全 文 ：收稿日期:2003-02-11
作者简介:纪兰菊 ,女 ,副研究员 ,主要从事藏药药化研究工作 , Tel:(0971)6143282.
基金项目:国家中西部专项基金资助(2001BA901A47).
反相高效液相色谱法测定野生与栽培花锚药材及其制剂中
的花锚甙和去甲氧基花锚甙
纪兰菊1 , 　丁晨旭1 , 　陈桂琛1 , 　代冬海2 , 　杨艳蓉2
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 青海 西宁 810001;
2.青海普兰特藏药研究所 , 青海 西宁 810007)
摘要:建立了花锚药材及其制剂中两种抗肝炎有效成分花锚甙和去甲氧基花锚甙的反相高效液相色谱测定方法。
采用甲醇回流提取进行样品处理 ,在乙腈-磷酸水溶液为流动相作梯度洗脱 、ODS柱 、检测波长为254 nm条件下 , 花
锚甙和去甲氧基花锚甙均可达到基线分离。两种成分在 0.68～ 3.40 g/L , 0.36～ 1.8 g/ L时 ,其峰面积与浓度成良好
的线性关系 ,加标回收率为 95%～ 105%。该法适用于花锚药材及其制剂的质量分析检验。
关键词:高效液相色谱;花锚甙;去甲氧基花锚甙;花锚;乙肝健片
中图分类号:O658　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-8713(2004)01-0038-03
Determination of Haleniaside and Demethoxyhaleniaside in Wild
and Cultivated Halenia ellipitica D .Don .by Reversed-
Phase High Performance Liquid Chromatography
JI Lanju1 , DING Chenxu1 , CHEN Guichen1 , DAI Donghai2 , YANG Yanrong2
(1.Northwest Plateau Institute of Biology , The Chinese Academy of Sciences , Xining 810001 , China;
2.Qinghai Plateau Institute of Tibet Herbs , Xining 810007 , China)
Abstract:A simple and accurate method for the determination of haleniaside and demethoxyhaleni-
aside in Halenia ellipitica D .Don .materials and patent medicines with high performance liquid
chromatography(HPLC)was developed.The two components were extracted from powdered sam-
ples with methanol.The resultant extract was separated within 45 min on a VP-ODS C18 column(4.6
mm i.d.×250 mm , 5 μm)under gradient elution with a mixture of acetonitrile-phosphate buffer at
a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 254 nm and the injection volume was 20
μL.Under gradient elution program the volume fractions of acetonitrile in mobile phase were as fol-
lows:0-5 min , 12%;5-15 min , 12%-15%;15-40 min , 15%-35%.Both haleniaside and de-
hydrohaleniaside have good linearity in the ranges of 0.68-3.40 g/L and 0.36-1.8 g/L with corre-
lation coefficients of 0.999 8 and 0.999 0 respectively.This method has been successfully applied to
the analysis of Halenia ellipitica D .Don materials and related patent medicines.
Key words:high performance liquid chromatography;haleniaside;demethoxyhaleniaside;
