全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
收稿日期：2009-12-31
作者简介：陈丰连（1973-），女，副教授，研究方向：中药资源开发与质量控制。Email：chenfenglian@21cn.com。
基金项目：广东省科技攻关项目（2008A030101009）。
凉粉草又名仙人草、仙草，为唇形科仙草属一年
生草本植物，是一种重要的药食两用的植物资源，具
有“清暑热，解藏府热毒，治酒风”的功效，也是广
东凉茶“王老吉”的主要组成药物。凉粉草中含有多
糖、熊果酸、齐墩果酸等化学成分 [1-2]，刘碧容 [3] 利
用HPLC法测定了凉粉草中熊果酸的含量，而同时测
定凉粉草中熊果酸和齐墩果酸含量的方法尚未见报
道，为了进一步研究凉粉草的质量，本实验建立了凉
粉草中齐墩果酸和熊果酸的HPLC含量测定方法，为
凉粉草的质量控制提供了方法依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10AT VP PLUS SHIMADZU高效液相色
谱仪，SPD-10A检测器，CTO-10A 柱温箱，N2010色
谱工作站，Kromasil C18色谱柱（250 mm × 4.6 mm，5
μm）；LIBROR AEG-220电子分析天平；CQ-200超
声波清洗器（上海音波声电科技有限公司），DF-20流
水式高速中药粉碎机（温岭市大德中药机械有限公
司）。
1.2 试药 凉粉草药材购自致信中药饮片有限公司；
齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为
110709-200505）；熊果酸对照品（中国药品生物制品
检定所，批号为110742-200516）。高效液相色谱用
甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备 精密称取齐墩果酸对照品和熊
果酸对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液（含齐
HPLC法测定凉粉草中齐墩果酸和熊果酸含量
陈丰连，黄锦茶，梁欣健，徐鸿华（广州中医药大学中药学院 广东广州 510006）
摘要：目的 建立以高效液相色谱法同时测定凉粉草药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法 色谱柱为
Kromasil 100-5 C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5 ％磷酸水溶液（95 ∶ 5），流速为1.0 mL·min-1，
柱温：室温，检测波长为210 nm。结果 齐墩果酸和熊果酸的进样量分别在0.101 0～0.909 0 μg（r=0.999 3）、
0.083 0～0.747 4 μg（r=0.999 7）范围内与各自峰面积呈良好的线性关系；二者平均加样回收率分别为 100.26 ％、
100.23 ％，RSD分别为1.5 ％、1.4 ％。结论 本方法简便、准确、可靠，可用于凉粉草的质量控制。
关键词：凉粉草；齐墩果酸；熊果酸；HPLC；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0416-03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in Mesona chinensis Benth. by HPLC
CHEN Fenglian，HUANG Jincha，LIANG Xinjian，XU Honghua （School of Chinese Materia Medica，Guangzhou
University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）
Abstract: Objective To establish a HPLC method for simultaneous determination of oleanolic acid and ursolic acid
in Mesona chinensis Benth. Methods HPLC was performed on Kromasi 100-5 C18 column（250 mm × 4.6 mm，5
μm）at room temperature，the mobile phase consisted of methanol-0.5 % phosphoric acid solution（95 ∶ 5）at a flow
rate of 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was set at 210 nm. Results The calibration curves of oleanolic
acid and ursolic acid were in good linearity in the range of 0.101 0~0.909 0 μg（r=0.999 3），and 0.083 0~0.747 4 μg
（r=0.999 7），respectively. Their average recoveries were 100.26 % and 100.23 %，RSD being 1.5 % and 1.4 %，
respectively． Conclusion The established method is simple，accurate and reliable. It can be used for the quality con－
trol of Mesona chinensis Benth.．
Keywords：Mesona chinensis Benth.; Oleanolic acid; Ursolic acid; HPLC; Content determination
·416·
中药新药与临床药理 2010年 7月第 21卷第 4期
墩果酸50.50 μg/mL，熊果酸41.52 μg/mL）
