全 文 ：［收稿日期］ 2011-03-04
［第一作者］ 冯京，研究生，Tel:13752032940，E-mail:fengjing-
sarah@ 163． com
［通讯作者］ * 张铁军，Tel:022-23006848，E-mail:tiezheng4@
sina． com
HPLC同时测定藏药花锚中齐墩果酸和熊果酸含量
冯京1，王丽莉2，张铁军2*
(1. 天津中医药大学，天津 300193;2. 天津药物研究院，天津 300193)
［摘要］ 目的:建立同时测定藏药花锚中齐墩果酸和熊果酸含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法，流动相甲醇-
0. 5%磷酸水(85:15) ，柱温 20 ℃，流速 0. 8 mL·min － 1，检测波长 210 nm。结果:齐墩果酸和熊果酸在 0. 01 ～ 0. 05，0. 02 ～ 0. 1 g
·L － 1呈良好的线性关系，加样回收率分别为 101. 17%，101. 79%，RSD 分别为 1. 90%，1. 65%。结论:该法简便、快捷，结果准
确、重复性好，可用于花锚药材中齐墩果酸和熊果酸的质量控制。
［关键词］ 藏药花锚;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)23-0079-03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in
Halenia elliptica by HPLC
FENG Jing1，WANG Li-li2，ZHANG Tie-jun2*
(1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China;
2. Tianjin Insititute of Pharmaceutical，Tianjin 300193，China)
［Abstract］ Objective:To establish a determination method of the content of oleanolic acid and ursolic acid
in Halenia elliptica by HPLC． Method:The mobie phase was a mixture of methanol-0. 5% H3PO4(85 ∶ 15) ，the
column temperature was set 20 ℃，the flow rate was 0. 8 mL·min － 1，the deterion wave leght was 210 nm． Result:
The linear range of oleanolic acid was 0. 01-0. 05 g·L － 1，the linear range of ursolic acid was 0. 02-0. 1 g·L － 1，and
the average recovery was 101. 17% with RSD 1. 90% and 101. 79% with RSD 1. 65% ． Conclusion:The method
was rapid，convenient，accurate，and suitable for quality control of oleanolic acid and ursolic in H． eliptica．
［Key words］ Halenia elliptica;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC
椭圆叶花锚 Halenia elliptica D． Don 为龙胆科
花锚属植物，主产于青藏高原，资源较为丰富。《中
华人民共和国卫生部药品标准(藏药)》［1］记载其全
草或地上部分入药，具有清热祛湿、疏肝利胆等功
效，是我国藏族民间常用治疗肝炎的草药之一［2-4］。
现代药理学研究表明，花锚中含有的齐墩果酸和熊
果酸等三萜类化合物具有清热、消炎、抑菌、保肝、护
肝、增加白细胞、降低转氨酶等作用，是花锚中除了
xanthone 之外另一类重要的药效物质基础［5-6］。因
此，我们对花锚中这 2 种三萜类成分进行 HPLC 测
定，为藏药花锚的质量评价提供科学依据。
1 仪器与试药
Lab Alliance 高效液相色谱仪(Series Ⅲ二元泵
系统，Moder 201 + 紫外检测器，AXW-8 柱温箱，Lab
Alliance 工作站) ，AB204-N、PB303-N 电子分析天平
(METTLER TOLEDO 公司) ，HS-3120 超声清洗仪。
甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水，
齐墩果酸(批号 110709-200505)和熊果酸(批号
110742-200516)均购自中国药品生物制品检定所。
本实验所用花锚药材由天津药物研究院张铁军
研究员鉴定为龙胆科植物椭圆叶花锚 H． elliptica 。
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第 17 卷第 23 期
2011 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 23
Dec．，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.23.056
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 5%磷酸水(85∶ 15) ，
流速 0. 8 mL·min － 1，柱温 20 ℃，检测波长 210 nm，
进样量对照品 20 μL，供试品 10 μL。在上述色谱条
件下，齐墩果酸、熊果酸之间的分离度 ＞ 1. 5，对称因
子在 0. 95 ～ 1. 05，理论塔板数不低于 3 000，峰型较
好，对照品与供试品色谱图见图 1。
A．对照品;B．供试品;1. 齐墩果酸;2. 熊果酸
图 1 花锚药材 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取齐墩果酸
和熊果酸对照品适量，置 25 mL 量瓶中，用甲醇溶解
并稀释至刻度，得 0. 05，0. 1 g·L － 1的混合对照品溶
液，备用。
2. 3 供试品溶液的制备 取花锚药材粉末(过 40
目筛)约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
25 mL甲醇，称定质量，超声处理 30 min，冷却后用甲
醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2. 4 线性关系的考察 取已配好的对照品溶液适
量分别稀释至含齐墩果酸 0. 05，0. 04，0. 03，0. 02，
0. 01 g·L － 1，熊果酸 0. 1，0. 08，0. 06，0. 04，0. 02 g·
L － 1，的对照品溶液。吸取上述混合对照品溶液 20
μL 进样，在 2. 1 项色谱条件下分析。以进样量为横
坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回
归计算，得齐墩果酸线性回归方程为 Y = 58 157X －
5 217. 2(r = 0. 999 9) ，线性范围为 0. 01 ～ 0. 05 g·
L － 1;熊果酸线性回归方程为 Y = 104 554X － 6 414. 3
(r = 0. 999 1) ，线性范围为 0. 02 ～ 0. 1 g·L － 1。
2. 5 精密度试验 精密吸取上述混合对照品溶液
20 μL，按 2. 1 项下色谱条件，连续进样 5 次，测定色
谱峰面积，结果齐墩果酸和熊果酸的 RSD 分别为
1. 51%，1. 63%，表明仪器的精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液
10μL，在 0，2，4，6，8，10 h 分别进样分析，按 2. 1 项
下色谱条件，测定色谱峰面积，结果齐墩果酸和熊果
酸的 RSD 分别为 0. 49%，0. 63%，表明供试品溶液
在 10 h 内保持稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取同一批样品各 5 份，按
2. 3 项下制备供试品溶液。精密吸取各供试品溶液
10 μL，按 2. 1 项所述色谱条件，测定色谱峰面积，结
果齐墩果酸和熊果酸的 RSD 分别为 1. 2%，0. 76%，
表明该方法的重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量的花锚药材粉
末 0. 5 g，精密称定，分别加入齐墩果酸和熊果酸混
合对照品溶液适量，制备高、中、低 3 种浓度的溶液
各 3 份，按 2. 1 项下色谱条件分析，进行回收率测
定，结果齐墩果酸的平均回收率为 101. 17%，RSD
1. 90%;熊果酸的平均回收率为 101. 79%，RSD
1. 65%，表明该方法准确度高，结果见表 1。
表 1 齐墩果酸和熊果酸加样回收率试验
成分
取样量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
齐墩 0. 500 7 0. 442 0. 35 0. 8045 102. 81 101. 17 1. 90
果酸 0. 500 2 0. 442 0. 7993 102. 15
0. 500 1 0. 442 0. 7814 97. 70
0. 500 4 0. 442 0. 44 0. 8861 100. 96
0. 500 4 0. 442 0. 8785 99. 23
0. 500 4 0. 442 0. 8945 102. 87
0. 500 1 0. 442 0. 54 0. 9971 103. 51
0. 500 5 0. 442 0. 9973 101. 59
0. 500 2 0. 442 1. 0104 99. 81
熊果酸 0. 500 7 1. 510 1. 22 2. 749 101. 93 101. 79 1. 65
0. 500 2 1. 508 2. 710 98. 80
0. 500 1 1. 508 2. 753 101. 63
0. 500 4 1. 509 1. 51 3. 024 100. 35
0. 500 4 1. 509 3. 038 101. 31
0. 500 4 1. 509 3. 044 101. 66
0. 500 1 1. 508 1. 82 3. 404 103. 29
0. 500 5 1. 509 3. 401 104. 76
0. 500 2 1. 508 3. 364 102. 35
2. 9 含量测定 取西藏昌都产不同批次的花锚药
材 1 g，精密称定后按 2. 3 项下方法制备供试品溶
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第 17 卷第 23 期
2011 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 23
Dec．，2011
液，以外标法计算齐墩果酸和熊果酸含量。结果见
表 2。
表 2 不同批次花锚药材中齐墩果酸和熊果酸含量测定
批次 取样量 / g 齐墩果酸 /% 熊果酸 /%
1 1. 000 3 0. 088 3 0. 303 4
2 0. 999 8 0. 117 0. 382
3 1. 000 7 0. 112 0. 460
4 1. 000 2 0. 118 0. 442
5 1. 000 8 0. 161 0. 433
6 1. 000 4 0. 136 0. 499
7 1. 000 9 0. 140 0. 353
8 1. 000 3 0. 109 0. 436
9 1. 000 8 0. 070 0. 346
3 讨论
3. 1 提取方法和提取溶剂的选择 考察了超声、加
热回流和索氏 3 种提取方式，结果显示，超声提取效
果好，方法简便、可行。同时还考察了超声提取时间
和溶剂，最终确定了药材的提取方式为甲醇超声提
取 30 min。
3. 2 色谱条件的选择 齐墩果酸和熊果酸互为同
分异构体，理化性质极为接近，较难分开，本实验考
察了不同流动相系统(甲醇-磷酸水，甲醇-乙腈-水，
乙腈-冰醋酸，乙腈-甲醇-冰醋酸)、不同柱温(20，
25，30，35 ℃)和流速(0. 8，1. 0 mL·min － 1)对这 2 种
成分分离度的影响，结果显示，温度对花锚药材中齐
墩果酸和熊果酸的分离度影响最大，低温会使组份
保留时间增强，增大分离度，因此本实验选择 20 ℃
为最佳柱温;流速降低，可以使两物质的保留时间延
长，分离度会有一定的提高，但是由于保留时间变长
会使色谱峰变宽，故本实验选择流速为 0. 8 mL·
min － 1，提高了分离度的同时尽量保持了良好的
峰型。
［参考文献］
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药品标准:藏药［S］．第 1 册 ． 1995．
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损伤小鼠的保护作用［J］． 中药新药与临床药理，2007
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［4］ 张进，王迎，孙启时 ． 花锚中三种口山酮苷对小鼠肝损伤
保护作用［J］．中国公共卫生，2009，05:587．
［5］ 包保全，孙启时，包巴根那 ． 花锚属植物植物化学成分
及生物活性研究进展［J］．中药材，2003，26(5) :382．
［6］ 田丽婷，马龙，堵年生 ． 齐墩果酸的药理作用研究概况
［J］．中国中药杂志，2002，27(12) :884．
［责任编辑 蔡仲德
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
］
简 讯
本刊近日接到美国化学文摘社中国文献处理中心通知，《中国实验方剂学杂
志》自 2012 年 18 卷第 1 期起继续作为美国化学文摘收录期刊。
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