Halenia ellipitica D .Don ;Yiganjian tablet
　　花锚 、椭圆叶花锚(Halenia ellipitica D .Don)
为龙胆科(Gentianaceae)花锚属植物 ,为藏医药系
统中用于治疗肝胆系统疾病的常用植物药之一 ,泛
称“藏茵陈” 。主要分布于青藏高原 ,为藏药习用药
材 ,全草入药。花锚中主要化学成分为 酮(xan-
thone)、黄酮(flavone)和三萜(triterpene)类化合物 ,
已经分离鉴定了 15种 酮和黄酮成分[ 1～ 3] ,其中主
要抗肝炎有效成分为 酮类成分花锚甙(halenia-
side)和去甲氧基花锚甙(demethoxyhaleniaside)[ 1] 。
由花锚为主药材研制 、开发的成品药乙肝宁 、急肝
宁 、乙肝健等 ,具有疗效稳定 、效率高等特点 ,市场前
景广阔。目前 ,生产用药材及制剂的质量标准检测
方法为薄层展开和比色法 ,测定其总 酮成分的含
量[ 4] 。本文采用高效液相色谱-二极管阵列检测方
法 ,以花锚药材与制剂中主要抗肝炎有效成分花锚
甙与去甲氧基花锚甙为指征性成分 ,对同一地区生
2004年 1月
January 2004
色 谱
Chinese Journal of Chromatography
Vol.22 No.1
38 ～ 40
长的野生花锚和栽培花锚及其制剂进行了含量测
定。结果表明该方法简便 ,准确 ,重复性好 ,具有足
够的灵敏度 ,适用于花锚药材及其制剂中花锚甙和
去甲氧基花锚甙含量的同时测定。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂 、材料与标准品的配制
　　LC-10ATVP二元泵 、SPD-M10AVP 二极管阵列
检测器 、Class-VP 液相色谱工作站(日本岛津);
Rheodyne 7725进样器(美国);2200B超声波仪;Mil-
li-Q超纯水装置;C18硅胶小柱(1 mL ,Waters)。
　　花锚甙 、去甲氧基花锚甙对照品由中国科学院
西北高原生物研究所孙洪发教授提供;野生花锚药
材自行采集(花后期);栽培花锚药材采集自栽培基
地 青海省湟中县群加乡;乙肝健为市售品 。
HPLC级乙腈购自美国 Tedia公司;分析纯甲醇 、磷
酸购自上海化学试剂公司 。
　　分别精密称取花锚甙和去甲氧基花锚甙对照
品 ,用甲醇精确配制对照品溶液。
1.2　色谱条件
　　色谱柱:VP-ODS C18柱(4.6 mm i.d.×150 mm ,
5 μm ,岛津)。检测波长 254 nm 。进样体积 20 μL。
流动相由乙腈和体积分数为 1%的磷酸水溶液组
成 ,流速1.0 mL/min;梯度洗脱程序为:0 ～ 5 min ,乙
腈的体积分数(下同)为 12%;5 ～ 15 min , 乙腈由
12%线性增加至 15%;15 ～ 40 min ,乙腈由 15%线性
增加至35%。
1.3　花锚药材及其制剂的提取
　　花锚药材:取超微粉碎后的药材粉末约 1 g ,精
密称定 ,置于 100 mL锥形瓶中 ,加甲醇 20 mL ,水浴
80 ℃回流 2 h;过滤 ,滤液于 25 mL 容量瓶中用甲醇
定容 ,摇匀 ,经 C18硅胶小柱做净化处理 ,即先用 5
mL 甲醇预淋洗 C18硅胶小柱 ,然后将样品提取液直
接上柱 ,弃去初滤液后 ,收集续滤液上机分析 。
　　乙肝健片:取 20粒药片 ,除去糖衣 ,在研钵中研
细 ,按照与药材同样的处理方法处理。
2　结果与讨论
2.1　不同提取方法的比较
　　由于花锚中 酮甙的甙键较弱 ,不宜采用酸碱
和高温提取方法 ,因此选用甲醇作为提取溶剂 ,采用
超声和甲醇回流两种方法提取相同的时间 ,进行比
较试验。测定结果显示 ,超声提取时 ,药材中花锚甙
和去甲氧基花锚甙的含量分别为 0.030%和
0.042%,甲醇回流提取分别为 0.047%和 0.087%,
因此实验中选用甲醇回流提取方法 。
2.2　色谱分离
　　分别对花锚甙和去甲氧基花锚甙的对照品进行
了测定波长选择 ,发现在 254 nm 处 ,花锚甙与去甲
氧基花锚甙均有较大的吸收 ,因此选择254 nm作为
这两种 酮甙的测定波长。
　　经反复试验 ,选定乙腈-磷酸水溶液系统作为流
动相 ,随着流动相中乙腈浓度的增加 , 洗脱能力增
强 ,去甲氧基花锚甙(图 1-b)及花锚甙(图 1-a)的出
峰时间分别为 22和 28 min ,且峰形对称 ,药材与制
剂色谱图(图 1-c ,d)中的其他化合物基本达到基线
分离。表明这两种有效成分均能得到良好的分离。
图 1　几种样品的色谱分离图
Fig.1　Chromatograms of samples
a.haleniaside standard;b.demethoxyhaleniaside standard;c.
wild Halenia ellipictica D.Don;d.Yiganjian tablet
1.haleniaside;2.demethoxyhaleniaside.
