全 文 :3 讨论
转氨酶含量增高,则表明肝细胞损害加重,大多数
肝病 ALT、AST的变化基本一致。本实验观察到,与模
型组相比,树莓茎水提物高剂量组 ALT、AST 下降,差
异有统计学意义。NO 是一种有信息传递和各种生物
效应功能的介质,微量的 NO能使血管舒张,改善组织
微循环,对组织具有保护作用,但是过量的 NO 又能导
致炎症介质的大量分泌,进而诱导生成氧自由基,使细
胞受到损伤并发生脂质过氧化,引起细胞损伤[3]。本
实验观察到与模型组比较,树莓茎水提物高剂量组小
鼠血清中 ALB含量明显升高,NO含量明显降低,差异
有统计学意义。以上结果表明树莓茎对肝细胞具有保
护作用。
机体通过酶系统与非酶系统产生自由基,自由基
能通过攻击生物膜上的多不饱和脂肪酸,引发脂质的
过氧化作用,从而形成脂质过氧化物,可破坏细胞膜结
构,引起细胞损伤,如丙二醛(MDA)。因此测定 MDA
的含量可反映脂质过氧化的程度,即可间接反映出细
胞损伤的程度[4 - 5]。超氧化物歧化酶(SOD)是一种能
催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的
酶,是一种重要的抗氧化剂。SOD 具有的特殊活性使
之成为生物体内清除自由基的首要物质,SOD 在生物
体内的水平高低是机体衰老与死亡的直观指标。现已
证实,由氧自由基引发的疾病多达 60 多种。SOD可对
抗自由基对细胞造成的损害,并可修复受损细胞[6]。
本实验显示,树莓茎水提物高剂量组与模型组相比,
SOD水平上升,MDA 水平下降,差异有统计学意义。
说明树莓茎能够减缓并阻止膜的脂质过氧化反应,减
少丙二醛的生成,增强机体抗脂质过氧化的功能。
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265 - 269.
肾茶对大鼠 C - BSA慢性肾炎模型治疗作用
的实验研究
刘旭航1,李光2,邹韬博1,赵旭1,刘斌1,张宁1
(1.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040;2.中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南 景洪 666100)
摘 要:目的:研究肾茶对大鼠 C - BSA慢性肾炎的治疗作用。方法:用天然牛血清蛋白( C - BSA) 制备
大鼠肾炎模型,以雷公藤多苷片作对照药物,观察肾茶( 水提取和 50%乙醇提取物) 对大鼠肾炎模型
24h尿蛋白及血清肌酐、尿素氮的影响,并制作肾脏病理切片,经 HE 染色后在光镜下观察其病理形态。
结果:肾茶能明显降低 C - BSA肾炎模型大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平( P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,
光镜下观察发现给药组肾脏病变形态明显减轻。结论:肾茶对大鼠 C - BSA 肾炎模型具有良好的治疗
作用,有望成为治疗慢性肾炎的候选植物药。
关键词:肾茶;慢性肾小球肾炎; 阳离子化牛血清白蛋白
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 - 2406(2014)06 - 0012 - 04
基金项目:黑龙江省自然科学基金面上项目(No. D201328);北京协和医学院协和青年基金项目(No. XHYN - 01);中央级公益性科研院所基本科研
业务专项 (No. YZYN -11 - 03,YZYN -13 - 02)
作者简介:刘旭航(1983 -),男,黑龙江中医药大学 2011 级中医内科学专业硕士研究生。
通讯作者:张宁(1974 -),男,中药学博士,副教授,硕士研究生导师,主要从事中药药效物质基础及体内代谢研究工作。
收稿日期:2014 - 06 - 11
修回日期:2014 - 07 - 12
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2014 年 11 月第 31 卷第 6 期
Vol. 31,No. 6,Nov. 2014
Experimental Study on the Therapeutic Effect of Clerodendranthus
Spicatus on C - BSA Chronic Glomerulonephritis of Model Rats
LIU XU - hang1,LI Guang2,ZOU Tao - bo1,ZHAO Xu1,LIU Bin1,ZHANG Ning1
(1. Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China;2. Yunnan Branch,
Institute of Medicinal Plant,Chinese Academy of Medical Sciences,Jinghong 666100,China)
Abstract:Objective:To study the therapeutic effect of clerodendranthus spicatus on C - BSA chronic nephritis
of rats. Methods:Use natural bovine serum albumin (C - BSA)for the preparation of model rats with nephri-
tis,tripterygium glycosides tablet as control medicine,observe effects of clerodendranthus spicatus (water ex-
tract and 50% ethanol extract)on nephritis model rats in the aspects of urine protein and serum creatinine,u-
rea nitrogen in 24 hours and produced renal biopsy,observe the pathological morphology under light micro-
scope after HE staining. Results:Clerodendranthus spicatus could significantly decrease urinary protein,serum
creatinine and urea nitrogen of C - BSA nephritis rats(P < 0. 05 or P < 0. 01). Pathological features of renal
lesion in the medicine group were significantly reduced under light microscopy observation. Conclusion:Clero-
dendranthus spicatuson has good therapeutic effects on C - BSA nephritis model rats,and it is expected to be-
come a candidate plant medicine for the treatment of chronic nephritis.
