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肾茶对大鼠C-BSA慢性肾炎模型治疗作用的实验研究



全 文 :3 讨论
转氨酶含量增高,则表明肝细胞损害加重,大多数
肝病 ALT、AST的变化基本一致。本实验观察到,与模
型组相比,树莓茎水提物高剂量组 ALT、AST 下降,差
异有统计学意义。NO 是一种有信息传递和各种生物
效应功能的介质,微量的 NO能使血管舒张,改善组织
微循环,对组织具有保护作用,但是过量的 NO 又能导
致炎症介质的大量分泌,进而诱导生成氧自由基,使细
胞受到损伤并发生脂质过氧化,引起细胞损伤[3]。本
实验观察到与模型组比较,树莓茎水提物高剂量组小
鼠血清中 ALB含量明显升高,NO含量明显降低,差异
有统计学意义。以上结果表明树莓茎对肝细胞具有保
护作用。
机体通过酶系统与非酶系统产生自由基,自由基
能通过攻击生物膜上的多不饱和脂肪酸,引发脂质的
过氧化作用,从而形成脂质过氧化物,可破坏细胞膜结
构,引起细胞损伤,如丙二醛(MDA)。因此测定 MDA
的含量可反映脂质过氧化的程度,即可间接反映出细
胞损伤的程度[4 - 5]。超氧化物歧化酶(SOD)是一种能
催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的
酶,是一种重要的抗氧化剂。SOD 具有的特殊活性使
之成为生物体内清除自由基的首要物质,SOD 在生物
体内的水平高低是机体衰老与死亡的直观指标。现已
证实,由氧自由基引发的疾病多达 60 多种。SOD可对
抗自由基对细胞造成的损害,并可修复受损细胞[6]。
本实验显示,树莓茎水提物高剂量组与模型组相比,
SOD水平上升,MDA 水平下降,差异有统计学意义。
说明树莓茎能够减缓并阻止膜的脂质过氧化反应,减
少丙二醛的生成,增强机体抗脂质过氧化的功能。
参考文献:
[1] 刘丹卓,赵广新.肝损伤的现代医学研究进展与展望[J].贵阳中
医学院学报,2007,29(3):50 - 51.
[2] 韩晓波,陈晶.树莓对肝损伤的保护作用及机制的研究现状[J].
中医药学报,2014,42(3):158 - 161.
[3] 蒋莉,李跃华.丹参素对内毒素性肝损伤的防护作用及其机制的
研究[J].中西医结合肝病杂志,1999,9(2):30.
[4] 喻宁华,曾富华,饶力群.仙人掌多糖对小鼠及性肝损伤的保护作
用研究[J].中国生化药物杂志,2009,30(4):255 - 258.
[5] 孙树凯,翟玉斌.青阳参总苷对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用
[J].青岛大学学报,2012,48(2):148 - 150.
[6] 王君明,崔瑛,王峥涛,等. 超氧化物歧化酶参与肝损伤的研究进
展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(7):
檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲
265 - 269.
