Ｒe-
sults:Compared with model group，after 3，7 and 14 days，the degree of renal interstitial fibrosis mitigated and
BUN、SCr were decreased among the C． s group，expression of the Fas and FasL were reduced，and the difference
between groups was statistically significant(P ＜ 0． 05)． Conclusion:C． s can reduce the degree of renal intersti-
tial fibrosis and BUN、SCr on the UUO rat． Its effects may reduce the expression of Fas and FasL．
Key words:C． spicatus;SD rats;UUO(Unilateralureter Obstructions);Fas;FasL;Ｒenal Tubular Epithel － ial
Cell (ＲTEC)
·04· 黑龙江医药科学 2014 年 6 月第 37 卷第 3 期