全 文 ：中国医药导刊
2012年 第 14 卷 第 1 期（总第99期）
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RP-HPLC法测定峨嵋双蝴蝶中齐墩果酸的含量
敖琼﹡1,田宏现2,杨宏健3,朱杰2
(1常德市第一人民医院药剂科,常德 415000;2湖南吉首大学生物资源与环境科学学院,吉首 416000;
3湖南怀化高等专科学校药学系,怀化 418000)
【摘要】目的:采用RP-HPLC法测定峨嵋双蝴蝶中齐墩果酸的含量。方法:采用Hypersil ODS2柱(250×4.6 mm),流动相为甲醇:1.0%
冰醋酸水溶液(94:6),检测波长为210nm,流速为0.5ml/min。结果:齐墩果酸分别在(0.40～4.00)μg (r=0.9992),范围内峰面积与质量浓
度呈良好的线性关系;齐墩果酸的平均回收率(n=6)分别为 99.90%(RSD=0.04%)。结论:此方法简便,准确、重复性好,可适用于峨嵋
双蝴蝶药材中齐墩果酸的质量控制。
【关键词】峨嵋双蝴蝶;齐墩果酸;RP-HPLC法
【中图分类号】R284.1;R917　【文献标识码】A　【文章编号】1009-0959(2012)01-0165-02
Determination of Oleanolic Acid in Tripterospermum Cordatum (Migo)
H.Smith by RP-HPLC
Ao Qiong1,Tian Hongxian2,Yang Hongjian2,et al.
(1Pharmacy Department,No.1 Peoples Hospital of Changde,Hunan; Changde 41500,China; 2Biology Res & Env Sci College,Jishou
Univerity,Hunan,Jishou 416000,China;3 Pharmacy Department,,HigherJunior Pharmaceutical School,Hunan,Huaihua 418000,China)
【ABSTRACTS】Objective: The contents of oleanolic acid in Tripterospermum cordatum (Migo)H.Smith was determined by RP-
HPLC. Methods: The HPLC system consisted of Hypersil ODS2(250×4.6 mm), mobile phase of methanol-1.0% acetic acid apuenous
solution(94∶6) mixture, with detection at 210 nm, fl ow rate 0.5 mL/min. Results: The linear ranges of oleanolic acid were (0.40～4.00 )
μg, r=0.9992 ,respectively, The recoveries(n=6) were 99.90%(RSD 0.04%) for oleanolic acid. Conclusion: The method is simple, accurate
and with good reproducibility,for quality control of Tripterospermum cordatum (Migo)H.Smith.
【KEY WORDS】Tripterospermum cordatum (Migo)H.Smith;Oleanolic acid;RP-HPLC
峨嵋双蝴蝶(Tripterospermum cordatum (Migo)
H.Smith)为龙胆科(Gentianaceae)双蝴蝶(Tripterospermum)
属峨嵋双蝴蝶的全草[1,2],又称肺形草,黄金线,胡地莲,中医
记载其性寒、味甘辛,具有润肺止血、清热利尿、解毒、
消肿等功能[1];主要分布在云南、陕西、四川、贵州、湖
南、广西等地[3]。植株中含齐墩果酸、芒果甙、(1,3,6,7)-
四甲氧基础酮、双蝴蝶甙等有效成分[4]。 齐墩果酸毒性
很低,具有多种生物活性—抗病毒、消炎,增强免疫和免疫
调节、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、
抗艾滋病毒等作用;特别对恶性肿瘤化疗造成功能下降的
恢复和对抗结核药物的肝损害的保护意义重大[5,6]。因此
具有较高的开发和应用前景。因此,我们研究建立了RP-
HPLC法测定峨嵋双蝴蝶中齐墩果酸的含量。该法准确、
快速、灵敏,重现性好。可作为峨眉峨嵋双蝴蝶药材质量
控制标准和引种繁育具有重要的意义。
1 仪器、材料及试剂
1.1 仪器
Shimadzu LC-10AT泵(日本岛津),SPD-10A紫外检
测器(日本岛津);Rheodyne 7125六通进样阀(日本岛津);
N3000色谱工作站(浙江大学智能研究所);FZ102植物粉碎
机(天津泰斯特仪器有限公司);FA2004电子天平(上海精
密仪器厂) ;GZX-DH型电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器
械厂);KQ-250E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司)。
1.2 试剂与材料
齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批
号:0709-9803,纯度:99.9%)。甲醇(色谱纯),冰醋酸(分析
纯),乙醇(分析纯)。水为二次重蒸馏水。峨嵋峨嵋双蝴蝶,
采集于湖南省怀化市中方县铁坡山,由中国科学院植物标
本馆林祁研究员鉴定为龙胆科(Gentianaceae)峨嵋双蝴蝶
(Tripterospermum)属峨嵋双蝴蝶的全草。
