全 文 ：本组结果显示 , nm23 的高表达与腋淋巴结转移情况和远
处转移呈显著负相关。腋淋巴结状况与复发和远处转移呈正
相关。全组术后 5 年生存率为 64.30%, nm23高表达的 23 例
5 年生存率为 78.26%, nm23 低表达组为 47.37%;有腋淋巴
结转移的 20 例 5 年生存率为 35.00%,无腋淋巴结转移 22 例
5 年生存率为 81.82%,可见 nm23 阳性与患者 5 年生存率有
正相关 ,腋淋巴结阴性与患者 5 年生存率有显著正相关性;另
外 ,在 nm23 高表达/腋淋巴结阴性的 15 例患者中 , 5 年生存
率达 86.67%(13/ 15 例), 在 nm23 低表达/腋淋巴结阳性 13
例患者中 , 5 年生存率仅为 30.77%(4/13 例)。并且在 nm23
高表达/腋淋巴结阴性的 15 例患者中 , 仅 4 例出现术后远处
转移 , 3 例出现术后复发;在 nm23 低表达/腋淋巴结阳性 13
例患者中 , 有 11 例发生远处转移 , 有 9 例发生复发 , 可见
nm23 高表达/腋淋巴结阴性与远处转移和 5 年生存率有显著
相关性;与术后复发相关性。 由图 4 、5(Kaplan-Meier 生存曲
线)可见 nm23 的表达及腋淋巴结情况与患者生存期的关系 ,
P 值均小于 0.05。
由上研究可以考虑将 nm23 基因表达作为一个独立的预
后指标应用于临床 , 以便为临床提供更多的预后信息。更有
临床价值的是将 nm23 的表达与患者淋巴结情况结合筛选 , 进
而有可能将具有高转移潜在危险的患者筛选出来 ,使之能够
得到及时的抗转移治疗或免受不必要的辅助化疗 ,更好地指
导临床工作。
参　考　文　献
1　Goldhirsch A , Glick JH , Gelber RD , et al.Meeting highlights:inter-
national consensus panel on the treatment of primary breast cancer[ J] .
J Natl Cancer Int l , 1998 , 90:1 601～ 1 608.
2　McGu rie WL.Breast cancer prognost ic factors:evaluation guidelines.
J Natl Cancer Inst , 1991 , 83(3):154～ 155.
3　Liu H , Mao HS , Fu XL , et al.Expression of nm23 in breast cancer:
correlat ion with distant metastasis and prognosis[ J] .Chin J Oncol ,
2001 , 23(3):224～ 227.
4　Steeg PS , Bevi lacque G , Kopper L , et al.Evidence for a novel gene
associated w ith low tumor metastatic potent ial[ J] .J Nat lC ancer Inst ,
1988 , 80(3):200～ 204.
5　Ji SQ , Hua YW , Zhuang J , et al.Signifi cance of COX-2 , p53 , pro-
liferating cell nuclear antigen and nm23 expressions in gast ric cancer
and its behavior[ J] .Ai Zheng , 2002 , 21(6):619～ 624.
6　Tomita M , Ayabe T , M atsuzaki Y , et al.Expression of nm23-H1
gene product in esophageal squamous cell carcinoma and its association
w ith vessel invasion and survival[ J] .BMC Cancer , 2001 , 1(1):3～
8.
7　Katakura H , Tanaka F , Oyanagi H , et al.Clinical significance of
nm23 exp ression in resected pathologic-stage I , non-small cell lung
cancer[ J] .Ann Thorac S urg , 2002 , 73(4):1 060～ 1 064.
8　Hennessy C , Henry JA , M ay FE , et al.Expression of the an-
timetastatic gene nm23 in human breast cancer:an association with
good p rognosis[ J] .J Natl C ancer Inst , 1991 , 83(4):281～ 285.
9　Royds TA.nm23 protein expression in ductal in si tu and invasive duc-
tal human breast carcinoma[ J] .J Nat l Cancer Inst , 1993 , 85:727～
730.
10　Goodall RJ , Dawkins HJ , Robbins PD , et al.Evaluation of the ex-
pression levels of nm23-H1 mRNA in p rimary breast cancer , benign
breast disease , axillary lymph nodes and normal breast ti ssue[ J] .
Pathology , 1994 , 26(4):423～ 428.
川产 九 节龙 皂甙 对 小鼠 免 疫功 能 的影 响
广西中医药研究所　(南宁 530022)　李　茂　李伟芳　覃　良　周　军　韦宝伟
　　[ 摘要] 　目的　观察川产九节龙皂甙对动物免疫功能的影响。方法　采用腹腔注射给药进行碳粒廓清试验 、巨噬细胞吞噬
试验 、E 花结形成试验和迟发超敏反应试验。结果　九节龙皂甙明显增强小鼠单核细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬能力;促进血清
溶血素的生成和玫瑰花细胞的形成。结论　九节龙皂甙能增强小鼠的免疫功能。
　　[ 关键词] 　九节龙皂甙Ⅰ ;九节龙皂甙Ⅱ;吞噬能力;溶血素;玫瑰花细胞
　　[ 中图分类号] 　R285.5
Effect of saponins from ardisia pusilla on the immunity of mice
LI Mao , LI Wei-fang , QIN Liang , et al.
