全 文 ：HPLC测定花锚草及乙肝健片中 1 -羟基 3 ,4 ,5 -
三甲氧基 酮的含量
青海省妇女儿童医院(810007)　王　琼　　　　　　　　
甘肃省兰州药检所(730000)　杨　锡　倪　林　冯祥瑞
　　摘要　目的:建立 H PLC 法测定花锚草及乙肝健片中
1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基 酮含量的方法。 方法:采用
HPLC 法 , 使用 H ypersil C18 柱(5μm , 4. 6mm×250mm), 以
甲醇—0. 5%的磷酸(60 ∶40)为流动相 , 流速为 1. 0ml
min - 1 ,检测波长 243nm。结果:1 -羟基 3 , 4 , 5 -三甲氧基
酮在(0. 01416～ 0. 1062)μg(r=0. 9999)范围内与峰面积呈
良好的线性关系 ,平均回收率为 98. 3%, RSD=2. 07%(n=
6)。结论:本法简便 、快速 、结果满意 , 可作为花锚草及乙肝
健片质量控制的依据。
　　关键词　花锚草　乙肝健片　1 - 羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧
基 酮　HPLC
　　中图分类号　R927. 2
花锚草为龙胆科植物 ,是藏医用于治疗肝胆系统疾病的
常用植物药 ,现代研究证明含 酮 、黄酮和三萜类化合物 , 其
中以 1 -羟基 3 , 4 , 5 -三甲氧基 酮为代表的 酮类成分是
抗乙肝病毒的主要有效成分[1] ,以其为原料制成的乙肝健片
收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 , 具有利胆退
黄 ,改善肝功 , 调节免疫机能的作用 , 用于急慢性乙型肝炎和
其他肝炎的治疗。但原标准无含量测定法 ,难以有效地控制
药品质量 ,故我们采用 HPLC 法对花锚草及其制剂乙肝健片
中 1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基 酮的含量进行了测定 , 该法
简便快速 ,结果准确可靠 , 可作为花锚草及制剂定量控制指
标。
仪器与试药
LC - 2010A 型高效液相色谱仪(日本岛津);Mettle r AE
160 电子天平(瑞士);KQ - 250B 型超声波清洗器(昆仑市超
声仪器有限公司)。 1 - 羟基 3 , 4 , 5 -三甲氧基 酮对照品由
青海三普药业股份有限公司提供(用液相色谱归一化法测得
含量为 98. 6%);花锚草:由青海三普药业股份有限公司提供
(经鉴定为龙胆科植物椭叶花锚 Halenia elliptica D. Don 的
地上部分)甲醇为色谱纯 , 水为重蒸水 , 其它试剂均为分析
纯。乙肝健片:由青海三普药业股份有限公司提供。
方法与结果
1　色谱条件 　色谱柱:Hype rsil C18 柱(5μm , 4. 6 ×
250mm ,大连依力特色谱技术中心);流动相:甲醇—0. 5%的
磷酸溶液(60∶40),检测波长 243nm , 流速:1. 0 ml min- 1 :
柱温:30℃;进样量:10μL;理论塔板数按 1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三
甲氧基 酮峰计算应不低于 4 000。在此条件下 , 所得色谱
图见图1 、图 2 、图 3。结果表明 , 1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基
酮色谱峰分离良好 ,且阴性对照对测定结果无干扰。
90 青 海医药杂志 2 00 6年第3 6卷9期
图 3　1- 羟基 3 , 4 ,5 -三甲氧基 酮对照品
2　对照品溶液的制备　精密称取 1 -羟基3 , 4 , 5 -三甲氧基
酮对照品适量 ,加甲醇制成每1mL含 0. 08mg 的溶液,即得。
3　供试品溶液的制备　取本品 10 片 , 除去包衣 ,精密称定 ,
研细 ,混匀 , 精密称取 0. 5g(花锚草粉碎 , 精密称取 0. 5g), 置
具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50mL , 密塞 ,称定重量 ,超声提
