全 文 ：收稿日期： 2014－06－23
作者简介： 高雅 （1985－）， 女， 硕士研究生， 讲师； E－mail： svidy＠163．com
通讯作者： 张可锋 （1982－）， 男， 讲师； E－mail： xueshengcailiao＠163．com
基金项目： 国家自然科学基金项目 （编号： 81360685）； 广西科技攻关项目 （编号： 桂科攻 14124004－2－13）； 广西自然科学基金项目
（编号： 2013GXNFBA019179）； 国家级大学生创新创业训练计划项目 （编号： G201410601010）
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
狗肝菜多糖对抗结核药物致肝损伤的研究
高雅， 钟明利， 钟家良， 张可锋
（桂林医学院药学院， 广西桂林 541004）
摘要： 【目的】 研究狗肝菜多糖 （DCP） 对抗结核药物致肝损伤的保护作用及机制。 【方法】 将 60 只小鼠随机分为 6 组， 即
正常对照组、 模型组、 葡醛内酯组 （剂量为 200 mg ／ kg） 及狗肝菜多糖高、 中、 低剂量组 （剂量分别为 600、 400、 200 mg ／ kg）。
除正常对照组外， 其他各组均灌胃异烟肼和利福平各 100 mg ／ kg 造模， 同时给予治疗药物， 每天 1 次。 在实验的第 30 天，
取血和肝组织， 采用生物化学法检测血清中丙氨酸转氨酶 （ALT）、 门冬氨酸转氨酶 （AST）、 碱性磷酸酶 （AKP） 以及微粒
体一氧化氮 （NO） 生化指标； 采用酶联免疫吸附法检测肝组织中肿瘤坏死因子－α （TNF－α）、 白细胞介素－6 （IL－6） 含量；
应用苏木精—伊红 （HE） 染色进行肝组织病理学检查。 【结果】 狗肝菜多糖可减轻抗结核药物引起的小鼠肝组织病理损害，
减少炎性细胞， 对肝损伤小鼠血清 ALT、 AST、 AKP 活性及肝组织中 TNF－α、 IL－6、 NO 含量具有抑制或降低作用 （P＜0．05
或 P＜0．01 ）。 【结论】 狗肝菜多糖对抗结核药物致肝损伤的保护作用可能与其介导的抗炎作用有关。
关键词： 狗肝菜多糖 ／药理学； 肝损伤 ／中药疗法； 肝 ／病理学； 疾病模型， 动物； 小鼠
中图分类号： R285．5 文献标志码： A 文章编号： 1007－3213 （2014） 06 － 0953 － 04
DOI： 10． 13359 ／ j． cnki． gzxbtcm． 2014． 06． 023
狗肝菜 Dicliptera chinensis （L．） Nees． 是爵床
科华九头狮子草属狗肝菜的全草， 为西南民间常用
药材， 主要含有多糖、 有机酸、 氨基酸等物质 ［1］。
近年来， 对狗肝菜多糖的药效实验多为化学性肝损
伤的研究， 并证实其对化学性肝损伤具有良好的保
护作用［2］。 检索国内外相关文献， 均未见狗肝菜多
糖对抗结核药物致肝损伤的报道。 因此， 本研究采
用临床常用的具有肝毒性的抗结核药异烟肼、 利福
平致肝损伤模型进行相关研究， 探讨狗肝菜多糖对
药物性肝损伤的药效和作用机制， 现报道如下。
1 材料和方法
1． 1 药物 狗肝菜经广西中医药大学韦松基教授
鉴定为爵床科华九头狮子草属狗肝菜 Dicliptera
chinensis （L．） Nees．的全草。 取干燥的狗肝菜全草
粗粉， 经石油醚回流提取脱脂， 挥尽石油醚后， 沸
水提取 2 次， 每次 1．5 h， 合并提取液， 浓缩提取
液， 用氯仿—正丁醇 （体积比为 4∶1） 多次萃取
（即 Sevag 法）， 得到除去蛋白质的上清液， 加体积
分数 95％乙醇使醇含量达到 80％， 于 4℃冰箱中醇
沉 12 h。 抽滤 ， 弃去上清液， 滤渣依次用乙醚、
丙酮、 无水乙醇洗涤， 即得狗肝菜粗多糖。 将狗肝
菜粗多糖溶于水， 加样到经 pH 8 的磷酸盐缓冲液
前处理的 DE52 型树脂层析柱中， 静止 12 h， 用蒸
馏水以 2 mL ／min 流速洗脱， 合并洗脱液， 真空干
燥得粉末状狗肝菜多糖 （DCP）。 狗肝菜多糖用葡
萄糖作对照品 ， 采用苯酚—硫酸法显色 ， 经紫
外—可见分光光度计测定样品中的多糖纯度达
768 mg ／ g。
1． 2 动物 SPF 级昆明种小鼠 60 只， 体质量 18
～ 22 g， 雌雄各半， 由桂林医学院 SPF 实验动物中
心提供， 许可证号： SCXK2007－0001。
1． 3 试剂与药物 丙氨酸转氨酶 （ALT）、 门冬氨
酸转氨酶 （AST）、 碱性磷酸酶 （AKP）、 肿瘤坏死
因子－α （TNF－α）、 白细胞介素－6 （IL－6） 以及微
粒体一氧化氮 （NO） 试剂盒均购于南京建成生物
工程研究所 ， 批号分别为 20131210、 20130324、
20131016、 20130428、 20131010、 20130620； 葡醛
内 酯 片 （ 湖 北 华 中 制 药 有 限 公 司 ， 批 号 ：
20130713）； 异烟肼片 （上海信谊药厂有限公司，
批号： 20130112）； 利福平胶囊 （成都锦华药业有
限责任公司， 批号： 20121220）。
2014 年 11 月第 31 卷第 6 期
November 2014，Vol． 31，No． 6 953
1． 4 仪器 TGL－16K 台式高速冷冻离心机 （湖南
湘仪离心机厂）； AU600全自动生化检测仪 （日本奥
林巴斯公司生产； BX51显微镜 （日本奥林巴斯公司
生产）； BS1105电子天平 （德国Sartorius公司）。
