全 文 ：茎尖嫁接结合预热处理脱除温州蜜柑碎叶
积橙矮化病毒
M K o iz u i m
由碎叶一一积橙矮化病毒引起的嫁接口
皱折病状 , 在 日本的一些积壳砧品种或无性
系上发现 。 近年来 , 由于大力进行高接换种
而 引起某些病毒包括碎叶一一积橙矮化病毒
( T L一 C S V ) 广泛传播 。 利用切 / 30 ℃ (白
天 / 夜间温度 ) 处理 60 天以上可以脱除碎叶
病毒 , 然而温州蜜柑苗木不耐这种热处理温
度 。 由M u r a s h i g e 等发现 , 经 N a v a r r o 等
改进的茎尖嫁接技术能够有效地脱除病毒 ,
类病毒及柑桔螺原体 ( S . C i t r i) 但碎 叶 病毒
例外 。 本文报道了利用茎尖嫁接结合短期予
热处理脱除温州蜜柑 “ N i y u ” 的碎叶病病毒 。
材料与方法
预热处理 : 用嫁接在粗柠檬上的两年生
的温州蜜柑 “ N i y u ” 盆栽植株为材料 , 这种
品种带有能引起厚皮莱檬碎叶 , 鲁斯克积橙
矮化 , 枝条扭曲和严重斑驳的碎叶病毒以及
苗黄型 , 衰退病毒 。 剪除大部分叶片后 , 置
于 25 ~ 30 ℃的玻璃温室里促进新梢的生长 ,
当新梢长到 3~ s m ln 时移 到 光 照 为 1 0 , 0 0 0
L u x
, 每天 12 个小时 , 温度控制在 35 ℃的 生
长箱生长 ( 试验 1 ) , 其它处理生长温 度 为
40 ℃和 30 ℃每隔 1 2小时交替 ( 试验 2 ) 。
嫁接 : 经与上处理后 , 收集 5一 10 m m
长的嫩梢 ,切除大的叶片 , 将嫩梢浸在 0 . 25 %
次氯酸钠加 0 . 1%叶温一 20 溶液里消 毒 , 然
后用无菌水冲洗 3次 , 根据 N a ay r r 。等 所提
出的方法进行茎尖嫁接 。 特洛亚积橙种子在
无菌条件下 , 在 28 ℃ `巨温黑暗培养 12 天 , 长
出的幼苗从子叶上 cZ m 处去顶 。 用 带柄的刀
片削去消毒过的茎尖的叶原 基 。 最后 , 再用
刀片将茎尖切成只含顶端分生组织和 3一 4个
叶原基 ( 0 . 2一 o . 4m m 长 ) , 把茎尖放 在被
切除的砧木上 , 在无菌条件下 , 把嫁接的植
株放置试管中碟形的滤纸上 , 根部 浸 入 经
N va ar
r o 修改过的M S嫁接培养基上 , 然 后
置于28 ℃温度下黑暗中过夜 , 最后移入生长
箱 , 这个生长箱光照为 1 0。。一 1 5 0 L u x , 每
天 12 个小时 , 恒温 28 ℃ , 当新芽长出时 , 光
照改为 1 0 ` 0 0 0 L u x , 当新芽长 到 1一 3 m m
时 , 嫁接苗从试管中移出来 , 从子 叶 处 切
下 , 然后腹接或靠接在 l一 2年生的粗柠檬的
植株上 , 促进茎尖生长 。
鉴定 : 嫁接苗要鉴定是否还有碎叶积橙
矮化病毒及裹退病毒 。 从每个植株上取下发
育健全的和成熟的叶片或枝条 , 并将它们腹
接于粗柠檬苗木上 , 用特洛亚积橙或厚皮来
檬接穗高接在粗柠檬上 , 被鉴定的植株存放
在温度为 20 一 24 ℃温室里 6一 12 个月 , 促 进
其抽梢 , 定期观察 , 并且修剪促进 新 梢 生
长 。 衰退病的鉴定用 E L ls A方法 , 利 用 抗
C T V一 S P血清 , 参考 C l a r k和 A d a m s以 及
B a r一 J o s e p h等做法 。
试 验 结 果
’ 一试验 1 , “ N i y u ” 品种存放在 35 ℃温室
里 , 然后取新梢进行微芽嫁接 。 试验 表 明 :