Key words:Clerodendranthus spicatus;Chronic glomerulonephritis;Cationization bovine serum albumin
慢性肾小球肾炎(chronic glomer ulonephritis,
CGN)简称慢性肾炎,是由多种原因引起的、多种病理
类型组成的原发于肾小球的一组临床常见疾病[1]。
现代医学常使用免疫抑制剂和激素类药物治疗该病,
但其副作用多,毒性大,且依然有部分患者难以取得满
意疗效,最终导致肾脏功能衰竭而依赖肾脏替代治疗。
肾茶(又名猫须草、猫须公、雅努妙)为傣族群众
常用草药,因其形似猫须而得名“猫须草”,有清热利
湿、排石利水、清火解毒、凉血止血之功效,民间用于治
疗急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石等疾病的效果不
俗[2]。但实验研究报道甚少,本实验采用大鼠 C -
BSA肾炎模型来观察肾茶对慢性肾炎的治疗作用,为
其广泛应用于临床提供理论依据。
1 实验材料
1. 1 动物
SD大鼠 60 只,雌雄各半,体质量(200 ± 15)g,由
黑龙江中医药大学实验动物中心提供,合格证号:
SCXK黑 2008 - 004。
1. 2 药品
肾茶购自云南西双版纳南药园,经李学兰研究员
鉴定为肾茶[Clerodendranthus spicatus(thunb)C. Y.
Wu ex H. W. Li];雷公藤多苷片(10mg /片,黄石飞云
制药有限公司,批号 42021212)。
1. 3 仪器及试剂
血清肌酐试剂盒(批号 20120407)、尿素氮试剂盒
(批号 20120907)(南京建成生物工程研究所) ;弗氏不
完全佐剂、无水乙二胺、牛血清白蛋白(上海阿拉丁公
司);其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2. 1 给药样品制备
2. 1. 1 肾茶水提取物的制备
对肾茶进行初步处理后,将其切段、粉碎,用水煮
沸 3 次,每次 2h,在 30 ~ 100℃温度下浸提 2h,过滤后
将 3 次的滤液合并,然后在 40 ~ 100℃下将滤液减压
浓缩至密度 1. 01 ~ 1. 50g /ml,再在 40 ~ 100℃进行干
燥喷雾。
2. 1. 2 肾茶 50%乙醇提取物的制备
对肾茶进行简单加工后,称取肾茶样品,置于圆底
烧瓶中,对肾茶进行回流提取,提取完成后,待料液冷
却后过滤,蒸干,在 40 ~ 100℃进行干燥喷雾。
2. 2 大鼠 C - BSA模型制备
采用 Border 的方法改良进行[3]。制备浓度为
2mg /ml及 1mg /ml的两种 C - BSA溶液,取 2mg /ml的
C - BSA溶液,于大鼠的背后、腋下及腹股沟作多点皮
下注入,每次注射 1ml。1 周后,取大鼠隔日尾静脉注
射浓度为 1mg /ml 的 C - BSA 溶液,初始注射 0. 5ml,
隔日注射 1 次,注射时的注射量逐渐递增,直至递增至
2. 5ml,共 4 周。
2. 3 分组、模型及给药
造模成功后,将大鼠随机分成空白组、给药Ⅰ组、
给药Ⅱ组、阳性对照组及模型组,每组 10 只。给药量
计算使用的体表面积计算法,给药Ⅰ组给予肾茶水提
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取物溶液 6. 3mg /(kg·d),给药Ⅱ组给予肾茶醇提取物
溶液 6. 3mg /(kg·d),阳性对照组给予雷公藤多苷片
6. 3mg /(kg·d),模型组与空白组给予等量生理盐水灌
胃,每日 1 次,持续 4 周。