肾茶对大鼠 C - BSA慢性肾炎模型治疗作用
的实验研究
刘旭航1,李光2,邹韬博1,赵旭1,刘斌1,张宁1
(1.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040;2.中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南 景洪 666100)
摘 要:目的:研究肾茶对大鼠 C - BSA慢性肾炎的治疗作用。方法:用天然牛血清蛋白( C - BSA) 制备
大鼠肾炎模型,以雷公藤多苷片作对照药物,观察肾茶( 水提取和 50%乙醇提取物) 对大鼠肾炎模型
24h尿蛋白及血清肌酐、尿素氮的影响,并制作肾脏病理切片,经 HE 染色后在光镜下观察其病理形态。
结果:肾茶能明显降低 C - BSA肾炎模型大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平( P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,
光镜下观察发现给药组肾脏病变形态明显减轻。结论:肾茶对大鼠 C - BSA 肾炎模型具有良好的治疗
作用,有望成为治疗慢性肾炎的候选植物药。
关键词:肾茶;慢性肾小球肾炎; 阳离子化牛血清白蛋白
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2014)06 - 0012 - 04
基金项目:黑龙江省自然科学基金面上项目(No. D201328);北京协和医学院协和青年基金项目(No. XHYN - 01);中央级公益性科研院所基本科研
业务专项 (No. YZYN -11 - 03,YZYN -13 - 02)
作者简介:刘旭航(1983 -),男,黑龙江中医药大学 2011 级中医内科学专业硕士研究生。
通讯作者:张宁(1974 -),男,中药学博士,副教授,硕士研究生导师,主要从事中药药效物质基础及体内代谢研究工作。
收稿日期:2014 - 06 - 11
修回日期:2014 - 07 - 12
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Information on Traditional Chinese Medicine
2014 年 11 月第 31 卷第 6 期
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Experimental Study on the Therapeutic Effect of Clerodendranthus
Spicatus on C - BSA Chronic Glomerulonephritis of Model Rats
LIU XU - hang1,LI Guang2,ZOU Tao - bo1,ZHAO Xu1,LIU Bin1,ZHANG Ning1
(1. Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China;2. Yunnan Branch,
Institute of Medicinal Plant,Chinese Academy of Medical Sciences,Jinghong 666100,China)
Abstract:Objective:To study the therapeutic effect of clerodendranthus spicatus on C - BSA chronic nephritis
of rats. Methods:Use natural bovine serum albumin (C - BSA)for the preparation of model rats with nephri-
tis,tripterygium glycosides tablet as control medicine,observe effects of clerodendranthus spicatus (water ex-
tract and 50% ethanol extract)on nephritis model rats in the aspects of urine protein and serum creatinine,u-
rea nitrogen in 24 hours and produced renal biopsy,observe the pathological morphology under light micro-
scope after HE staining. Results:Clerodendranthus spicatus could significantly decrease urinary protein,serum
creatinine and urea nitrogen of C - BSA nephritis rats(P < 0. 05 or P < 0. 01). Pathological features of renal
lesion in the medicine group were significantly reduced under light microscopy observation. Conclusion:Clero-
dendranthus spicatuson has good therapeutic effects on C - BSA nephritis model rats,and it is expected to be-
come a candidate plant medicine for the treatment of chronic nephritis.
Key words:Clerodendranthus spicatus;Chronic glomerulonephritis;Cationization bovine serum albumin
慢性肾小球肾炎(chronic glomer ulonephritis,
CGN)简称慢性肾炎,是由多种原因引起的、多种病理
类型组成的原发于肾小球的一组临床常见疾病[1]。
现代医学常使用免疫抑制剂和激素类药物治疗该病,
但其副作用多,毒性大,且依然有部分患者难以取得满
意疗效,最终导致肾脏功能衰竭而依赖肾脏替代治疗。
肾茶(又名猫须草、猫须公、雅努妙)为傣族群众
常用草药,因其形似猫须而得名“猫须草”,有清热利
湿、排石利水、清火解毒、凉血止血之功效,民间用于治
疗急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石等疾病的效果不
俗[2]。但实验研究报道甚少,本实验采用大鼠 C -
BSA肾炎模型来观察肾茶对慢性肾炎的治疗作用,为
其广泛应用于临床提供理论依据。
1 实验材料
1. 1 动物
SD大鼠 60 只,雌雄各半,体质量(200 ± 15)g,由
黑龙江中医药大学实验动物中心提供,合格证号:
SCXK黑 2008 - 004。
1. 2 药品
肾茶购自云南西双版纳南药园,经李学兰研究员
鉴定为肾茶[Clerodendranthus spicatus(thunb)C. Y.