Guang xi Insti tu te of Trad it iona l Chinese Medicine and Pharmaceut ical Science(Nanning 530022)
　　[ Abstract] 　Objective　To observe the in vivo immunity effects of tw o new saponins(pusilloside Ⅰ and pusilloside Ⅱ)isolated
f rom Ardisia pusilla A.DC.Methods　Determinations of clearance of carbon particles , macrophage activity , hemolysin content and rose-
like nodes fo rmation of ery thro cy tes , and delayed anaphylax is in mice w ere carried out.Results　The saponins enhanced the engulfing
activities of monocy tes and macrophage in abdomen cavity in mice;promoted the fo rmation of hemolysin and ery throcytes
nodes.Conclusion　Pusillo side Ⅰ and pusilloside Ⅱ isolated from Ardisia pusilla can enhance the immunity of mice.
　　[ Key Words] 　Ardipusilloside Ⅰ ;Ardipusilloside Ⅱ;Engulfing activity;Hemoly sin;Rose-like node of ery throcytes
1096 Guangx i Medical Journal , Aug.2004 , Vol.26 , No.8
　　川产九节龙(Ardisia pusilla A.DC)系紫金牛科紫金牛属植
物。华西医科大学在国家自然科学基金资助下 , 对该植物进
行了广泛的植物化学和药理学研究。王晓娟等从中分离到两
个黄酮和两个有机酸[ 1] ;张清华等从中分离到两个三萜皂甙
新结构 ,分别命名为九节龙皂甙 I 和Ⅱ [ 2] ;缪振春等分别对其
中新四糖[ 3]和新五糖[ 4]三萜皂甙结构进行了核磁共振研究;
王丽华[ 5]和张清华等[ 6]用薄层扫描法测定其中两个皂甙不同
季节药材中的含量 ,证明 2 月份药材含量高达 9.46%;梁克明
分别报道了这种皂甙对 Hella 细胞[ 7]和人癌细胞[ 8] 的抑制作
用;王四旺发现该皂甙对小鼠 S180肉瘤有抑制作用。我们与华
西医科大学合作 , 发现九节龙皂甙能抑制小鼠肉瘤(S180)、小
鼠艾氏腹水癌(EAC)、小鼠黑色素瘤和小鼠肝癌细胞的生长。
为了进一步探讨其抗癌作用机理 ,本文研究其免疫调节功能。
1　材料与方法
1.1　药物　九节龙皂甙Ⅰ(ardipusilloside Ⅰ , 简称 AR1)和九
节龙皂甙Ⅱ(ardipusilloside Ⅱ ,简称 AR2)由华西医科大学张清
华教授提供。使用时以灭菌生理盐水配制成所需浓度。 注射
用环磷酰胺(简称 cy), 每支 200mg ,批号 911218 , 上海第十二
制药厂产品 。地塞米松磷酸钠注射液 , 5mg/ ml , 批号 931125 ,
无锡市第七制药厂产品。
1.2　动物　C57BL/ 6 小鼠 、昆明种小鼠和 CFW 小鼠 ,体重 18
～ 22g ,分别由中国医学科学院实验动物研究所和广西中医药
研究所动物室提供。
1.3　仪器　奥林巴氏显微镜(日本产), 电热恒温培养箱(上
海医疗器械厂生产), 分光光度计(上海第三分析仪器厂产)。
1.4　试验方法
1.4.1　碳粒廓清试验　取 CFW 雄性小鼠 80 只 , 随机分为 8
组 ,每组 10 只 , 即 AR1 和 AR2 各三个剂量组(0.2mg/kg、
0.4mg/ kg 及 0.8mg/ kg), 环磷酰胺组(15mg/kg)及正常对照
组。各组小鼠均每天腹腔注射给药一次 , 连续 7 天。末次药
后 1 小时 ,每鼠尾静脉注射 10%印度墨汁 0.1ml/10g 体重 , 注
后 2分钟和 7分钟从小鼠眼眶取血 20 微升 , 放入 0.1%碳酸
钠溶液 1ml试管中摇匀 , 用分光光度计于 680nm 波长处测定
吸收度 ,并计算廓清指数(K)。同时分离小鼠胸腺和脾脏 , 分
别称重 ,计算胸腺指数和脾指数(即每 kg 体重相当于相应脏