取(功率 250W , 频率 50kH z)30 分钟 , 放冷 , 再称定重量 , 用
甲醇补足减失重量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 20mL , 用微孔滤膜
(0. 45μm )滤过 , 即得。
4　工作曲线与线性关系　分别精密吸取对照品溶液(2 、4、
6、8 、10、15)μL ,注入液相色谱仪 , 测定峰面积积分值 ,并以峰
面积积分值为纵坐标(A),相应浓度为横坐标(C), 进行线性
回归 ,得回归方程为:C=2. 086×10 - 7A + 4. 990×10- 3 ,
结果表明 1 - 羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基 酮在(0. 01416 ～
0. 1062)μg之间线性关系良好。
5　精密度试验　精密吸取对照品溶液 10μL , 注入液相色谱
仪 ,连续进样五次 , 测定峰面积积分值 , 计算相对标准偏差 ,
结果见表 1。
表 1　进 样 重 复 性
No 1 2 3 4 5 平均 RSD(%)
积分值 3 407 633 3 414 663 3 405 412 3 424 806 3 443 084 3 419 120 0. 45
6　加样回收率试验　精密称取已知 1 - 羟基 3 , 4 , 5 -三甲
氧基 酮含量的乙肝健样品适量(约相当于 0. 25g)6 份 , 精
密加入一定量的 1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基 酮对照品溶
液 ,照样品测定项下方法测定 、计算 ,结果见表 2。
表 2　加 样 回 收 率 试 验 结 果
称样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%) RSD(%)
0. 2338 1. 1026 1. 0000 2. 0606 95. 8
0. 2257 1. 0644 1. 0000 2. 0604 99. 6
0. 2279 1. 0653 1. 0000 2. 0608 99. 6
98. 3 2. 07
0. 2259 1. 0748 1. 000 2. 0802 100. 5
0. 2340 1. 1035 1. 0000 2. 0612 95. 8
0. 2451 1. 1559 1. 0000 2. 1618 98. 6
7　稳定性试验　取同一对照品溶液分别在 0h , 4h , 8h , 12h 进
行测定 ,峰面积基本不变 RSD为 0. 92%;取同一样品溶液分别
在0h , 4h , 8h , 12h 进行测定,峰面积基本不变 RSD为 1. 02%。
8　精密度试验　取同一浓度样品溶液 10μL 在相同色谱条
件下连续进样 ,记录峰面积 , 考察仪器精密度。结果 RSD 为
0. 86%。
9　样品测定结果　依法对花锚草及乙肝健样品进行测定 ,
结果见表 3。
表 3　样 品 测 定 结 果(n=4)
样品 花锚草(%) 乙肝健(mg /片)
批号 1 2 3 030908 030907 031003
含量 0. 19 0. 22 0. 25 1. 7 1. 6 1. 8
RSD(%) 1. 12 0. 98 1. 4 1. 65 1. 34 1. 22
讨　　论
1　检测波长的确定　取 1 -羟基 3 , 4 , 5 - 三甲氧基 酮对
照品用流动相溶解 , 在 200nm ～ 400nm 范围进行光谱扫描 ,
结果λmax为 243nm。
2　采用 H PLC 法测定　1 -羟基 3 , 4 , 5 -三甲氧基 酮的
含量 ,文献中有多种流动相可供选用[2] 。笔者比较了多种流
动相 ,以甲醇—0. 5%的磷酸(60∶40)为优 , 因其样品不用特
殊处理 ,分离效果却很好。
3　优点　本法简便 、快速 、灵敏 、重复性好 , 可作花锚草及制
剂的定量控制依据。
参　考　文　献
1　肖崇厚.中药化学.上海:上海科学技术出版社 , 1985 , 340.
2　国家药典委员会 ,编. 中华人民共和国药典(一部). 2000
年版. 北京:化学工业出版社 , 2000 , 555.
91 青海医药杂志2 0 06年第3 6卷9期