全 文 ：福建省农科 院学报 6(l ): 5 3一 5 9, 1 9 9 1
J o u r n a l o [ F
u j i a n A c a d e二少 o f A g : i c u l t u : a l S c i e n e e s
茎尖培养与增殖研究
陈昔瑛 宋瑞琳 陈景耀 柯 冲
(福建省农业科学院果树研究所 , 福州 35 0 0 1 3 )
摘 要 : 采用积 (实生树 ) 和积橙 (嫁接树 ) 的茎尖在 M S 十 K t Z . o m却 L + N A A o . l m刁 L 十蛋
白陈 3 00 m g / I J + G A 3 0 . 2 m g / L 培养基上具有良好的分化效果 , 可诱 导 大量丛 生芽 , 分 化 出
根、 茎 、 叶俱全的完整植株。 K t能克服顶端优势 , 促进腋芽萌发 , 对于茎 尖繁殖的最适浓 度 为
2
.
0 m g / L
。 适量的蛋白陈可促进茎尖抽枝成苗。 用 1 0 o P m BI A浸泡新梢基部 4 一 6 h , 有利
于试管内生根。 2 0 0 p p m A B T生根粉和 10 0 P m I B A 处理无根试管苗 , ’ 成功地在试管外诱导生
根 , 简化 了试管苗繁殖的步骤。
关键词 : 积 ; 积橙 ; 茎尖培养 ; 增殖
A S t u d y o n S h o o t T IP C u l t u r e a n d I n d u e i n g p r o l i f e r a t i o n o f T r i f o l i a t e
0 r a n g e a n d C i t r a n g e
C h e n J in g y in g
、
S o n g R u i l i n
,
C h e n J in g y a o a n d K e C h on g
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u i t R e s e o r e h nI
s ti : ut e
, 凡 j i a n A e a d e侧 of A g r i e u i r二 r a z s 。 i en e e , , F u z h o u 3 5 0 0 1 3 )
A b s t r a e t : T h i s a r t i e l e d e a l s w i th a p r o m i s in g e f fe e t o n d i f f e r e n t i a t i o n o f t h e s h o o t a p e x
o f T r i f o l 一a t e o r a n g百 s e e d l i n g a n d g r a f t e d e it r a n g e w h e r e i t e o u l d i n d n e e n u m e r o u s e lu m P e d
b u d s a n d d e v e l o P i n t o a n p l a n t w i t h r o o t
.
s t e m a n d l e a f w h e n it w a s e u l t i v a t e d in a M S in
ad d i t i on t
o K t Z
.
o m g / l
,
N A A o
.
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,
P e p t 。 n e 3 0 0 m g / l a
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.
Z m g力, A t e s t o f K t o o n e e n t r a t s o n s
s h o w s t h a t K t e o u l d in h i b i t t h e a p j e a l d o m i n a n e e a n d p r o m o t e t h e g e r m i n a t i o n o f t h e a x i l l
·
a r y b u d
.
T h e o p t i m u m e o n e e n t r a t i o n o f K t f o r t h e a p e x p r o l i f e r a t i o n i s 2
.
0 m g八 . A n a p p r o ·
p r ia t e a m o u n t o f p e p t on e e
o u l d h e l p a n a p e x in d u e in g s h o o t a n d e v e n t u a l l y f o r m s e e d l in g s
.
A t r e a t m e n t o f t h e b a s e o f a y o u n g s h o o t b y s o a k i n g in l 0 0 p P m 1 B A s o I u t i on f o r s e
v e r a
l h o u r s 15 h e l p fu l t o r o o t f o r m a t i o n i n v i t r o
,
T r e a t e d w i t h 2 00 p p m A B T o r 100 p p m
I B A
,
a r o o t le s s s h o o t in v i t r o e o u ld s u e e e s s f u l l y i n d u e e r o o t s o u t s i d e t h e t u be
,
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.