2.2 供试品溶液制备 取凉粉草粉末（过60目筛）约0.5
g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL甲
醇，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称
定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm
微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Kromasil
C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲
醇—0.5 ％磷酸水溶液（95 ∶ 5）；流速为1.0 mL·min-1；
柱温：室温；检测波长：210 nm；进样量：10 μL。
理论塔板数按齐墩果酸计算应不低于1000，理论塔板
数按熊果酸计算应不低于10 000。结果表明，在上述
色谱条件下，齐墩果酸和熊果酸对照品溶液的色谱峰
分离度良好，R > 1.5。色谱见图1、图 2。
图1 齐墩果酸及熊果酸对照品混合溶液HPLC色谱图
1. 齐墩果酸对照品；2. 熊果酸对照品
图2 供试品溶液HPLC色谱图
1. 齐墩果酸对照品；2. 熊果酸对照品
2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液2、6、10、
14、18 μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测
定，以测得峰面积为纵坐标Y轴，对照品进样量为横
坐标X轴，绘制标准曲线，得回归方程：齐墩果酸：
Y=425502X+6895，r=0.999 3，表明齐墩果酸对照品
进样量在0.1010 μg-0.9090 μg之间有良好的线性关
系；熊果酸：Y=384330X+2500，r=0.999 7，表明熊
果酸对照品进样量0.0830 μg-0.7474 μg之间有良好的
线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10 μL，
重复进样5次，齐墩果酸的RSD为0.98 %，熊果酸的
RSD为1.0 %，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0，1，2，
4，8 h内测定，记录峰面积，结果齐墩果酸的RSD为
1.9 %，熊果酸的RSD为1.6 %，表明供试品溶液在8h
内稳定。
2.7 重复性试验 精密称取同一凉粉草药材5份，按
2.2项下制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。齐
墩果酸的平均含量 1.405 8 mg/g，RSD为2.9 %，熊果
酸的平均含量3.939 7 mg/g，RSD为2.5 %。
2.8 加样回收率试验 取已测知齐墩果酸和熊果酸
含量的凉粉草粉末（过60目筛）约0.25 g，共6份，
精密称定。分别精密加入一定量的齐墩果酸对照品
和熊果酸对照品，按上述样品制备方法制备样品和
色谱条件测定其含量，计算加样回收率。结果见表
1、表2。
表1 齐墩果酸加样回收率试验结果
表2 熊果酸加样回收率试验结果
2.9 样品含量测定 分别取 3 个不同批次的凉粉草粉
末（过60目筛）各0.5 g，精密称定。按2.2 项下方法制
备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算，结果见
表3。
表3 样品含量测定结果（n=3）
t /min
取样量/g
0.249 6
0.250 3
0.250 5
0.250 4
0.250 1
0.249 9
样品含量/mg
0.350 9
0.351 9
0.352 2
0.352 0
0.351 6
0.351 3
加入量/mg
0.369
0.369
0.369
0.369
0.369
0.369
测得总量/mg
0.733 2
0.710 0
0.711 2
0.721 8
0.729 0
0.729 8
回收率/%
101.85
98.49
98.61
100.11
101.17
101.32
平均回收率/%
100.26
RSD/%
1.5
取样量/g
0.249 6
0.250 3
0.250 5
0.250 4
0.250 1
0.249 9
样品含量/mg
0.983 3
0.986 1
0.986 9
0.986 5
0.985 3
0.984 5
加入量/mg
0.830 4
0.830 4
0.830 4
0.830 4
0.830 4
0.830 4
测得总量/mg
1.854 1
1.825 5
1.786 5
1.805 1
1.836 7
1.811 2
回收率/%
102.23
100.50
98.31
99.35
101.16
99.80
平均回收率/%
100.23
RSD/%
1.4
药材批次
1
2
3
齐墩果酸平均含量/%
0.098±0.003 0
0.088±0.003 0
0.142±0.000 2
熊果酸平均含量/%
0.281±0.004 0
0.253±0.002 0
0.402±0.003 0
mAU
1
2
mAU
1
2
t /min
·417·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
3 讨论
3.1 本实验曾考察了水、20 %甲醇、40 %甲醇、60
%甲醇、80 %甲醇以及甲醇、乙醇溶剂对凉粉草中熊
果酸和齐墩果酸的提取率，结果发现水、20 %甲醇、
40 %甲醇完全提取不出齐墩果酸和熊果酸，而甲醇
提取率最高；同时考察了超声时间对提取率的影响，
结果发现超声30 min提取率最高。
3.2 在实验过程中发现凉粉草的粒度大小影响其成分
的提取率，过60目筛的凉粉草，其成分可提取完全。
3.3 由测定结果可知，不同批次的凉粉草含齐墩果酸
和熊果酸的量相差较大，其原因可能与采收期及产地
有关。
参考文献：
[1] 刘素莲. 凉粉草化学成分的初步研究 [J]. 中药材，1995，18（5）：
247-248.