1． 5 造模 ［3－5］和给药 60 只小鼠随机分成 6 组，
每组 10只， 分别为正常对照组、 模型组、 葡醛内酯
组和狗肝菜多糖高、 中、 低剂量组。 除正常对照组
外， 其他各组均给予异烟肼联合利福平各 100 mg ／ kg
造模， 每天口服给药 1次； 狗肝菜多糖高、 中、 低
剂量组剂量分别为 600、 400、 200 mg ／ kg， 葡醛内
酯组剂量为 200 mg ／ kg， 正常对照组每天灌胃给予
注射用水， 阳性对照组和给药组小鼠每天按剂量
灌胃给药 1次， 共给药 30 d。
1． 6 生化指标的检测 在实验的第 30 天， 禁食
不禁水 18 h 后从眼球取血和取肝组织。 参照试剂
盒的说明书， 采用生物化学法检测血清中 ALT、
AST、 AKP 以及微粒体一氧化氮 （NO） 生化指标，
酶联免疫吸附 （ELISA） 法检测肝组织中 TNF－α、
IL－6含量。
1． 7 肝组织病理学检查 取小鼠肝左叶， 固定于
40 g ／ L 多聚甲醛溶液中， 石蜡包埋、 切片、 应用
苏木精—伊红 （HE） 染色， 在光镜下观察肝组织
病理学变化。
1． 8 统计方法 应用 SPSS 13．0 软件进行统计分
析， 数据均以均数 ±标准差 x ± s 表示。 组间比较
采用 t检验。
2 结果
2． 1 各组对肝损伤小鼠 ALT、 AST、 AKP 活性的
影响 表 1结果显示： 与正常对照组比较， 模型组
ALT、 AST、 AKP 活性均显著升高 （P＜ 0．01）， 说
明本研究造模成功。 与模型组比较， 葡醛内酯组和
狗肝菜多糖各剂量组均能显著抑制 ALT、 AST、
AKP 活性 （P＜0．05 或 P＜ 0．01）， 且呈一定的量效
表 1 各组对异烟肼联合利福平致肝损伤小鼠 ALT、 AST、 AKP 活性的影响 （x ± s）
Table 1 Effect of DCP on activities of ALT， AST and AKP in mice with liver injury
induced by isoniazid and rifampicin J ／ （U·L－1）
组别 N ALT AST AKP
正常对照组 10 35．87 ± 19．28 48．32 ± 24．10 9．34 ± 1．18
模型组 10 301．21 ± 21．36① 369．69 ± 29．38① 19．32 ± 2．39①
葡醛内酯组 10 92．68 ± 22．46③ 109．62 ± 34．69③ 13．29 ± 3．29②
DCP 高剂量组 10 126．92 ± 19．68② 145．69 ± 22．59③ 13．39 ± 2．31②
DCP 中剂量组 10 194．64 ± 33．52③ 251．32 ± 36．22② 15．12 ± 2．17②
DCP 低剂量组 10 238．63 ± 32．65② 274．05 ± 33．31② 15．95 ± 2．00②
①P＜0．01， 与正常对照组比较； ②P＜0．05， ③P＜0．01， 与模型组比较
组别 N ρTNF－α ／ （pg·mL－1） JIL－6 ／ （U·L－1） bNO ／ （μmol·g－1）
正常对照组 10 20．34 ± 2．65 25．62 ± 5．35 0．25 ± 0．06
模型组 10 73．10 ± 7．69① 87．66 ± 6．61① 0．74 ± 0．19①
葡醛内酯组 10 49．36 ± 5．98③ 61．62 ± 6．71③ 0．49 ± 0．08③
DCP 高剂量组 10 40．70 ± 5．61③ 51．11 ± 6．85③ 0．45 ± 0．16③
DCP 中剂量组 10 46．11 ± 8．12③ 60．47 ± 5．10③ 0．51 ± 0．05③
DCP 低剂量组 10 51．69 ± 5．33② 68．27 ± 5．64② 0．57 ± 0．04②
表 2 各组对肝损伤小鼠 TNF－α、 IL－6、 NO 水平的影响 （x ± s）
Table 2 Effect of DCP on the levels of TNF－α， IL－6 and NO in mice with liver injury
①P＜0．01， 与正常对照组比较； ②P＜0．05， ③P＜0．01， 与模型组比较
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷
关系。 表明狗肝菜多糖具有保肝护肝的作用。
2． 2 各组对肝损伤小鼠 TNF－α、 IL－6、 NO 水平
的影响 表 2结果显示： 模型组肝损伤小鼠肝组织
中 TNF－α、 IL－6、 NO水平显著增加， 与正常组比
较差异均有统计学意义 （P＜0．01）。 各给药组小鼠
肝组织中 TNF－α、 IL－6、 NO的水平显著减少， 与
模型组比较差异均有统计学意义 （P＜0．05 或 P＜
0．01）， 即受试药物组中肝损伤小鼠炎症细胞因子
和毒性介质的表达有效地减少， 表明狗肝菜多糖可
通过抑制肝内的炎症反应和细胞毒性作用来介导保
954
第 6 期 高雅， 等． 狗肝菜多糖对抗结核药物致肝损伤的研究
肝作用。
2． 3 肝组织病理变化 图 1 （见彩图页第 1032
页） 结果显示： 正常对照组小鼠肝细胞均匀排列，
胞浆丰富， 肝小叶结构完整， 肝索及肝窦清晰可
辨， 汇管区未出现炎性浸润。 模型组肝组织损伤严
重， 镜下见肝小叶结构被破坏， 肝细胞数量减少，
小叶内肝细胞出现不同程度的水肿， 部分区域出现
明显点灶状坏死和瘀血， 病变以环中央静脉分布为
主。 DCP 高剂量组和葡醛内酯组肝组织病理变化