P on e i r
u s t r i f o l i a t a : C i t r a n g e ; S h o o t t i p e u l t u r e : P r o l o fe r a t i on
积 ( P o n C i r u S t r i f。 l i a t a ) 是柑桔类果树常用的优良砧木之一 , 生产上通常采用种子繁
收稿 日期 : 1 9 9于 1 一 2 8
福建省农科 院学报 第 6 卷
殖 , 繁殖率低 , 出苗不整齐。 鲁斯克 ( R u s k C i t r a n g e ) 和特洛亚积橙 ( T r o y e r C i t r a n g e )
是从国外引进作为鉴定碎叶病的指示植物 , 同样存在如何快繁的问题。 日高哲志 〔1 〕 、 张进仁
等 ’ “ ` ’ · ’ “ ; 分别以积花药 、 积胚珠和积试管实生苗茎段 为外植体进行离体培养 , 均获得完整
植株 。 但未见有关积和积橙茎尖培养的报道 。 本试验的 目的在于探讨积 (实生苗 ) 和积橙 (嫁
接苗) 通过茎尖培养诱导丛生芽 , 分化培育茎尖苗 , 为积砧和积橙的无性系快速繁殖开辟新
途径 。
1 材料与方法
分别取在网室培育 3 年的积实生树和鲁斯克 、 特洛亚积橙嫁接苗顶芽 1一 1 . 5 C m , 剥至
5 一 8 m m , 除去幼叶 , 将茎尖材料移入超净台用 10 %安替福民消毒 10 m i n , 无菌水清洗 3
一 5 次 , 剥取 2 m m 左右的茎尖 , 接种于 M S 培养基 (附加K t 0 . 5 一 3 . o m g / l , N A A O . l 一
0
.
5 m g / l及 G A 3 0 . 2 m g / l) 上进行初代培养。 将培养后的丛生芽切下 , 接种于继代培养
J
,
t
_
I几。
初代和继 代培养基为添加不同浓度植物生长调节物质和有机添加物的M S培养基 , 均含
3
.
0 %蔗糖 , 0 . 5 %琼脂 , p H S . s 一 6 . 0 . 每天光照 1 5 0 0 l x 一4 h , 室温 2 5 士 Z O C 。
2 结果与分析
2
.
1 积茎尖苗的培养
2
.
1
.
1 丛生芽的诱导 、 增殖和生长
2
.
1
.
1
.
1 外源激素对茎尖增殖的影响 : 在基本培养基M S 添加有适量蛋白陈的培养基 中添
加外源激素 , 对诱导丛生芽具有重要作用 。 由表 l 可以看出 , 附加 K t 0 . 5 一 3 . o m g l/ N A A
0
.
1 一 0 . 5 m g / 1 , G A 3 0
.
2 m g / 1和相 同有机添加物的 M S 培养基 , 均能使茎尖成活 、 增
殖 。 但外源激素的配比不同 , 茎尖的萌动和增殖个数亦不同 。 在G A 3定量为 0 . 2 m g / 1条件
下 , K t以 2 . 0 m g八 , N A A 以 0 . 1 m g / ! 为最合适 , 各个茎尖生长速度较为一致 , 1 个月后
形成丛生芽 〔 图 1 〕 , 每个茎尖所分化的丛生芽数平均达 .6 2 个 , 最高达 15 个 。 在 N A A为
0
.
1 m g / ! 时 , K t 浓度高于或低于 2 . o m g / l对茎尖的萌动增殖都明显不利 ; 或 K t 浓 度 为
2
.
0 m g / ! 时 , N A A 超过 0 . 1 m g 八 , 它们丛生芽的诱导增殖也受到抑制 。
2
.
1
.
1
.
2 有机添加物对茎尖培养成苗的影响 : 在附加相同激素的培养基 中 , 再 添加 不 同
浓度的蛋白陈 , 以不加蛋白陈作对照 。 结果 (表 2 ) 表明 , 添加适量的蛋 白陈可促进茎尖抽
枝成苗 〔 图 2 〕 。 其中 , 以附加 2 0 0 一 4 0 0 m g / 1效果最好。 随着蛋 白陈浓度的增加 , 形成
芽的数 目反而下降 , 这可能是由于蛋白陈的浓度提高分解产生有毒物质抑制芽的成长。
2
.
