全 文 ：收稿日期:2015-03-11
基金项目:国家自然科学基金项目(81360673)
作者简介:桂荣(1981-)，女，在读硕士研究生，专业方向:蒙药与方剂学;Tel:15848550948，E-mail:wangguirong2014@ 163. com。
* 通讯作者:巴根那，Tel:0475-8313130，E-mail:bagenna@ 126. com。
蒙药花锚醇提物对化学性急性肝损伤
大鼠的保护作用及机制分析
桂 荣1，白梅荣1，刘 鑫2，拉喜那木吉拉1，包明兰1，巴根那1*
(内蒙古民族大学 1. 蒙医药学院;2. 医学院，内蒙古 通辽 028000)
摘要 目的:观察蒙药花锚醇提物对化学性急性肝损伤大鼠的保护作用。方法:采用 D-氨基半乳糖胺(D-
GLaN)致大鼠急性肝损伤模型，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷胱甘肽过氧化
物酶(GSH-Px)水平及肝细胞凋亡和肝组织病理学变化。结果:蒙药花锚醇提物能降低 D-GlaN致急性肝损伤大鼠
血清 ALT、AST水平及肝细胞凋亡率，提高血清及肝组织中 GSH-Px活性，有效减轻 D-GalN所致的肝组织病理学改
变。结论:蒙药花锚醇提物的保肝护肝作用与抑制肝细胞凋亡和抗氧化有关。
关键词 蒙药花锚醇提取物;D-氨基半乳糖胺;急性肝损伤;大鼠
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)12-2583-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 12. 031
蒙药花锚为龙胆科植物花锚 Halenia corniculata
(L. )Cornaz的带花全草。蒙文名为西依热-地格达。
花锚味甘、苦，性平，效软、腻，具有抑协日、清热、愈
伤等功效;临床主要用于治疗头痛、烦渴、脉热、黄
疸、高烧、伤热等证候〔1〕。现代研究发现花锚中 4 种
化合物对 CCl4 致小鼠急性肝损伤有保肝作用
〔2〕。
花锚是蒙医临床上应用广泛的药材之一、国内外文
献中未见对花锚抗 D-GlaN 致急性肝损伤的报道。
本研究初步观察了花锚醇提物对 D-GlaN 致大鼠急
性肝损伤的保肝护肝作用，以期为蒙药花锚抗肝损
伤的进一步深入研究奠定基础。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 清洁级雄性 SD 大鼠，体质量(200
± 10)g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司
提供，实验动物生产许可证号:SCKK(吉)-2011-
0004。
1. 2 药物与试剂 蒙药花锚采集于内蒙古扎鲁特
旗罕山自然保护区，经内蒙古民族大学蒙医药学院
布和巴特尔教授鉴定为龙胆科植物花锚 Halenia
corniculata(L. )Cornaz带花的全草;护肝片(广东康
尔丹制药有限公司，批号:C1400203050);D-GlaN购
自北京拜尔迪生物技术有限公司;ALT、AST、GSH-
Px、Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒均购自南京建
成生物工程研究所;95% 乙醇、无水乙醇、冰乙酸
(天津市德恩化学试剂有限公司)。
1. 3 主要仪器 cobas c 311 全自动生化分析仪
(日立高新技术公司);TG16-WS 高速台式离心机
(长沙湘仪离心机仪器有限公司);ISO9001 型电子
分析天平、DY89-1 型匀浆机(宁波新芝生物科技股
份有限公司);T6 新世纪型分光光度计(北京普析通
用仪器有限责任公司);BD FACSCalibur 型流式细
胞仪(美国 BD公司);NIKON ECLIPSE E100 型显微
镜(上海泽仕光电科技有限公司)。
2 方法
2. 1 蒙药花锚醇提取物的制备 称取花锚适量，
装入提取装置中加 10 倍量 95%的乙醇浸泡 2 h 后
回流提取 2 h，过滤，收集滤液，残渣加 8 倍量 95%
乙醇回流提取 2 h，过滤，收集滤液，残渣加 6 倍量
95%乙醇回流提取 1 h，回流提取 3 次，合并 3 次滤
液回收浓缩、干燥即得。提取率 22. 27%。
2. 2 动物分组、造模及给药 取 SD 大鼠 48 只，随
机分为正常对照组、模型组、护肝片(0. 360 g /kg)阳