相近， 其肝细胞坏死程度较模型组均有明显改善，
肝小叶结构基本正常， 细胞索状排列较整齐， 肝内
淤血及细胞肿胀明显减轻， 点灶状坏死偶见， 肝细
胞数量也得到逐渐增加； DCP 中剂量组较高剂量
组出现肝细胞减少和轻微程度的水肿现象。 DCP
低剂量组肝组织损伤明显， 肝小叶结构不完整， 肝
细胞数量减少， 出现不同程度的水肿、 坏死和淤
血， 但较模型组有所改善。 肝脏病理学检查结果提
示狗肝菜多糖能够有效改善药物性肝损伤小鼠的肝
组织病变。
3 讨论
抗结核化疗在结核病控制中起到了至关重要的
作用， 但抗结核药物诱导的药物性肝损害却限制了
它们的应用。 抗结核药物诱导肝损害的发生率在我
国约为 12％， 如果在肝功能受损的情况下， 继续
抗结核治疗而保肝措施不当的话， 将加重患者的病
情和痛苦， 若此时停止抗结核药物的服用， 则结核
病将迁延不愈， 反复发作蔓延而致耐药菌株的出
现， 这些都为以后的治疗增加了困难［6］。 异烟肼、 利
福平为目前预防和治疗结核病的临床一线药物， 但
由于这类抗结核药物对肝脏均有不同程度的损害，
如何减轻抗结核治疗过程中的药物性肝损伤， 使化
疗过程得以顺利进行， 是结核治疗过程中的一个关
键问题， 也是临床医生在工作中遇到的实际问题。
AST 和 ALT 作为肝损伤的敏感标志， 在肝细
胞出现功能性损伤、 肝细胞膜结构破坏、 通透性升
高时， 即可从细胞内逸出细胞外而进入血循环中［7］。
AKP 是一种磷酸单酯酶， 是生物体内重要的代谢
调控酶， 在蛋白 （酶） 的去磷酸化过程中起着十
分重要的作用。 肝脏受损时， 血清 AKP 会迅速升
高［8］。 TNF－α是肝损伤的关键因子， 其直接参与炎
症反应的启动和进展， 并诱导肝细胞大量凋亡， 抑
制其合成和活性， 减轻各种毒物导致的肝损伤 ［9］。
此外， TNF－α 能诱导其他包括 IL－6 等促炎因子而
形成炎症的级联放大效应， 最终导致炎症进展和肝
损伤［10］。 NO 与肝细胞损伤相关， 肝损伤后， 能增
加诱导型一氧化氮合酶 （iNOS） 的表达， 使大鼠
肝脏产生大量的 NO， 从而介导肝细胞的损伤 ［11］。
本研究中， 经受试药物治疗后， 可明显降低抗结核
药物所致的小鼠血清 AST、 ALT、 AKP 和 NO 水平
的升高， 表明狗肝菜多糖 （DCP） 对抗结核药物
所致的小鼠肝损伤有明显的保肝降酶作用； 各给药
组小鼠肝组织中 TNF－α、 IL－6、 NO 的水平显著降
低， 表明狗肝菜多糖可通过抑制肝内的炎症反应和
细胞毒性作用介导保肝作用。 本研究结果显示： 狗
肝菜多糖可减轻抗结核治疗过程中的药物性肝损
伤， 为临床医生在结核化疗过程的顺利实施提供参
考解决方案， DCP 在保肝药物开发与临床应用方
面具有广阔的前景。
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Inflamm Allergy， 2005， 4 （4）： 471．
【责任编辑： 黄玲】
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Study of Dicliptera Chinensis Polysaccharide in Counteracting Liver
Injury Induced by Antituberculosis Drugs
GAO Ya， ZHONG Mingli， ZHONG Jialiang， ZHANG Kefeng
（College of Pharmacy， Guilin Medical University， Guilin 541004 Guangxi， China）
Abstract： Objective To study the therapeutic effect and mechanism of Dicliptera chinensis polysaccharide
（DCP） on liver injury induced by antituberculosis drugs． Methods Sixty mice were randomly divided into six
groups， namely normal control group， model group， glucurolactone group （in the dosage of 200 mg·kg－1·d－1），
and high－， middle－ and low－dose DCP groups （in the dosage of 600， 400， 200 mg·kg－1·d－1， respectively）．
Except for the normal control group， the rats in the other groups were given intragastric administration of
isoniazid and rifampicin （ 100 mg ／ kg） to induce liver injury model， and were simultaneously treated with
corresponding agents， once a day． On the experiment day 30， the blood and liver tissue were sampled． The
serum levels of alanine aminotransferase （ALT） ， aspartate aminotransferase （AST） ， alkaline phosphatase