1
.
1
.
3 培养基成份对茎尖诱导芽丛的影响 : 茎 尖接种在 4 种不同的培养基 (表 3 ) 上初
代培养 2 0 天以后 , 基部膨大 , 继而分化出 2 一 4 个浅绿色芽状突起。 进 一步培养便长成丛
生芽 。 从表 3 可以看出 , 丛生芽的诱导率与培养基成分密切相关 , 其中以培养基 N 组 : M S
+ K t Z
.
o m g / 一+ N A A o . l m g 门 + 蛋白陈 3 0 0 m g / l + G A 3 o . Z m g / 一的效果最好 , 诱导
率可达 0S 肠 , 所以我们便把培养基 W组作为今后使用培养基。
第 1 期 陈昔瑛等 :积和积橙的 茎尖培养与增殖研 究 5 5
表 外 源 激 素 对 茎 尖 增 殖 的 影 响
1
’
a b le
.
E e f fe ts o fe x te a r n l ho rm o ne o na pe x po r l ife a r t io n
培养从
外源激素
(m 只/ l )
E x之e r r飞a l卜o rm o e n
M e d一a
接种茎尖数
(个 )
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增殖丛生芽
华尖数 (个 )
No
.
o fa pe e s x
Po r l一 fe a r te d
诱导率
(% )
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总芽数
(个 )
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平均每个茎
尖分化芽数
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.
No
.
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fo rm a a n pe x
1 0 0 03 2 6 26
.
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2
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2
.
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.
6
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.
0 0
.
2
3
.
6
2
.
8
表 2
T a b ! e 2
.
E f f e e t s
蛋 白 陈 对 积 茎 尖 培 养 成 苗 的 影 响
o f P e P t o n e o n a P e x in d u e t io n a n d d e v e l o p in g p l a n t le t s
陈 接 种 茎 尖 数 诱 导 成 苗 数 诱 导 率蛋 白 浓 度 笨 扮 血
( m g 八 )
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(个 )
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.
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(个 )
N o
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( % )
I n d一 c t 一`叭 r a t e
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.
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.
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.
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20468
2
.
1
.
2 根的诱导
2
.
1
.
2
.
1 试管 内诱根 : 当试管苗长到 3c m 以上时 ,
溶液中浸渍 4 一 6 h, 再转入言 M S 生根培养基中 ,打开瓶塞炼苗 2 一 3 天 。 将苗取出洗净根部的培养基 ,
将绿芽从基部切下 , 在 10 p p m的 I B A
20 天后相继分化出根 , 并有新叶萌发 ,
再移入盛有泥炭土和蛙石拌匀的盆钵
中 , 用玻璃罩罩住 , 保持足够的湿度 , 小苗生长良好 〔 图 3 〕 。 1 9 89 年 9 月 18 日移栽 , 1
月 3 0 日调查小苗长势 , 平均株高增长 2 . 4 cm , 平均叶片数增加 9 . 5 片。
福建省农科院学报 第 6卷
表 3 培 养 基 成 份 对 积 茎 尖 诱 导 芽 丛 的 影 响
Ta b le 3
.
E e f fe ts of t he e om pe n n ot ofe u l tu e rm e i dum ons h o ot ti pI n du e i ng s h) ( ots
诱 针 率
Me d, a ( m g / l )
接种外植体数
(个 )
N 〔 ,
.
(一f e x P l a n t s
In 《一r u l a t e 〔l
诱异芽丛外植体数
(个 )
N 一` 、` f e x P l a n t s
一n d u e t e (】
( %
)
一n d u ( L . 《 ) n r a t `
2304M S
M S , K t 2
.
0 + N A A 0
.
1
M S + K t 2
.
0 斗一 N A A O . l + 蛋白陈 3 0 0
M S + K t 2
.
0 + N A A O
.
1 + 蛋白陈 3 0 0
10
l 7
2 6
.
1
5 0
.
0H川VI
Z j 2 0 印 . 0
+ (奋A 0 . 2
2
.
1
.
2
.