性对照组及花锚醇提物高(2 g /kg)、中(1 g /kg)、低
(0. 5 g /kg)剂量组，共 6 组，每组 8 只。各给药组灌
胃相应药物，正常对照组和模型组灌胃等体积生理
盐水，1 次 /d，连续 21 d，除正常对照组外，各组大鼠
末次给药 30 min 后按 300 mg /kg 腹腔注射 D-
GlaN〔3〕，禁食不禁水 24 h后各组大鼠在 10%水合氯
醛(3 mL /kg)麻醉下腹主动脉取血，3 500 r /min 离
心 10 min 分离血清，测定 AST、ALT、GSH-Px 等指
标;取部分肝组织用 10%甲醛溶液固定，常规石蜡
包埋，切片，HE 染色，在显微镜下观察组织形态学
变化。取一定量大鼠肝组织剪碎，提取细胞，加 3 倍
体积生理盐水，2 000 r /min离心 5 min，重悬 3 次，取
(1 ～ 5)× 105重悬细胞，弃上清，加入 500 μL结合液
轻轻重悬细胞，再加入 5 μL Annexin V-FITC 轻轻混
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匀，再加入 5 μL 碘化丙啶轻轻混匀后室温(20 ～ 25
℃)避光孵育 10 min后用流式细胞仪检测细胞凋亡。
3 结果
3. 1 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN 致急性肝损伤大
鼠血清 ALT、AST、GSH-Px水平的影响 结果如表 1
所示，与正常对照组比较，模型组大鼠血清 ALT、
AST显著升高(P ＜ 0. 01)，GSH-Px活性显著降低(P
＜ 0. 05)。与模型组比较，各给药组大鼠血清 ALT、
AST显著降低(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)，GSH-Px 活性
显著升高(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。
表 1 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN致急性肝损伤大鼠血清 ALT、AST、GSH-Px水平的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(g /kg) ALT /(U/L) AST /(U/L) GSH-Px /(U/mg)
正常照组 － 35. 91 ± 10. 10＊＊ 94. 31 ± 15. 01＊＊ 4586. 40 ± 1839. 39*
模型组 － 627. 51 ± 282. 81 622. 43 ± 257. 12 2286. 00 ± 1165. 89
护肝片组 0. 36 295. 17 ± 85. 52* 315. 90 ± 84. 63* 3834. 51 ± 1808. 48*
花锚醇提物低剂量 0. 5 105. 45 ± 57. 27＊＊ 241. 06 ± 134. 60＊＊ 4637. 25 ± 1461. 60＊＊
花锚醇提物中剂量 1 321. 60 ± 87. 94* 383. 43 ± 182. 22* 5684. 91 ± 2404. 80＊＊
花锚醇提物高剂量 2 240. 45 ± 173. 14＊＊ 269. 31 ± 150. 45* 5673. 60 ± 2151. 01*
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN 致急性肝损伤大
鼠肝组织 GSH-Px 活性的影响 结果如表 2 所示，
与正常对照组比较，模型组大鼠肝组织 GSH-Px 活
性显著降低(P ＜ 0. 05)。与模型组比较，各给药组
大鼠肝组织 GSH-Px活性显著升高(P ＜ 0. 05 或 P ＜
0. 01)。
3. 3 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN 致急性肝损伤大
鼠肝细胞凋亡的影响 结果如图 1、表 3 所示，与正
常对照组比较，模型组肝细胞凋亡率显著升高(P ＜
0. 01)。与模型组比较，护肝片组和花锚醇提物低、
中、高剂量组细胞凋亡率显著降低(P ＜ 0. 01)。
表 2 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN致急性肝损伤大鼠