2. 4 生化指标
2. 4. 1 24h尿蛋白量水平的测定
分别于造模完成后、给药治疗第 1 周、给药治疗第
2 周、给药治疗第 4 周时测定,每次将大鼠置于代谢笼
中收集 24h尿量,使用半自动生化分析仪检测尿蛋白
水平。
2. 4. 2 BUN、Cr水平的测定
给药治疗第 4 周后于大鼠眼内眦取血 1 ~ 3ml,进
行处理,用试剂盒检测大鼠的 BUN、Cr水平。
2. 5 病理形态检查
取肾脏组织,用 PBS 冲洗干净,除去表面包膜,置
于 10%福尔马林溶液中固定,乙醇逐级脱水,石蜡包
埋,制成 3 ~ 4μm 厚的切片,进行 HE 染色,镜下观察
其病理变化。
2. 6 统计学处理
采用 SPSS 18. 0 数据软件进行分析,计量资料以
(珋x ± s)表示,组间比较采用 t 检验,P < 0. 05 为差异具
有统计学意义。
3 结果
3. 1 24h尿蛋白水平比较
与空白组比较,模型组尿蛋白水平明显升高,并随
时间呈现逐渐升高的趋势,差异显著(P < 0. 01),显示
造模成功。给药治疗第 2 周后,模型组大鼠尿蛋白水
平明显升高,与空白组比较有显著差异(P < 0. 01)。
与模型组比较,各治疗组的尿蛋白水平呈现下降趋势,
治疗第 2 周后差异显著(P < 0. 01)。肾茶治疗组尿蛋
白水平与阳性对照组比较无显著差异(P > 0. 05),治
疗效果与阳性药相当。结果见表 1。
表 1 实验大鼠 24h尿蛋白结果(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 造模完成
给药治疗
第 1 周
给药治疗
第 2 周
给药治疗
第 4 周
空白组 43. 4 ±11. 82) 44. 2 ±14. 22) 43. 6 ±13. 52) 45. 5 ±12. 82)
模型组 141. 5 ±30. 51) 150. 6 ±32. 61) 174. 4 ±35. 31) 188. 5 ±36. 21)
给药组Ⅰ 140. 8 ±31. 21) 134. 8 ±33. 41) 120. 1 ±32. 31) 98. 6 ±36. 82)
给药组Ⅱ 142. 6 ±32. 71) 135. 6 ±34. 11) 122. 5 ±34. 91) 97. 7 ±35. 22)
阳性对照组 141. 9 ±35. 71) 133. 5 ±32. 61) 121. 7 ±31. 51) 97. 8 ±34. 92)
注:与空白组比较,1)P < 0. 01;与模型组比较,2)P < 0. 01。
3. 2 血清肌酐、尿素氮水平比较
与空白组比较,模型组大鼠血清 BUN、Cr 水平均
升高,差异显著(P < 0. 01)。与模型组比较,各治疗组
血清 BUN、Cr水平均显著降低,差异显著(P < 0. 01);
肾茶治疗组血清 BUN、Cr水平与阳性对照组比较无显
著差异(P > 0. 05),治疗效果与阳性药相当。结果见
表 2。
表 2 对大鼠 Cr,BUN水平的影响(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 Cr(μmol /L) BUN(mmol /L)
空白组 70. 315 ± 8. 6062) 5. 941 ± 1. 4432)
模型组 138. 903 ± 13. 1281) 11. 104 ± 2. 1241)
给药组Ⅰ 80. 317 ± 8. 1012) 7. 313 ± 0. 6632)
给药组Ⅱ 80. 896 ± 7. 3912) 7. 737 ± 0. 7322)
阳性对照组 81. 866 ± 8. 6952) 7. 639 ± 1. 1182)