2 试管外诱根 无根试管苗先进行炼苗 , 再取出洗净 , 剪去下部叶片 , 留取上部
2 一 4 张正常的叶子 , 经 10 P m IB A或 2 0 P m A B T浸蘸 , 插入准备好的盆钵中 , 扦插前
先浇透水 , 保湿和光照等管理措施与有根苗的移栽相同。 为了解扦插基质和激素对无根试管
苗长根的影响 , 进行了以下 2 个试验 :
2
. 】 . 2 . 2 . 1 扦插基质对生根的影响 采用不同的基质 , 扦插 20 天后统计其生根率 , 试验
结果 (表 4 ) 表 明 , 无根试管苗扦插于菜园土中不易成活 ; 扦插于河沙 、 蛙石 、 珍珠岩或蛙
石拌泥 炭土中生根率可达 36 . 0 一 85 . 7 % , 经显著性测定 , 扦插于河沙 、 蜂石 、 珍珠岩中的生
根率之间差异不显著 (t = 0 . 16 89 , n = 4 0 , t 。 .0 5 = 2 . 0 21 ) ; 而扦插于蛙石拌泥炭土中
的生根率极显著地高于蛙石与河沙 ( t = 3 . 0 4 5 , n = 4 1 一 2 、 4 0 , t 。 . 05 = 2 . 0 2 1 , t o . o l
二 2 . 7 0 4 ) , 因此 , 选用合适的基质 , 对提高生根率是重要的 。
表 4
T a b ! e 4
.
E f fe e t s
扦 插 基 质 对 生 根 的 影 响
o
f
e u t t in g e o n d i t i
o n o n P l a n t l e t r o o t in g
扦 插 从 质
e 一 t t 且n 只 m e d ] a
扦 插 株 数
c L l t t 一n g s
生 根 株 数 生 根 率 ( o/ )
一i m p l a n te d N 硬) . 一) f f u t t 一n 只 sr ( ) ( , t e d菜园 上 v e g 。 t 。 I〕 ]。 ` 。 , d e 。 、 ` -宁可沙 R v e , 5 、 a n 。-
珍珠岩 P。 。 . 1, , 。
蚌石 v ,】 r 。 , , 。 。 一。 t 。
奸石 十 泥炭石 土 v 。 , m . 〔 u ! a t e 十 P e a t
15
15 40
_
O
3 6
`
0
4 0
_
O
8 5
.
7
只J门lq乙qù9
2
. 】. 2 . 2 . 2 激素对扦插生根的影响 无根试管苗浸泡 l o o P m I B A 或 2 0 0 即 m A B T溶液 ,
以不浸蘸任何溶液为对照 。 20 天后统计结果。 从表 5 可见 , 浸蘸 1B A和 A B T 可促进生根 ,其
生根率分别达 58 . 5 肠及 6 1 . 0 肠 , 说明这两种激素都可用来浸蘸无根苗诱导生根 。
第 1 期 陈著瑛等 :积和积橙的茎尖培养与增殖研 究
表 5激 素 处 理 对 生 根 的 影 响
Ta b le 5
.
E e f fe ts o f ho r mo e o n ns ho o to ro t ing
项 目 扦 插 株 数 生 根 株 数
No
.
() f r u t t . n只s N (一 o fe u t t一 n只s
生 根 率
Ro o t一 ng a r te (肠 )
一 P mla n te d
1 0 0 p p mI B A
2) (X P p mA B T
对 照 (e o n t ro l)
l7
l 8
l 0
l l
8 5
.
8
61
.
0
2
.