器重量)。
1.4.2　巨噬细胞吞噬试验(半体内法)　取昆明种雄性小鼠
80 只 , 分组和给药方案同“1.4.1” 。末次药后 30 分钟 , 每鼠腹
腔注射 2%鸡红细胞混悬液 1ml ,间隔 30 分钟处死小鼠 , 腹膜
下注入 2ml生理盐水冲洗腹腔 , 收集腹腔洗液分滴于载玻片
上 ,移置 37℃温箱培养 30 分钟 , 按常规方法制片 、染色 、镜检 ,
在油镜下计数 200 个巨噬细胞 ,计算吞噬百分率和吞噬指数。
1.4.3　溶血素测定试验　取 CFW 雄性小鼠 80 只 ,分组和给
药方案同“1.4.1” 。药后第 3 天每鼠腹腔注射绵羊红细胞混
悬液(SRBC 2×108/ ml), 免疫后继续给药。药后第 8 天各鼠
从眼眶取血 ,测定血清溶血素。
1.4.4　E 花结形成试验　选用 C57BL/6 雄性小鼠 80 只 , 分
组和给药方案同“ 1.4.1” 。药后第 3 天腹腔注射 S RBC(2×
108/ ml)免疫 , 每只 0.5ml , 免疫后第 5 天放血处死小鼠 , 分离
脾脏放入 pH 7.6 Hank s液中 , 计数红细胞玫瑰花形成细胞数
目(ERFC)。
1.4.5　迟发超敏反应试验　选用昆明种雄性小鼠 80 只 , 分
组和给药方案同“ 1.4.1” 。 药后第 3 天用 10% SRBC 于各鼠
右足跖皮下注射 50 微升进行免疫 , 第 8 天用 5% SRBC 攻击
小鼠左足跖 ,攻击前和攻击后 4 小时 、24 小时 , 用千分之一游
标卡尺测量足跖厚度 , 足跖厚度差作为迟发超敏反应指标。
1.5　数据处理　各组数据以 x ±s表示 , 数据统计用 t 检验。
2　结　果
2.1　对小鼠碳粒廓清指数的影响　结果 AR1 低 、中剂量组和
AR2 中剂量组小鼠的廓清指数(K)比对照组高 ,统计分析差异
有显著性意义;AR1和 AR2 给药组对胸腺指数和脾指数无明
显影响(见表 1)。表明九节龙皂甙能增强小鼠的非特异性免
疫功能。
表 1　AR1 和 AR2 对小鼠碳粒廓清指数(K)的影响( x ± s)
组别 剂量(mg.kg-1) 动物数(只) K 胸腺指数(mg.g -1) 脾指数(mg.g-1)
对照组 10 0.041±0.008 3.55±0.79 5.29±1.01
AR1 0.2 10 0.056±0.014＊ 4.19±1.26 5.39±1.20
AR1 0.4 10 0.062±0.013＊＊ 4.09±0.47 6.37±2.49
AR1 0.8 10 0.049±0.014 3.24±0.78 5.28±1.11
AR2 0.2 10 0.040±0.013 3.00±0.56 5.13±0.55
AR2 0.4 10 0.055±0.016＊ 3.03±0.52 5.19±1.08
AR2 0.8 10 0.040±0.022 3.03±0.64 4.71±0.61
环磷酰胺 15.0 10 0.029±0.015＊ 2.48±0.68＊＊ 4.47±0.77
　　　　　　　　　注:与对照组比较 , ＊P <0.05, ＊＊ P <0.01
1097广西医学　2004 年 8月　第 26 卷　第 8 期
2.2　对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响　AR1 高剂量组
和AR2 中 、高剂量组小鼠吞噬百分率和吞噬指数比对照组高 ,
统计分析差异有显著性意义(见表 2)。表明九节龙皂甙能提
高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
表 2　AR1 和 AR2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响( x ±
s)
组别 剂量(mg.kg -1) 动物数(只) 吞噬率(%) 吞噬指数
对照组 10 22.1±5.3 25.5±8.6
AR 1 0.2 10 24.1±13.9 26.1±16.3
AR 1 0.4 10 28.0±11.8 29.2±12.5
AR 1 0.8 10 53.4±11.3＊＊ 54.2±26.4＊＊
AR 2 0.2 10 25.6±5.1 28.2±7.8
AR 2 0.4 10 31.4±11.3 46.5±11.5＊＊
AR 2 0.8 10 34.5±9.3＊＊ 40.0±10.3＊＊
Cy 15.0 10 16.7±5.9＊ 16.8±9.2＊
　　注:与对照组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊P <0.01
2.3　对小鼠血清溶血素(HC50)的影响　AR1 和 AR2 中剂量
