全 文 ：藏药花锚中齐墩果酸和熊果酸含量测定
朱鹏程1 ,2 , 于瑞涛1 ,2 , 陶燕铎 1 , 梅丽娟1 , 邵　斌贝1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.中国科学院研究生院 , 北京 100049)
摘　要:用薄层色谱法和反相高效液相色谱法对青海两地区野生椭圆叶花锚中
齐墩果酸和熊果酸进行定性定量分析 。采用超声法提取椭圆叶花锚中的齐墩果
酸和熊果酸 , 并采用反相高效液相色谱法测定其含量 。测得青沙山地区花锚中
齐墩果酸和熊果酸含量均高于大通宝库乡产地 , 两产地花锚中熊果酸含量均高
于齐墩果酸含量 。
关键词:花锚;齐墩果酸;熊果酸;反相高效液相色谱;含量测定
　　椭圆叶花锚(Halenia elliptica D.Don)为龙胆科
(Gentianaceae)花锚属植物 , 是藏药中用于治疗肝
胆系统疾病的常用植物药 , 泛称“藏茵陈”[ 1] 。花锚
的主要化学成分为(口山)酮(Xanthone)、黄酮(Fla-
vone)和三萜(Triterpene)类化合物 , 已经分离鉴定
了15种(口山)酮和黄酮成分[ 2 ～ 4] 。齐墩果酸具有
清热 、消炎 、抑菌 、保肝 、护肝 、增加白细胞 、降
低转氨酶等作用 ,近年来又发现其具有抗癌活性的
功效[ 5] 。熊果酸体外对 G +和 G -菌及酵母菌均有
抗菌活性 , 还有抗糖尿病 、抗溃疡及降低血脂的
作用[ 6] ;近年来的研究显示熊果酸除具有抗突变 、
抗促癌 、抗氧化作用外 , 对消化道肿瘤细胞和白
血病细胞还有细胞毒和诱导细胞凋亡的作用[ 7] 。
因此 , 我们对花锚中这两种成分进行 RP-HPLC测
定 , 为藏药花锚的质量评价提供科学依据。
1　材料与方法
1.1　供试材料
椭圆叶花锚于 7月底 8月初采自青海大通宝
库乡和平安青沙山 , 由本所梅丽娟工程师鉴定为
龙胆科花锚属椭圆叶花锚(Halenia elliptica D.
Don)。取地上部分自然阴干 , 粉碎后备用 。
1.2　仪器与试剂
Waters515 高效液相泵 , Waters2996DAD 检测
器 , Waters Empower色谱工作站 , Waters色谱柱恒
温箱 , WFH-203B三用紫外分析仪(上海精科实业
有限公司), 电子分析天平 , KQ-250DB型数控超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司), RT-9型中
药粉碎机(浙江省缙云县超力机械厂), 硅胶Gf254
薄层板(青岛海洋化工)。
甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化
工厂), 娃哈哈纯净水 , CHCl3 , 乙酸乙酯 , 甲醇 ,
浓H2SO4 , H3PO4均为分析纯 。
熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号110742-200415), 齐墩果酸对照品(中国药品生
物制品检定所 , 批号 110709200304), 纯度均大于
98%。
1.3　实验方法
1.3.1　对照品溶液制备　分别准确称取齐墩果酸
和熊果酸对照品适量 , 加甲醇制成 64 μg mL 的齐
墩果酸对照品溶液和 160 μg mL 的熊果酸对照品
溶液 。
1.3.2　样品溶液制备　取两地花锚样品 , 每个产
地样品均准确称取 5份 , 每份样品各 2.0 g , 置具
塞锥形瓶中 , 准确加入 20 mL 体积分数为 95%的
乙醇 , 超声处理 2 h , 过滤 , 滤渣用 95%的乙醇洗
涤两次 , 合并滤液 , 于 25 mL 容量瓶中定容 , 摇
匀 , 静置 。取适量样品液过0.45 μm微孔滤膜 , 在
选定的色谱条件下测定有效成分含量 。
1.3.3　齐墩果酸和熊果酸鉴别　取样品溶液和对
照品溶液各 10 μL 点于同一硅胶 G 板上 , 以
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第 27卷增刊
2008年 5 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.27.Suppl.2008-5
基金项目:中国科学院知识创新领域前沿(CXLY-2002-9)项目资助