Wu ex H. W. Li];雷公藤多苷片(10mg /片,黄石飞云
制药有限公司,批号 42021212)。
1. 3 仪器及试剂
血清肌酐试剂盒(批号 20120407)、尿素氮试剂盒
(批号 20120907)(南京建成生物工程研究所) ;弗氏不
完全佐剂、无水乙二胺、牛血清白蛋白(上海阿拉丁公
司);其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2. 1 给药样品制备
2. 1. 1 肾茶水提取物的制备
对肾茶进行初步处理后,将其切段、粉碎,用水煮
沸 3 次,每次 2h,在 30 ~ 100℃温度下浸提 2h,过滤后
将 3 次的滤液合并,然后在 40 ~ 100℃下将滤液减压
浓缩至密度 1. 01 ~ 1. 50g /ml,再在 40 ~ 100℃进行干
燥喷雾。
2. 1. 2 肾茶 50%乙醇提取物的制备
对肾茶进行简单加工后,称取肾茶样品,置于圆底
烧瓶中,对肾茶进行回流提取,提取完成后,待料液冷
却后过滤,蒸干,在 40 ~ 100℃进行干燥喷雾。
2. 2 大鼠 C - BSA模型制备
采用 Border 的方法改良进行[3]。制备浓度为
2mg /ml及 1mg /ml的两种 C - BSA溶液,取 2mg /ml的
C - BSA溶液,于大鼠的背后、腋下及腹股沟作多点皮
下注入,每次注射 1ml。1 周后,取大鼠隔日尾静脉注
射浓度为 1mg /ml 的 C - BSA 溶液,初始注射 0. 5ml,
隔日注射 1 次,注射时的注射量逐渐递增,直至递增至
2. 5ml,共 4 周。
2. 3 分组、模型及给药
造模成功后,将大鼠随机分成空白组、给药Ⅰ组、
给药Ⅱ组、阳性对照组及模型组,每组 10 只。给药量
计算使用的体表面积计算法,给药Ⅰ组给予肾茶水提
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取物溶液 6. 3mg /(kg·d),给药Ⅱ组给予肾茶醇提取物
溶液 6. 3mg /(kg·d),阳性对照组给予雷公藤多苷片
6. 3mg /(kg·d),模型组与空白组给予等量生理盐水灌
胃,每日 1 次,持续 4 周。
2. 4 生化指标
2. 4. 1 24h尿蛋白量水平的测定
分别于造模完成后、给药治疗第 1 周、给药治疗第
2 周、给药治疗第 4 周时测定,每次将大鼠置于代谢笼
中收集 24h尿量,使用半自动生化分析仪检测尿蛋白
水平。
2. 4. 2 BUN、Cr水平的测定
给药治疗第 4 周后于大鼠眼内眦取血 1 ~ 3ml,进
行处理,用试剂盒检测大鼠的 BUN、Cr水平。
2. 5 病理形态检查
取肾脏组织,用 PBS 冲洗干净,除去表面包膜,置
于 10%福尔马林溶液中固定,乙醇逐级脱水,石蜡包
埋,制成 3 ~ 4μm 厚的切片,进行 HE 染色,镜下观察
其病理变化。
2. 6 统计学处理
采用 SPSS 18. 0 数据软件进行分析,计量资料以
(珋x ± s)表示,组间比较采用 t 检验,P < 0. 05 为差异具
有统计学意义。
3 结果
3. 1 24h尿蛋白水平比较
与空白组比较,模型组尿蛋白水平明显升高,并随
时间呈现逐渐升高的趋势,差异显著(P < 0. 01),显示
造模成功。给药治疗第 2 周后,模型组大鼠尿蛋白水
平明显升高,与空白组比较有显著差异(P < 0. 01)。
与模型组比较,各治疗组的尿蛋白水平呈现下降趋势,
治疗第 2 周后差异显著(P < 0. 01)。肾茶治疗组尿蛋
白水平与阳性对照组比较无显著差异(P > 0. 05),治
疗效果与阳性药相当。结果见表 1。
表 1 实验大鼠 24h尿蛋白结果(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 造模完成
给药治疗
第 1 周
给药治疗
第 2 周