（ AKP） and microsomal nitric oxide （ NO） were detected by biochemical method． The contents of tumor
necrosis factor alpha （TNF－α） and interleukin 6 （IL－6） in liver tissue were determined by enzyme－linked
immunosorbent assay （ELISA） ， and the hepatic histopathology was observed after HE staining． Results In
DCP groups， the hepatic pathological changes of the mice were improved， the number of the inflammatory cells
was reduced， and the activities of serum ALT， AST and AKP as well as the contents of hepatic TNF－α， IL－6
and NO were reduced （P＜0．05 or P＜0．01 compared with those in the model group）． Conclusion Dicliptera
chinensis polysaccharide is effective for liver injury induced by antituberculosis drug， and the mechanism may
be associated with its anti－inflammatory action．
Key words： Dicliptera chinensis polysaccharide ／ pharmacology；
Liver injury ／ TCD therapy； Liver ／ pathology；
Disease models， animal； Mice
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷
（Continued from page 952 ）
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different time points （P＜0．05 or P＜0．01） ． And the content of IL－1β in the model control group was increased
significantly as compared with that in the blank serum group on culturing hour 48 （P＜0．01） ． The THP－1 cell
viability in various QCD－containing serum groups on culturing hour 12 and 24， and in high－ and middle－
concentration QCD－containing serum group on culturing hour 48 was decreased significantly as compared with
that of the model control group at the same time point （P＜0．05 or P＜0．01） ． The content of IL－1β in various
serum containing QCD groups was markedly decreased as compared with that in the model control group on
culturing hour 48 （P＜0．01） ． Conclusion Serum containing QCD can inhibit the viability of THP－1 cells
stimulated by monosodium urate crystals， and the possible mechanism is related with the inhibition of IL－1
release．
Key words： Qingre Chubi Decoction ／ pharmacology；
Gouty arthritis ／ TCD therapy；
THP－1 cells ／ pathology；
Seropharmacology； Cell culture； Rabbits
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广州中医药大学学报 2014 年第 6 期
（“狗肝菜多糖对抗结核药物致肝损伤的研究” 的彩图， 正文见第 955页）
a． 正常对照组 b． 模型组
c． 葡醛内酯组 d． DCP 高剂量组
e． DCP 中剂量组 f． DCP 低剂量组
图 1 各组小鼠肝组织病理形态比较 （HE 染色， ×200）
Figure 1 Hepatic pathological features in various groups （by HE staining， ×200）
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