全 文 ：　　第 26卷增刊
2007年 9月　
分析测试学报
FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)
Vol. 26
Sep.2007　　
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30572254)
藏药绵参化学成分的 HPLC-MSn分析
张　松1 , 白　央 2 , 达娃卓玛 2 , 彭树林 1 , 周　燕 1 , 丁立生1
(1.中国科学院成都生物研究所 , 四川　成都　610041;2.西藏自治区食品药品检验所 , 西藏　拉萨　850000)
　　藏药绵参 EriophytonwalichiBenth为唇形科绵参属多年生草本植物 , 生长于海拔 3 400硂 4 700m
的高山流石滩中 , 主要分布于尼泊尔 、锡金和我国的青藏高原地区。该植物是一种传统的藏药材 , 藏
药经典 《蓝琉璃 》 曾将其记载为邦参布柔(藏语译音)。该藏药材性寒 、味苦 , 有清热 、止咳 、祛痰 、
排脓 、 疗伤接脉等功效 , 主治肺脓肿 、肺结核 、脏腑内伤等症 [ 1] 。易进海等曾对植物的化学成分进行
了分离纯化和结构鉴定[ 2-3] 。本文首次报道对绵参药材醇提物的 HPLC-MSn分析 , 根据紫外吸收和串
联质谱分析推测出 7个主要的化学成分 , 其中 2个成分通过与标准品对照得到证实。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
FinniganLCQDECA型液相色谱 -质谱联用仪(ThermoFinnigan, SanJose, CA, USA)。 HPLC用色谱
纯甲醇为 Tedia产品 , 蒸馏水使用 MiliporeMili-QSP(Milipore, France)纯水系统制备。
1.2　样品处理
绵参药材由西藏自治区食品药品检验所采集和鉴定 。取 5 g绵参样品粉碎 , 用 100 mL95%乙醇室
温超声波提取 1h, 浓缩后经 MCI树脂柱除去其中的大部分色素得到浸膏 , 取浸膏 1.0 mg溶于 2.0 mL
甲醇 , 使用 0.22μmPTFE滤纸过滤所得溶液供 HPLC-MSn分析。
1.3　实验条件
1.3.1　色谱条件　色谱柱:AichromBond-AQ(250×4.6 mm;5 μm)C18柱 。进样量:10 μL;流速:
1.00mL/min;甲醇 -水梯度洗脱:15% -30%-50%-100%MeOH(0-10-28-40 min);PDA紫外
检测波长:200硂 400 nm;采用 1/2分流进入质谱电离源。
1.3.2　质谱条件 　ESI离子源 , 正 、 负离子检测 , 采用全离子扫描 , 扫描范围 m/z:100硂 2 000。
MSn碰撞能量(碰撞气体为氦气):35 % -45 %(n=1硂 3);源电压:4.5 kV, 鞘气 (N2)流速:
50 au;辅助气流速:20au;毛细管温度:300℃;毛细管电压:15.0 V。
2　结果与讨论
2.1　样品分析
通过对各种色谱条件的比较和优化 , 在上述色谱条件下得到较好的 HPLC色谱图(图 1), 图中 8
个主要成分峰得到了完全分离。通过对这 8个峰的紫外色谱图 , 正 、负离子 ESIMS以及串联质谱分
析 , 对其相应的化学结构推测如下。
图 1　绵参醇提物的 HPLC色谱图
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　　第 8期 分析测试学报 增刊　　
2.2　化合物结构的推测
色谱峰 1的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z375, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
H] +在 m/z377, 提示该化合物的相对分子质量为 376。其紫外最大吸收波长为 234 nm, 提示分子中可
能含有共轭双键 。负离子二级质谱有一个主要碎片离子 m/z213 [ M-H-162] - , 正离子二级质谱也
出现一个相应的主要碎片离子 m/z215 [ M+H-162] + , 提示分子中含有 1个六碳糖单元。以 m/z213
为母离子的负离子三级质谱中出现 m/z169 [ M-H-162-CO2 ] -的碎片 , 提示分子中可能含有羧基 。
将其与标准品 8-表马钱子酸葡萄糖苷 [ 3]的串联质谱 、 UV以及保留时间对照均吻合 , 故将其鉴定为该
化合物 。
色谱峰 2的(-)ESIMS给出准分子离子峰 [ M-H] -为 m/z771, 提示其相对分子质量为 772。紫
外出现 2个最大吸收波长为 236和 329 nm, 提示有较大的共扼体系 , 参考相关文献推测可能为黄酮化
合物。二级质谱出现脱去一个六碳糖基的主要碎片离子 m/z609([ M-H-162] -)和丰度较低的碎片离
子 m/z463([ M-H-308] -, 脱去连接有咖啡酰基的六碳糖基团)。以 m/z609为母离子的 MS3中 , 出
现 m/z301([ M-H-162-308] -, 脱去一个连接咖啡酰基的六碳糖)的碎片 。结合相关文献报道 , 推
测其为 3-O-glucosyl-3′-hydroxyl-apigenin7-O-(6″-p-coumaroyl)glucoside[ 4] 。
色谱峰 3的(+)ESIMS给出准分子离子峰 [ M+Na] +m/z413, 提示其相对分子质量为 390。紫外
最大吸收波长仅为 218nm, 说明分子中不含有共轭双键 。二级质谱出现脱去乙酸中性分子的碎片峰 m/
z353([ M+Na-CH3COOH] +)。以其为母离子的三级质谱中出现 m/z191([ 353-162] +)的碎片。结
合相关文献 , 推测该化合物为 ajugoside[ 6] 。
色谱峰 4的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z623, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
Na] +在 m/z647, 提示其相对分子质量为 624。紫外最大吸收波长为 234、 330nm, 提示其为黄酮醇类
化合物 。负离子二级质谱出现脱去六碳糖的主要碎片离子 [ M-H-162] -在 m/z461, 以及丰度较低
的碎片离子 [ M-H-146] -在 m/z477(脱去咖啡酰基), 正离子二级质谱出现主要碎片离子 [ M+Na
-146] +在 m/z501;以 m/z461为母离子的 MS3中 , 出现 m/z315 [ M-H-162-146] -(先脱去一个