2积橙 ( po nC ir us t r ifo l la ta L . XC it r us S ine ns is L .) 的茎尖培养
采用上述积茎尖培养方法进行积橙茎尖培养 , 包括鲁斯克 ( R u s k C i t r an g e ) 和特洛亚
积橙 ( T r 。 y e r e i t r a n g e ) 均得到与积茎尖培养相类似的结果 〔 图 4 、 5 、 6 〕 。 从初步结
果看 , 积橙茎尖苗的分化速度比积茎尖快 , 也易于培养壮苗。
3 讨论
近十多年来 , 我国在柑桔和积的离体组织培养发展迅速 , 取得明显进展 〔 ” 、 4 、 5 、 “ 、 ” 、 ’ ` 〕。
最近 , 张进仁等 〔` 1 ’ 采用积试管实生苗茎段 ( 1c m 左右并带一个腋芽 ) , 诱导出多芽苗 , 为
积砧的无性系快速繁殖提供一定的依据。 本研究结果表明 , 多年生积 (实生苗 ) 和积橙 (嫁
接苗 ) 的茎尖 (2 m m左右 ) , 在基本培养基 M S 附加一定量外源激素和有机添加物的培养基
上 , 通过一定的培养条件 , 均能使芽原基不断增加 , 诱导出丛生芽 。积的茎尖培养增殖率 (每
个茎尖平均可分化丛生芽 6 . 2 个 ) 较张进仁等报道的试管实生苗的茎 段培养增殖率 (每个茎
段平均分化 5 个 ) 高 24 % , 说明积和积橙可以通过茎尖培养途径进行无性系快繁 。
由于病毒在植物 , 尤其木本植物体内分布不均匀 , 但在幼嫩的茎尖分生组织中含量很低
甚至不含病毒 , 所以采用茎尖组培 , 可 以获得无毒梳 这在草葛 、 无花果 、 马铃薯 、 百合花
和兰花等植物上均 已获得无毒苗 〔 1“ 〕 。 近年来在柑桔上茎尖微芽嫁接技术已成为脱除柑桔黄
龙病 〔7 , ` 5 〕 、 裂皮病 、 衰退病等病毒病或类似病毒病的病原 , 获得无病苗的重 要而有效的 手
段 〔 ` 4 , ’ “ 〕。 尽管这一技术可脱除多种病原 , 是相对先进的方法 , 但茎尖嫁接苗成活率较低 ,
生产成本较高 , 只能繁育一定数量的无病基础苗。 通过改进茎尖培养技术 , 直接 取微 茎 尖
( 0
.
s m m以下 )〔“ 〕 进行培养获得无毒苗 , 则无病毒苗繁殖的速度将更快。 这是值得进一步
研究的。
另据已有报道 , 柑桔的茎尖培育通过外植体诱导愈伤组织再分化成再生植株 , 存在一定
的变异 〔连、 孰 “ 〕 。 最近 , 我们采用雪柑实生苗和嫁接树的茎尖进行离体培养 , 不经愈伤组织而
直接诱导成苗 , 均 已获得根 、 茎 、 叶俱全的完整植株 〔 9 〕 。 因此 , 积和 积橙 的茎尖培养获得
成功 , 将为今后进一步研究通过柑桔茎尖培养进行柑桔无性系的快繁和工厂化育苗奠定了新
的基础 。 由于采用茎尖培养而直接诱导丛生苗 , 不会因染色体变化而产生种质变异 , 所以这
8 5福建省农科院学报 第 6 卷
一研究结果对保存种质具有一定的实践意义。
在诱 导生根处理中 , 采取 了以下两种方法 :
转入不力日激素的告 一是用
1 0 即 m I B A 浸泡新梢数小时 , 然后
M s 培养基中 , 二是无根试管苗在试管外诱导生根。 前者同毋锡金 2 ’ 在苹
果上得到的结果是一致的。 后者能够简化试管苗繁殖的步骤 , 将今后 积和 积橙的 无性系快繁提
供新的诱 导生根方法 。
如何提高茎尖丛生芽的增殖 系数 , 是今后应用这一技术快繁积和积橙无性系的前提 「 从
初步的试验结果可看出 , 培养基中的外源激素水平和添加有机物的浓度与茎尖诱 导丛生芽的
个数关系密切 。 进一步研究 K t 、 N A A 和蛋白脉等的适宜配比 , ; J f能是增加每个节尖分化丛
生芽个数的重要途径。
参 考 文 献
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A
r e v i e w
`
P r o e
.
I n t s ( ) e
.
C it l e u l t u r e
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