2.3　线性关系
　　分别精密吸取花锚甙(3.4 g/L)和去甲氧基花
锚甙(1.8 g/L)对照品溶液各 1 ,2 ,3 ,4 mL ,用甲醇定
容为 5 mL。取上述不同质量浓度的花锚甙和去甲
氧基花锚甙对照品溶液各 20 μL ,分别进样 ,测定其
峰面积 ,以峰面积 Y(n =3)对质量浓度X(mg/L)作
图 ,得到线性回归方程:花锚甙为 Y =-106 848+
2914 082X , r =0.999 8;去甲氧基花锚甙为 Y =
119 868.5+3 561 361.9X , r =0.999 0;由此可见两
种 酮甙分别在 0.68 ～ 3.40 g/L和 0.36 ～ 1.8 g/L具
有良好的线性。
2.4　方法精密度与重现性
　　取一混合对照品溶液(含 0.85 g/L 花锚甙 ,
0.045 g/L 去甲氧基花锚甙)进样 ,每次 20μL ,重复 5
次;花锚甙峰面积的相对标准偏差(RSD)为 1.7%,
·39·　第 1期 纪兰菊等:反相高效液相色谱法测定野生与栽培花锚药材及其制剂中的花锚甙和去甲氧基花锚甙
去甲氧基花锚甙峰面积的 RSD为 2.98%。
　　精密称定同一批样品 ,按“1.3”节方法制备 5份
供试品溶液 ,分别测定 ,结果花锚甙含量的 RSD 为
4.89%,去甲氧基花锚甙含量的 RSD为 4.70%。
2.5　回收率试验
　　取已知含量的药材适量 ,加入一定量的花锚甙 、
去甲氧花锚甙对照品 ,按样品制备方法制备 ,依法测
定 ,测得回收率如表 1所示。
表 1　花锚甙和去甲氧基花锚甙回收率试验结果(n=5)
Table 1　The recoveries of haleniaside and demethoxyhaleniaside(n=5)
Component Background/(mg/ g) Added/(mg/g) Found/(mg/ g) Average recovery/ % RSD/ %
Haleniaside 0.88 1.0 1.89 101 2.6
Demethoxyhaleniaside 1.55 1.4 2.94 99.3 3.6
2.6　实际样品分析
　　用此法对青海省群加 、海东地区的野生及栽培
花锚甙药材和乙肝健制剂中的花锚甙及去甲氧基花
锚甙进行了测定 ,含量分布见表2 。
表 2　实际样品中花锚甙和去甲氧基花锚甙的质量分数(n=2)
Table 2　The mass fractions of haleniaside and
demethoxyhaleniaside in real samples(n=2)
Sample
w(Component)/ %
haleniaside demethoxyhaleniaside
Wild(Qunjia) 0.088 0.155
Cultivated(Qunjia) 0.082 0.086
Wild(Haidong) 0.009 0.011
Cultivated(Haidong) 0.027 0.037
Yiganjian tablet 0.003 0.016
结果表明 ,本实验方法不仅适用于花锚药材的分析 ,
同样也适用于花锚制剂的分析。
参考文献:
[ 1] 　Sun Hongfa, Hu Bolin , Ding Jingye , Fan Shufen.Acta Botanica
Sinica(孙洪发 , 胡伯林 , 丁经业 , 樊淑芬.植物学报), 1987 ,
29(4):422
[ 2] 　Hu Bolin , Sun Hongfa , Fan Shufen , Ding Jingye.Acta Biologica
Plateau Sinica(胡伯林 , 孙洪发 , 樊淑芬 , 丁经业.高原生物
学集刊), 1984, (2):121
[ 3] 　Sun Hongfa, Hu Bolin , Fan Shufen , Ding Jingye.Acta Botanica
Sinica(孙洪发 , 胡伯林 , 樊淑芬 , 丁经业.植物学报), 1983 ,
25(5):460
[ 4] 　The Qinghai Ministry of Sanitation.The Standards of Medicines in
Qinghai(青海省卫生厅.青海省药品标准).1992.19
河北省津杨滤材厂
　　河北省津杨滤材厂已有二十多年的历史 ,是我国最早生产
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