用经过 13 夭的予热处理的 0 . Z m m茎尖进行嫁
接 , 既使脱除了衰退病病毒但还不能脱除碎
叶病毒 (见表 1 )这样植株接种在鲁斯 克积
橙上表现出明显 的碎叶病症状 , 如 枝 梢 扭
曲 , 矮化 , 叶片缺损和严重的斑驳以及引起
厚皮来檬 ( C , e x e e l s a ) 的碎叶症状 。 经
过 1 9天热处理 , 再进行茎尖微芽嫁接 , 获得
1株既没有碎叶病也没有衰退病的植株 , 其
他 4株发现没有衰退病但有碎叶病 。 这 些 植
株中的碎叶病毒产生出典型碎叶病状但是在
鲁斯克积橙上较少出现矮化症状 。 热处理 32
天后进行茎尖微芽嫁接 , 获得 2株既没 有碎
叶病也没有衰退病的植株 。
试验 2 , 植株置于 40 ℃与 35 ℃间隔 12 小
时交替予热处理之中 , 不过 , N i y u 品 种 完
全停止抽梢 , 而芽逐渐凋萎 , 因此 , 处理温
度在 40 / 30 ℃ 9天后改为 35 / 30 ℃ , 在 较 低
的温度下 , 长出许多新的芽 , 经 29 天培养 ,
取 0 . Zm m或更小茎尖进行微芽嫁接 。予热处
理在 40 / 30 ℃ 9天不能脱除碎叶病病毒 ( 见
表 1 ) , 予热处理 4 0 / 3 0℃ 9天 加 上 3 5 / 3 0
℃ 6天也不能脱除碎叶病病毒 毒 , 然 而 ,
表 1 热处理结合茎尖微芽嫁接温州蜜柑 “ N l y u ” 植株的
碎叶矮化病毒及衰退病毒的鉴定结果
试验次数— 预 热 处 理温度
3 5 oC
3 5 oC
3 5℃
时间 茎尖大小
嫁 接
成活数
无碎叶病植株数 . 无衰退病植株数 .
0
.
2一 0 . 4毫米
0
.
2毫米
0
.
2毫米
天0口今é刁土,上、O
4 0 / 3 0℃
4 0 / 3 0℃
+ 3 5 / 3 0℃
4 0 / 3 0℃
+ 3 5 / 3 0℃
4 0 / 3 0℃
+ 3 5 / 3 0℃
4 0 / 3 0℃
+ 3 5 / 3 0℃
9天
9天
6天
9天
1 3天
9天
2 0天
g天
2 0天
0
.
2毫米
3 0 1
5 1 5
2 2 2
2 0 2
0
.
2毫米
0
.
2毫米 3
0
.
2毫米 3
0
.
4毫米 1
碎叶一矮化病毒鉴定用鲁斯克积橙和厚皮莱檬 ( C 、 e Xc e l s a )
衰退病毒鉴定用 E L A sl 方法
热处理 4 0 / 3 0℃ 9天加上 3 5 / 3 0 oC 1 3 天 或
2 0天后取 0 . 2 m m 的茎尖进 行 微 芽 嫁 接 ,
能够脱除碎叶病病 毒 。 而 取 0 . 3一 0 . 4 m m
茎尖进行微芽嫁接 , 既使热处理 29 天 也 不
能 脱 除 碎叶病病毒 。 当用鲁斯克积橙作指
示植物鉴定时 , 热处理 9一 17 天的茎尖 长 出
的植株仍然表现严重的碎叶病病状 , 与上述
相比 , 热处理 29 天茎尖所长的植株带有碎叶
病表现出叶片斑驳 , 但没有出现枝梢扭曲和
矮化的症状 。
讨 论
为 了从北京柠檬脱除碎叶病病毒 , 需要
热处理 4 0 / 3 0℃ 6周加上 4 / 30 ℃ 2周 ,热处理
( 下转第14 页 )
表 1不同月份处理的效果调查表
( 天数 )列鲤声州闷夔巨遍盛些一川…鑫、开花结果期施用 。 生长初期 以氮肥为主 , 生
长后期以磷 、 钾肥为主 。 全年肥量分九~ 十
次施用 , 即三月份开始每月施一次 ; 以促进
开花结果及增大果粒 。 不同树龄的植株全年
施肥量可参考表二 。
灌溉 : 番石榴需水量甚高 , 施肥更应配