肝组织 GSH-Px活性的影响(珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(g /kg) GSH-Px /(U/mg)
正常对照组 － 411. 13 ± 89. 84*
模型组 － 339. 43 ± 84. 50
护肝片组 0. 36 403. 24 ± 114. 54*
花锚醇提物低剂量 0. 5 530. 02 ± 131. 49*
花锚醇提物中剂量 1 525. 27 ± 95. 93*
花锚醇提物高剂量 2 612. 50 ± 95. 08＊＊
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
图 1 流式细胞仪检测蒙药花锚醇提物对 D-GlaN致急性肝损伤大鼠肝细胞凋亡的影响
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 护肝片组 D. 花锚醇提物高剂量组 E. 花锚醇提物中剂量组 F. 花锚醇提物低剂量组
3. 4 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN 致急性肝损伤大
鼠肝组织病理学的影响 结果如图 2 所示，正常对
照组大鼠肝小叶结构清晰完整，肝细胞无变性坏死;
模型组大鼠肝小叶结构消失，明显坏死或变性，周围
有大量炎性细胞浸润，肝索紊乱，核变大，染色变浅，
核仁溶解，大量肝细胞肿胀，提示存在急性肝组织损
伤;与模型组比较，花锚醇提物低、中、高剂量组大鼠
肝组织病理学得到明显改善，尤其是高剂量组，表
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表 3 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN致急性肝损伤大鼠
肝细胞凋亡的影响(%，珔x ± s，n =8)
组别 剂量 /(g /kg) 细胞凋亡率
正常对照组 － 0. 22 ± 0. 03＊＊
模型组 － 3. 02 ± 0. 94
护肝片组 0. 36 0. 18 ± 0. 02＊＊
花锚醇提物低剂量 0. 5 0. 17 ± 0. 00＊＊
花锚醇提物中剂量 1 0. 17 ± 0. 05＊＊
花锚醇提物高剂量 2 0. 11 ± 0. 05＊＊
注:与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
现为肝小叶结构较完整，炎性细胞浸润明显较少，肝
索较整齐，肝细胞体积肿大不明显，核仁溶解较少;
护肝片组大鼠的肝组织病理学得到改善，肝小叶结
构趋于正常，肝总管及肝窦处可见少量的肿胀血管
及炎细胞，可见到新生双核肝细胞。
4 讨论
急性肝损伤是临床常见疾病之一，治疗不当可
引发慢性肝炎、肝纤维化及肝硬化等严重疾病。因
此，应重视急性肝损伤的治疗。本研究首次探讨了
蒙药花锚醇提物对D-GalN致大鼠急性肝损伤的保
图 2 蒙药花锚醇提物对 D-GlaN致急性肝损伤大鼠肝组织病理学的影响(HE，×100)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. 护肝片组 D. 花锚醇提物高剂量组 E. 花锚醇提物中剂量组 F. 花锚醇提物低剂量组
肝机制。D-GalN 是诱导化学性肝损伤及肝细胞凋
亡常用的试剂，引起肝损伤机制与肝内的代谢及对
核苷酸合成的影响有关〔4〕。GSH-Px 是机体内广泛
存在的一种重要的抗氧化酶，能特异性地催化还原
型谷胱甘肽对过氧化氢的还原反应，从而保护细胞
膜结构及功能完整〔5〕。凋亡是正常细胞现象，现代
研究认为肝损伤与肝细胞凋亡有密切的关系〔6，7〕。
本研究结果表明，花锚醇提物能显著降低 D-GalN致
急性肝损伤大鼠血清 ALT、AST水平，改善肝组织病
理学改变，提示花锚醇提物具有保护肝脏功能作用，
显著提高 GSH-Px 活性，提示花锚醇提物具有抗氧
化和抗炎作用，并能显著抑制 D-GlaN 致肝细胞凋
亡。
综上所述，蒙药花锚醇提物可能是通过调节细
胞凋亡及炎症反应和抗氧化作用，起到保护细胞膜
结构和功能完整，抑制肝细胞凋亡达到保护肝脏的
目的。本实验为开发蒙药花锚保肝作用的深入研究
奠定工作基础。
参 考 文 献
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