2 色谱条件
色谱柱:Hypersil ODS2柱(250×4.6 mm),流动相为
甲醇:1.0%冰醋酸溶液(94:6),检测波长为210nm,灵敏
度:0.005AUFS,流速为0.5ml/min,柱温:20℃。
3 实验方法
3.1 对照品溶液的配制
精密称取减压干燥至恒重的齐墩果酸对照品5.00mg,
置25mL 容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成对照品
溶液0.20mg/mL。
3.2 样品的预处理
取干燥全草,阴干后,经 50℃ 鼓风干燥3h,粉碎。精
密称取中粉1.0g,置具塞容量瓶中,精密加入乙醇至刻度
25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率150W,频率40kHz)30
分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,
取续滤液,即得。
3.3 线性关系的考察
取上述对照品的溶液分别以( 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,20.0)
μL 进样分析,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积值
(Y)为横坐标、以对照品的进样量(X)为纵坐标作图,进行
线性回归,得回归方程分别为:
Y (齐墩果酸)=116268.3.7X+6392.7,r=0.9992
结果表明齐墩果酸进样量在(0.40~4.00)μg范围内线
性关系良好。
*通讯作者:(1973~),女,主管药师,主要从事医院药学工作。
Chinese Journal of Medicinal Guide
2012 Volume 14 No.1 (Serial No.99)
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3.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液 20μL,重复进样5 次,分别测定
峰面积值,计算出齐墩果酸的 RSD 为0.38%,其结果表明该
仪器具有较好的精密度。
3.5 重复性试验
取样品(平行样品1)5份,按供试品溶液制备方法,制
备样品溶液,精密吸取样品溶液20μL,在上述色谱条件下
连续进样 5 次,根据峰面积值,计算出齐墩果酸的RSD 为
0.29%,结果表明,试验的重现良好。
3.6 稳定性试验
取样品溶液 ,精密吸取溶液 2 0μ L ,分别在
(0,2,4,8,16,24)h,按上述色谱条件下,共测定6次,每次20μL,
测定峰面积,计算,样品中齐墩果酸RSD值(n=6)为0.15%;试
验结果显示,供试品在24h内稳定性良好。
3.7 加样回收率试验
采用加样回收法,取已知含量峨嵋双蝴蝶样品(平行样
品编号为1)6份,每份1.0g,分别精密加入齐墩果酸对照品溶
液1ml(0.20mg),6份样品同时按上述供试品溶液制备,提取
样品溶液,按上述色谱条件测定,计算得到齐墩果酸的加样
平均回收率为99.90%,RSD分别为0.04%。
3.8 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与3份平行样品溶液(样品
编号:1、2、3)各20μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件
测定,用外标法计算出样品中齐墩果酸的含量,结果(样品
编号:1、2、3)分别为(n=3):1.51 mg.g-1、1.54 mg.g-1、1.52
mg.g-1。
*
A
*
B
图1:对照品(A)和样品(B)色谱图
4 讨论
4.1 民间用于治疗肺热咳嗽,肺痨咳血等疾病,文献报道该属
植物主要有抗高血压,抗病毒,抗血液外溢等活性[7]。而齐
墩果酸具有重要的药用价值,现代研究表明,齐墩果酸具有
降低谷丙转氨酶、促进细胞再生、防止肝硬化等作用,是
治疗肝炎的有效成分[8]。齐墩果酸还有抗炎、促免疫、降
血脂、降血糖[9~12]等作用。此外,齐墩果酸还具有强心、利
尿、抗衰老、抑制变态反应、抗癌活性等作用[11,12]。因此,
我们采用色谱法测定峨嵋双蝴蝶药材中齐墩果酸中质量,
具有重要的意义。
双蝴蝶属植物具有重要的药用功能,目前,主要是依靠
采集野生植株进行药物加工,对野生资源破坏极大[2]。因
此,我们采用齐墩果酸作为峨嵋双蝴蝶药材中的质量指标,
有利于对峨嵋双蝴蝶药材的引种和筛选,具有重要的指导
意义。
4.3 样品提取时间考察
我们对超声提取时间进行了考察,超过30分钟后,含量
不再变化;故本法采用30分钟。
4.4 本法简便易行、准确灵敏,检验周期短,可用于检验、
评价药材峨嵋双蝴蝶质量标准控制和引种繁育具有重要
的意义。
鸣谢:感谢中国科学院植物标本馆林祁研究员对本文
研究植物进行鉴定。
参考文献
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28(23):2031~2033
表1 样品加标回收率测定结果(n=5)
编号
No 样品重量/g
齐墩果酸含
/mg
加入量/
mg
总测得
量/mg 回收率/%
平均回
收率
RSD
1 1.0011 1.5117 0.20 1.7095 99.87
99.90% 0.04%
2 1.0008 1.5112 0.20 1.7103 99.95
3 1.0001 1.5102 0.20 1.7078 99.86
4 1.0036 1.5154 0.20 1.7137 99.90
5 1.0024 1.5136 0.20 1.7122 99.85
6 1.0021 1.5132 0.20 1.7129 99.98
1
2
3
4
5
6
7
8
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