作者简介:朱鹏程(1983-), 男 , 硕士研究生;E-mail:zlzpc@yahoo.com.cn
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0391
V(CH3Cl)∶V(乙酸乙酯)=1∶1为展开剂 , 展开后
取出 , 晾干 , 以 V(H2SO4)∶V(甲醇)=1∶2为显色
剂 , 置烘箱中烘至显色清晰 。在样品色谱中 , 与对
照品相应的位置上 , 显相同紫红色的斑点。
1.4　方法
1.4.1　齐墩果酸和熊果酸含量测定的色谱条件　
THERMO C18色谱柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm);流
速 1.0 mL min;柱温 30 ℃;流动相:V(甲醇)∶
V(0.4%H3PO4)=85∶15;检测波长 215 nm , 见
图1 。
图 1
1-齐墩果酸;2-熊果酸
(a)齐墩果酸对照品;(b)熊果酸对照品;(c)花锚样品
1.4.2　线性关系考察　用 25 μL 微量进样器分别
吸取齐墩果酸 64 μg mL 对照品溶液和熊果酸 160
μg mL 对照品溶液 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0 , 12.0
μg注入液相色谱仪 , 记录峰面积 , 以齐墩果酸和
熊果酸对照品进样量(μg)为横坐标 , 峰面积为纵
坐标 , 绘制标准曲线 , 结果表明齐墩果酸在 0.128
～ 0.64μg之间 , 熊果酸在0.32 ～ 1.60μg 之间线性
关系良好 。回归方程分别为 y =1921473x -72419 ,
y =1025388x -103368.8 , r 分别为 0.9993 和
0.9992。
1.4.3　精密度实验　分别准确吸取齐墩果酸和熊
果酸对照品溶液各5μL , 分别重复进样 5次 , 峰面
积积分值 RSD分别为 0.78%, 0.93%。
1.4.4　稳定性实验　分别准确吸取齐墩果酸和熊
果酸样品溶液各 5 μL , 于0 , 3 , 6 , 9 , 12 h测定峰
面积积分值 , RSD分别为 1.34%, 1.09%。
1.4.5　重复性实验　取同一样品 5份 , 分别按照
含量测定项下的方法测定 , 记录齐墩果酸和熊果
酸面积积分值 , RSD分别为 0.82%, 1.56%。
1.4.6　加样回收率　分别取已知含量的 5份花锚
样品各约 1 g , 分别精密加入齐墩果酸和熊果酸对
照品 , 按“1.3.2”法提取 , 在原色谱条件下测定 ,
计算回收率。平均回收率分别为 98.22%和
96.51%。
2　结果
2.1　花锚样品中齐墩果酸和熊果酸的含量
分别取每份样品溶液10μL 进行分析 , 并测定
峰面积积分值 。计算得青沙山地区花锚齐墩果酸
质量分数为 0.051%, 熊果酸质量分数为 0.234%;
大通地区花锚齐墩果酸质量分数为 0.027%, 熊果
酸质量分数为 0.153%。
2.2　提取方法的选择　比较乙醇超声提取和乙醇
回流提取 , 结果显示超声提取的齐墩果酸和熊果
酸含量较高 。而且超声法所用时间短 , 设备简单 ,
操作方便 。
2.3　流动相选择　齐墩果酸和熊果酸分离困难 ,
经实验并结合文献参考 , 选择甲醇和加入 0.4%的
H3PO 4的水作为流动相 。
3　分析
1.由本实验可以看出较大通宝库乡青沙山地
区产花锚品质较好 , 在两个产地花锚中熊果酸含
量均远高于齐墩果酸 , 所以熊果酸更适合作为花
锚质量控制的标准 。
2.薄层鉴别时齐墩果酸和熊果酸分离效果不
理想 , 可能是因为花锚中齐墩果酸含量太低 , 样
品中出现的紫红色斑点应该大部分是熊果酸的作
用;再者 , 两者互为同分异构体 , 理化性质极为接
近 , 故也难以分开 。
参考文献
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海人民出版社 , 1991.114
[ 2] 　孙洪发 , 胡伯林 , 丁经业等.植物学报 , 1987 , 29(4):
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[ 5] 　卢文彪.时珍国医国药 , 2001 , 12(11):961
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