[2] 秦立红，郭晓宇，范明，等. 凉粉草中抗缺氧化学成分[J]. 沈阳药
科大学学报，2006，23（10）：633-636.
[3] 刘碧容. 高效液相色谱法测定凉粉草中熊果酸的含量 [J]. 佛山科学
技术学院学报（自然科学版）. 2008，26（6）：13-15.
（编辑：修春）
收稿日期：2009-12-30
作者简介：陈丽敏（1985-），女，2007级中药学硕士，研究方向：中药有效部位研究与新药开发。Email:chlm0606@163.com。通讯作者：林辉，男，
研究员，硕士生导师，主要从事中药有效部位研究与新药开发。Email：linhuijwc@126.com。
基金项目：广东省中医药局科研课题项目“桂枝、甘草药对抗心律失常药效的物质基础及作用机制研究”（K2090068）。
桂枝甘草汤挥发性成分的GC- MS测定研究
陈丽敏，林 辉，徐大量，郑夏生（广州中医药大学，广州 510006）
摘要：目的 探讨桂枝甘草汤（桂枝、炙甘草）中主要的挥发性成分。方法 采用GC-MS方法分析10 批次样品
挥发油主要化学组分，用归一化法测定其百分含量。在进样口温度250 ℃，检测器温度260 ℃，载气流速为1
mL·min-1，分流比为50 ∶ 1，柱温60 ℃，保持3 min，10 ℃·min-1升至150 ℃，3 ℃·min-1升至180 ℃，10 ℃·min-1
升至250 ℃，保持2 min的色谱条件下，挥发油主成分可以达到较好分离。结果 共鉴定了桂枝甘草汤中33个挥
发性成分，占挥发性总成分的93 %以上；主要为苯甲醛、苯丙醛、反式肉桂醛、肉桂醛（61.02 %±9.13 %）、
2-甲氧基肉桂醛，红没药醇、十六酸等。结论 桂枝甘草汤中挥发油成分主要来自桂枝挥发油成分；该方法
准确、稳定、可靠，可用于桂枝甘草汤挥发性化学成分的分析研究。
关键词：桂枝甘草汤；挥发油；GC-MS
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0418-04
GC-MS Determination of Volatile Oil in Ramuli Cinnamomi and Glycyrrhizae Decoction
CHEN Limin，LIN Hui，XU Daliang，ZHENG Xiasheng（Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou
510006，China）
Abstract: Objective To investigate the main chemical components of the volatile oil in Ramuli Cinnamomi and Gly－
cyrrhizae Decoction （mainly composed of Ramulus Cinnamomi and Radix Glycyrrhizae Praeparata）. Methods Main
components of the volatile oil in 10 batches of samples were analyzed by GC-MS，and their percentage contents
were determined by normalization method. The inlet temperature was at 250 ℃ and the detector temperature at 260 ℃.
The carrier gas flow rate was 1 mL·min-1 with the split ratio being 50 ∶ 1. The column temperature was held at 60 ℃
for 3 minutes，and then increased up to 150 ℃ at the rate of 10 ℃·min-1，up to 180 ℃ at the rate of 3 ℃·min-1，up
to 250 ℃ at the rate of 10 ℃·min-1 and held for 2 minutes. The main components of the volatile oil can be seperated
well under the above condition. Results Thirty-three chemical components of the volatile oil in Ramuli Cinnamomi
and Glycyrrhizae Decoction were identified，accounting for more than 93 % in all. They were benzaldehyde，ben－
zenepropanal，（E）-cinnamaldehyde，3-phenyl-2-Propenal，3-（2-methoxyphenyl）-2-Propenal，alpha-bisabolol，
·418·