给药治疗
第 4 周
空白组 43. 4 ±11. 82) 44. 2 ±14. 22) 43. 6 ±13. 52) 45. 5 ±12. 82)
模型组 141. 5 ±30. 51) 150. 6 ±32. 61) 174. 4 ±35. 31) 188. 5 ±36. 21)
给药组Ⅰ 140. 8 ±31. 21) 134. 8 ±33. 41) 120. 1 ±32. 31) 98. 6 ±36. 82)
给药组Ⅱ 142. 6 ±32. 71) 135. 6 ±34. 11) 122. 5 ±34. 91) 97. 7 ±35. 22)
阳性对照组 141. 9 ±35. 71) 133. 5 ±32. 61) 121. 7 ±31. 51) 97. 8 ±34. 92)
注:与空白组比较,1)P < 0. 01;与模型组比较,2)P < 0. 01。
3. 2 血清肌酐、尿素氮水平比较
与空白组比较,模型组大鼠血清 BUN、Cr 水平均
升高,差异显著(P < 0. 01)。与模型组比较,各治疗组
血清 BUN、Cr水平均显著降低,差异显著(P < 0. 01);
肾茶治疗组血清 BUN、Cr水平与阳性对照组比较无显
著差异(P > 0. 05),治疗效果与阳性药相当。结果见
表 2。
表 2 对大鼠 Cr,BUN水平的影响(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 Cr(μmol /L) BUN(mmol /L)
空白组 70. 315 ± 8. 6062) 5. 941 ± 1. 4432)
模型组 138. 903 ± 13. 1281) 11. 104 ± 2. 1241)
给药组Ⅰ 80. 317 ± 8. 1012) 7. 313 ± 0. 6632)
给药组Ⅱ 80. 896 ± 7. 3912) 7. 737 ± 0. 7322)
阳性对照组 81. 866 ± 8. 6952) 7. 639 ± 1. 1182)
注:与空白组比较,1)P < 0. 01;与模型组比较,2)P < 0. 01。
3. 3 甘油三酯、总胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇水平
比较
与空白组比较,模型组大鼠血清 TG,TC,LDL - C
水平均升高,差异显著(P < 0. 01)。与模型组比较,各
治疗组 TG,TC,LDL - C 水平均显著降低,差异显著
(P < 0. 01);肾茶治疗组血清 TG,TC,LDL - C 水平与
阳性对照组比较无显著差异(P > 0. 05),治疗效果与
阳性药相当。结果见表 3。
表 3 对大鼠 TG,TC,LDL - C水平的影响(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 TG TC LDL - C
空白组 0. 642 ± 0. 1322) 1. 342 ± 0. 132 1. 221 ± 0. 2322)1)
模型组 1. 556 ± 0. 243 1. 931 ± 0. 2431) 2. 431 ± 0. 2431)
给药组Ⅰ 0. 723 ± 0. 237△ 1. 423 ± 0. 2372)▲1. 313 ± 0. 2372)
给药组Ⅱ 0. 717 ± 0. 226△ 1. 417 ± 0. 3262) 1. 317 ± 0. 3262)
阳性对照组 0. 704 ± 0. 285△ 1. 404 ± 0. 285△ 1. 304 ± 0. 285△
注:与空白组比较,1)P < 0. 01,▲ P < 0. 05;与模型组比较,2)P <
0. 01,△P < 0. 05。
3. 4 肾脏病理形态变化比较
光镜下观察显示,空白组的肾小球细胞及肾小管
结构清晰,未见间质炎细胞浸润、水肿及纤维化,系膜