组小鼠半数溶血值比对照组高 ,统计分析差异有显著性意义
(见表 3)。表明九节龙皂甙能促进小鼠血清溶血素的生成。
表 3　AR1和 AR2 对小鼠细胞免疫功能的影响( x ± s)
组别 剂量(mg.kg -1)
动物数(只) HC50 ERFC(个/ 106 脾细胞)
对照组 10 350.0±58.1 10 000±4 781
AR1 0.2 10 371.6±40.1 6 750±3 991
AR1 0.4 10 410.6±38.2＊ 9 000±5 345
AR1 0.8 10 306.8±56.9 22 000±9 798＊＊
AR2 0.2 10 368.2±64.1 10 857±4 298
AR2 0.4 10 414.8±47.8 6 667±2 637
AR2 0.8 10 387.4±49.3 28 750±8 746＊＊
Cy 15.0 10 148.5±108.6＊＊ 9 625±2 560
　　注:与对照组比较 , ＊ P <0.05 , ＊＊P <0.01
2.4　对 E花结形成试验(ERFC)的影响　AR1 和 AR2 高剂量
组小鼠 ERFC 数目增多 , 与对照组比较 , 差异有显著性意义
(表 3)。表明九节龙皂甙能增强 T 淋巴细胞功能。
2.5　对小鼠迟发超敏反应(DTH)的影响　AR1 和 AR2 低剂
量组小鼠在攻击后 4 小时足跖厚度明显高于对照组(见表 4)。
表明九节龙皂甙能增强 DTH 反应 , 增强 T 淋巴细胞功能。
表 4　AR1和 AR2对小鼠 DTH 反应的影响( x ±s)
组别 剂量(mg.kg-1)
动物数(只) 攻击前足厚度
攻击后不同时间足厚度差(mm)
4h 24h
对照组 10 2.16±0.14 1.06±0.36 0.41±0.19
AR1 0.2 10 2.07±0.09 1.48±0.28＊＊ 0.35±0.21
AR1 0.4 10 2.06±0.07 0.91±0.15 0.29±0.14
AR1 0.8 10 2.10±0.15 1.03±0.18 0.39±0.14
AR2 0.2 10 1.97±0.09 1.48±0.28＊＊ 0.32±0.20
AR2 0.4 10 1.98±0.09 1.09±0.33 0.47±0.18
AR2 0.8 10 1.98±0.08 0.99±0.41 0.45±0.16
地塞米松 2.5 10 2.00±0.17 0.46±0.26＊ 0.11±0.06＊＊
　　　　　　　　注:与对照组比较 , ＊P <0.05 , ＊＊ P <0.01
3　讨　论
机体的免疫功能是通过激活免疫细胞来实现 ,单核细胞 、
B 淋巴细胞和 T 淋巴细胞是参与机体免疫反应的主要细胞 ,
它们在免疫应答中参与吞噬病原体 、清除异物 、产生抗体 、释
放活性因子等环节起着重要作用。本研究发现 , 从九节龙中
新分离出二种三萜化合物 AR1 和 AR2 , 能明显增强小鼠巨噬
细胞的吞噬活力 ,使单位时间内血液中碳粒清除速率加快 , 吞
噬鸡红细胞的个数和吞噬百分率增加 , 可诱导循环抗体的产
生 ,促进小鼠血清溶血素的生成 , 脾脏细胞中 ERFC 数目增
加 ,有较强的 DTH 反应性 , 表明九节龙皂甙能提高小鼠特异
性和非特异性免疫功能。其抗癌作用机制可能与提高小鼠免
疫功能有关。
参　考　文　献
1　王晓娟.毛茎紫金牛(九节龙)化学成分的研究[ J] .中国中药杂
志 , 1990 , 15(1):38～ 39.
2　张清华 ,王晓娟 ,缪振春 ,等.川产九节龙皂甙的化学研究[ J] .药
学学报 , 1993 , 28(9):673～ 678.
3　缪振春 ,张清华.四川九节龙中新四糖三萜皂苷结构和核磁共振
研究[ J] .有机化学 , 2000 , 20(3):361～ 362.
4　缪振春 ,冯　锐.四川九节龙中新五糖三萜皂苷结构的 NM R研究
[ J] .波谱学杂志 , 1999 , 16(5):395～ 401.
5　王丽华 ,张清华.薄层扫描法测定川产九节龙中皂甙的含量[ J] .
中国药学杂志 , 1996 , 31(11):676～ 678.
6　张清华 ,王雁翔.川产九节龙不同生长期的总皂甙含量测定[ J] .
华西药学杂志 , 1996 , 11(3):134～ 136.
7　梁克明 ,谢艳华.九节龙皂甙对 Hela 细胞生长的抑制作用[ J] .第
三军医大学学报 , 2002 , 24(6):725～ 728.
8　梁克明 ,王四旺.九节龙皂甙对 8株人癌细胞的抑制作用[ J] .第
四军医大学学报 , 2001 , 22(7):671～ 672.
1098 Guangx i Medical Journal , Aug.2004 , Vol.26 , No.8