六碳糖 , 再脱去一个连接咖啡酰基的六碳糖)以及 m/z151(黄酮 C环开环得到)的碎片 [ 5] 。推测该化合
物为 7-O-E-p-coumaroylchrysoeriol3-O-β-D-glucoside[ 7] 。
色谱峰 5的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z609, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
Na] +在 m/z633, 提示其相对分子质量为 610。紫外最大吸收波长为 254和 350 nm, 提示其为黄酮醇
化合物 。负离子二级质谱出现主要峰 m/z301 [ M-H-308] -(脱去连接有咖啡酰基的六碳糖基团),
正离子二级质谱出现主要峰 m/z331 [ M+Na-302] +。以 m/z301为母离子的 MS3中 , 出现 m/z271
[ M-H-308-CH2O] -及 m/z151(由黄酮 C环开环得到)的碎片[ 5] 。从上述信息并参考文献推测该化
合物为 helichrysoside[ 8] 。
色谱峰 6的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z582, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
H] +在 m/z584, 提示其为相对分子质量 583的生物碱类化合物。因无相关文献报道 , 故未推测其结
构 。
色谱峰 7的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z579, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
H] +在 m/z581, 提示其相对分子质量为 580。紫外最大吸收波长为 292和 308 nm, 提示其为二氢黄酮
类化合物 。负离子二级质谱出现主峰 m/z271 [ M-H-308] -(脱去连接有咖啡酰基的六碳糖基团),
以其为母离子的 MS3中 , 出现 m/z151的碎片(由黄酮 C环开环得到)[ 5] 。推测其为 2, 3-dihydrogen-
apigenin7-(6″-p-coumaroyl)glucoside[ 9] 。
色谱峰 8的(-)ESIMS准分子离子峰 [ M-H] -在 m/z577, (+)ESIMS准分子离子峰 [ M+
H] +在 m/z579, 提示相对分子质量为 578。紫外最大吸收波长为 268和 360nm, 提示其为黄酮化合
物 。负离子二级质谱有一个主要峰 m/z269 [ M+H-308] -(脱去连接有咖啡酰基的六碳糖基团)和丰
度较高的峰 m/z307 [ M-H-270] -, 正离子二级质谱出现主峰 m/z271 [ M+H-308] +。以 m/z269
为母离子的 MS3中 , 得到 m/z151(黄酮 C环开环得到)的碎片 [ 5]和 m/z225 [ M-H-308-CO2 ] -的碎
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片 [ 10] 。由上述信息推测该化合物为 apigenin7-(6″-p-coumaroyl)glucoside[ 3] , 通过与标准品对照串联质
谱 、 UV以及保留时间证实的确为该化合物 。
参考文献:
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AnalysisofConstituentsofEriophytonwalichibyHPLC-MSn
ZHANGSong1 , BAIYang2 , DA-WAZhuo-ma2 , PENGShu-lin1 ,
ZHOUYan1 , DINGLi-sheng1
(1.ChengduInstituteofBiology, ChineseAcademyofSciences, Chengdu　610041, China;
2.TibetAutonomousRegionInstituteforFoodandDrugControl, Lasa　850000, China)
Abstract:TheconstituentsfromtheaerialpartsofEriophytonwalichiwereanalyzedbyHPLC-MSn.Atotal
of7 peaksinthechromatogramswereidentifiedbasedonthedetailedUVandtandemmassspectraanalysis.
Twoofthemwereconfirmedbycomparisonretentiontimewiththoseofauthenticsamples.
Keywords:Eriophytonwalichi;Constituent;HPLC;Tandemmassspectrometry
(上接第 165页)
HPLC-MS/MSAnalysisofCoumarinsintheExtractofYubaizhi
CAIMin1, 2 , ZHOUYan1 , YUShi-tao2 , GUANYan-li1 , LIANGJian1
(1.ChengduInstituteofBiology, ChineseAcademyofSciences, Chengdu　610041, China;
2.HubeiBiotechnologyofTraditionalChineseMedicineKeyLaboratory, HubeiUniversity, Wuhan　430062, China)
Abstract:ThemainconstituentsoftheextractfromYubaizi(therootsofAngelicadahurica)wereanalyzedby
HPLC-MS/MSmethod, andatotalofsixcumarinswereunequivocalydetermined.Thefragmentationpat-
ternsofthecumarinswerefoundusefulfortheircharacterization, andtherelativecontentsofthesixcompounds
werealsocalculated.
Keywords:Yubaizhi;Angelicadahurica;Coumarin;HPLC-MS/MS
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