细胞及基质无增殖;模型组见肾小球细胞与系膜基质
轻中度增生并伴有肾小球囊黏连,肾小球血管及底膜
明显增厚,有节段性硬化;各治疗组的肾小球内壁光
滑,间质增生明显减少,有少量炎性细胞浸润。结果见
图 1。
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图 1 光镜下肾脏组织病理改变(HE ×100)
注:A -空白组;B -模型组;C -肾茶水提取物组;D -肾茶 50%醇提取物组;E -雷公藤多苷片组。
4 讨论
慢性肾炎为世界性难治病之一,随着病情的发展,
患者的肾功能逐渐减退,在疾病后期出现视网膜病变、
贫血及尿毒症,社会危害性大。现代医学对于 CGN的
治疗以糖皮质激素和细胞毒药物为主,有较大的毒副
作用。本实验中阳性对照药物选取的是雷公藤多苷
片,其治疗 CGN 效果不俗,但也存在一定的毒副作
用[4 - 9]。因此,寻找副作用小且疗效确切的药物具有
十分重要的意义。
肾茶在云南的应用历史长达 2000 多年,傣医用其
治疗泌尿系感染、结石,水肿等病,临床报道使用肾茶
治疗慢性肾小球肾炎[10]、尿路感染、泌尿系结石[11]、
慢性肾功能不全[12]、肾病综合征[13]等病。本实验采
取阳离子化牛血清白蛋白复制慢性肾小球肾炎,其发
病机制及病理改变与人类膜性肾小球肾炎相类似,拥
有膜性肾炎的典型临床表现(大量蛋白尿),亦可见膜
性肾炎的病理改变,是目前研究治疗 CGN药物时首选
的动物模型之一。实验结果显示,肾茶提取物(水、
醇)能显著降低模型大鼠的尿蛋白含量,降低血清肌
酐、尿素氮水平,表明肾茶可明显改善大鼠的肾功能及
病理改变的作用,对 C - BSA 肾炎大鼠模型有良好的
治疗作用,但其确切机制尚不清楚,期待于今后对其进
行更加系统的实验和临床研究。
参考文献:
[1] 陆再英,钟南山.内科学[M].北京:人民卫生出版社,2009:508 -
511.
[2] 朱成兰,赵应红,马伟光,等. 傣药学[M]. 北京:中国中医药出版
社,2007:126.
[3] 徐叔云,卞如濂,陈修·药理实验方法学[M]. 2 版. 北京:人民卫
生出版社,1991:1072.
[4] 张蜀英. 雷公藤多甙片导致卵巢早衰 2 例报告[J]. 四川医学,
1995,16(3):191.
[5] 曹燕.雷公藤致骨髓造血障碍 2 例报告[J]. 重庆医学,1995,24
(2):127.
[6] 张青.雷公藤治疗肾炎引起类白血病反应一例报告[J].青海医药
杂志,1997,27(10):60.
[7] 巫明哲. 雷公藤中毒致心律失常 1 例[J]. 黑龙江中医药,1994
(5):44.
[8] 李焕更,薛丽,周建清.雷公藤加重房室传导阻滞一例[J].临床误
诊误治,1998,11(4):252.
[9] 杜秀兰,刘英,李大可.雷络酯片治疗类风湿性关节炎不良反应观
察[J].山东中医杂志,2001,20(7):403 - 404.
[10] 谢丽萍,向彩春,史伟,等. 猫须草治疗慢性肾小球肾炎蛋白尿
43 例临床研究[J].江苏中医药,2012,44(2):21 - 22.
[11] 黄荣桂,沈文通,郑兴中,等.肾茶对尿路结石的治疗作用[J].福
建医科大学学报,1999,33(4):402 - 405.
[12] 黄昆明.肾茶治疗多囊肾慢性肾功能不全的临床应用[J].疾病
控制杂志,2000,4(1):19.
[13] 黄彬.肾茶合泼尼松治疗肾病综合征 33 例临床观察[J].中国中
西医结合急救杂志,1999,6(12):550 - 551.
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Vol. 31,No. 6,Nov. 2014
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