表 2 番石榴系施肥最表 ( 单位 : 克 )
. . . . 口, . . . . , . . . . 、 , . 叫 . 目 “一~ .一树 龄 硫酸钱 过磷酸钙 硫酸钾一 1一 }一 }_ _ _1年2年3~ 4年5一 6年
7~ 8年
9一 1 0年
1 1年以上
2 0 0
3 0 0
6 0 0
1 0 0 0
1 2 5 0
1 5 0 0
2 0 0 0
2 0 0
3 0 0
6 0 0
6 6 0
7 7 0
9 9 0
1 1 0 0
8 0 0
1 2 0
2 4 0
4 0 0
5 0 0
6 0 0
8 0 0
合灌水 , 尤其在干旱的秋冬两季 , 每十夭左
右灌水一次 ; 春夏季要注意排水 。
疏果 : 番石榴花蕾通 常成对着生 , 有单
花 , 二花集生及三花簇生 。 新梢若有单生花
序 , ’ `在未结果时不应摘除 ; 二花集在花序可
在未开花时疏除较小花蕾 ; 如为三花簇生花
序 , 于花蕾开放前即行疏除左右 两花 , 保留
中央无柄之果实 。 花谢后 , 视果实发育情形
参酌枝梢节问长短 , 以其叶片大小厚薄再将
较劣的幼果摘去 , 每枝约留一至四个 。 叶大
厚的多 留 , 叶小薄的少 留。 叶节短而枝小 ,
仅留一果或整枝剪除 。
摘心 : 番石榴每有新梢萌发花穗随即抽
出 , 宜将六节 叶以上的捎端用手摘心 , 使叶
片提早成熟 , 以利开花和果实发育 。 为了达
到周年生产摘心工作必.须 随时进行 。
套袋 : 为 了增进果皮美观 , 防止病虫害
或鸟害 , 减少果皮粗糙 , 在果实发育到直径
达 1厘米时进行套袋 , 以 增加商品价 值 , 最
好利用不透明的纸袋 。
间作 : 番石榴果园进行间作不但充分利
用了空间和阳光 , 更可防止杂草丛生 , 节省
管理作业成本 , 增加果农 收益 。 已推广的间
作作物多是短期的蔬菜与花卉 。一一一一- 一 , 月一一 . . 血 ` ~ . ~ . ~ `一 、 ~口、 脚 ` . 曰 . 沪、 夕、 户门 。 .卜. 喇叫 , 二 d , 月 、 沪 、 尸 .旧 『吕碑 、 亡 ` 卜净以 .一 户门 声 , 成 J , . 、 声 . 匕刁自 , ` 、 , 洲 叫 , 洲 ` . ` . , 公 ` 气 户 , 、 二 . 『` 户 、 产 、 .( 上接 5 2页 )38 ℃ 16 周或者 40 / 30 ℃ 12 周都不能脱除碎叶病病毒 , M i y a k a w a 指出 ,某些柑桔苗木要脱除碎叶病需要热处理 4 0 / 30 ℃ 90 天或者更长
一些时间 。 利用瑟处理苗木禾吞热生气处理
50 ℃ 4一 2 小时 ,北京柠檬的碎叶病病毒得到
脱除 。 然而 , 温州柑不能忍耐这么高的热处
理温度 。 R io “ t a c h e r等利用茎尖嫁 接 脱 除
北京柠檬的碎叶病毒 , 三次试验都没有得到
成功 ( 私人通讯 ) 。 本试验表明 , 利用短时
间热处理结合茎尖嫁接能够解决这个困难 。
N a V a r r 。 等还同样指出 , 类似鳞皮病的病原
经过热处理加上茎尖微芽嫁接可 以被脱除 。
O l u d ia 等证实予热处理 40 / 30 ℃ 40 天 或 者
更长一些时间可以提供 5一 13 m m长 的 没有
衰退病的茎尖 , 然后进行简易嫁接 , 同样可
以得到没有衰退病的植株 。 以上这些表明 ,
热处理结合茎尖嫁接是脱除柑桔苗木病毒病
病原最有效的方法 。 ( 参考文献略 )
宋瑞琳摘译 自p r o e ’ q t h e o 二 f I o e v
P 2 2 9一 2 03 3
吴如健校