注:与空白组比较,1)P < 0. 01;与模型组比较,2)P < 0. 01。
3. 3 甘油三酯、总胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇水平
比较
与空白组比较,模型组大鼠血清 TG,TC,LDL - C
水平均升高,差异显著(P < 0. 01)。与模型组比较,各
治疗组 TG,TC,LDL - C 水平均显著降低,差异显著
(P < 0. 01);肾茶治疗组血清 TG,TC,LDL - C 水平与
阳性对照组比较无显著差异(P > 0. 05),治疗效果与
阳性药相当。结果见表 3。
表 3 对大鼠 TG,TC,LDL - C水平的影响(mg /24h,n = 10,珋x ± s)
组别 TG TC LDL - C
空白组 0. 642 ± 0. 1322) 1. 342 ± 0. 132 1. 221 ± 0. 2322)1)
模型组 1. 556 ± 0. 243 1. 931 ± 0. 2431) 2. 431 ± 0. 2431)
给药组Ⅰ 0. 723 ± 0. 237△ 1. 423 ± 0. 2372)▲1. 313 ± 0. 2372)
给药组Ⅱ 0. 717 ± 0. 226△ 1. 417 ± 0. 3262) 1. 317 ± 0. 3262)
阳性对照组 0. 704 ± 0. 285△ 1. 404 ± 0. 285△ 1. 304 ± 0. 285△
注:与空白组比较,1)P < 0. 01,▲ P < 0. 05;与模型组比较,2)P <
0. 01,△P < 0. 05。
3. 4 肾脏病理形态变化比较
光镜下观察显示,空白组的肾小球细胞及肾小管
结构清晰,未见间质炎细胞浸润、水肿及纤维化,系膜
细胞及基质无增殖;模型组见肾小球细胞与系膜基质
轻中度增生并伴有肾小球囊黏连,肾小球血管及底膜
明显增厚,有节段性硬化;各治疗组的肾小球内壁光
滑,间质增生明显减少,有少量炎性细胞浸润。结果见
图 1。
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图 1 光镜下肾脏组织病理改变(HE ×100)
注:A -空白组;B -模型组;C -肾茶水提取物组;D -肾茶 50%醇提取物组;E -雷公藤多苷片组。
4 讨论
慢性肾炎为世界性难治病之一,随着病情的发展,
患者的肾功能逐渐减退,在疾病后期出现视网膜病变、
贫血及尿毒症,社会危害性大。现代医学对于 CGN的
治疗以糖皮质激素和细胞毒药物为主,有较大的毒副
作用。本实验中阳性对照药物选取的是雷公藤多苷
片,其治疗 CGN 效果不俗,但也存在一定的毒副作
用[4 - 9]。因此,寻找副作用小且疗效确切的药物具有
十分重要的意义。
肾茶在云南的应用历史长达 2000 多年,傣医用其
治疗泌尿系感染、结石,水肿等病,临床报道使用肾茶
治疗慢性肾小球肾炎[10]、尿路感染、泌尿系结石[11]、
慢性肾功能不全[12]、肾病综合征[13]等病。本实验采
取阳离子化牛血清白蛋白复制慢性肾小球肾炎,其发
病机制及病理改变与人类膜性肾小球肾炎相类似,拥
有膜性肾炎的典型临床表现(大量蛋白尿),亦可见膜
性肾炎的病理改变,是目前研究治疗 CGN药物时首选
的动物模型之一。实验结果显示,肾茶提取物(水、
醇)能显著降低模型大鼠的尿蛋白含量,降低血清肌
酐、尿素氮水平,表明肾茶可明显改善大鼠的肾功能及
病理改变的作用,对 C - BSA 肾炎大鼠模型有良好的
治疗作用,但其确切机制尚不清楚,期待于今后对其进
行更加系统的实验和临床研究。
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