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灯台树不同部位主要药用组分的研究



全 文 :灯台树不同部位主要药用组分的研究
代春初 , 刘晓雯 , 宋良科* (西南交通大学生命科学与工程学院 ,四川成都 610031)
摘要 [目的]确定灯台树不同部位中的主要药用组分 ,以充分利用其资源。[ 方法] 化学定性法确定灯台树与止血、消肿功效相关的组
分;定量法确定主要药用组分的含量 ,拟建立HPLC分析方法。[ 结果]在Symmetry Sheild TM RP18色谱柱4.6mm×250.0mm, 5μm);乙腈-
水-磷酸(80∶20∶0.1, V/ V/ V)为流动相;检测波长为 206 nm;流速为 1.0 ml/min;柱温为 30 ℃条件下 ,熊果酸在 0.42~ 2.94 mg范围内呈
良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为 96.96%, RSD 为 1.52%。[ 结论] 灯台树叶、茎皮含有丰富的熊果酸 ,可以作为熊果酸提取
物的可持续利用资源之一。
关键词 灯台树;药用组分;TLC法;HPLC法
中图分类号 S567.1+9  文献标识码 A  文章编号 0517-6611(2009)12-05490-02
Research on Major Medical Component in Different Parts of Bothrocaryum controversum
DAI Chun-chu et al (Life Science and Engineering College of South-west Jiaotong University , Chengdu , Sichuan 610031)
Abstract [ Objective] The study aims to determine the major medical components in different parts of Bothrocaryum controversum(Hemsl.)Pojark , and
make full use of its resources.[Method] The components of hemostasis and detumescence in Bothrocaryum controversum(Hemsl.)Pojark are determined
by qualitative analysis and the contents of the major medical components are determined by quantitative analysis by HPLC.[ Results] HPLC analysis is car-
ried out using Symmetry SheildTM RP18 column(4.6 mm×250.0 mm , 5μm)and acetonitrile-water-phosphoric acid(80∶20∶0.1 , V/ V/ V)as themobile
phase, the detection wavelength is 206 nm , the flow rate is 1.0 ml/min, and the column temperature is 30 ℃.The linear range is 0.42-2.94 mg(r=
0.999 8), the average recovery of the method is 96.96%(RSD=1.52%).[ Conclusion] The leaves and stem skins of Bothrocaryum controversum(Hem-
sl.)Pojark contain abundant ursolic acid which can be used as the resource for sustainable utilization.
Key words Bothrocaryum controversum(Hemsl.)Pojark;Medical component;TLC;HPLC
基金项目 国家科技部自然保护区生物标本整理 、整合共享试点———
民族医药标本整理 、整合项目(2005DKA21404)。
作者简介 代春初(1985-),男 , 湖北随州人 ,硕士研究生 ,研究方向:
药用植物资源与活性成分。 *通讯作者 , 副教授 , E-mail:
songlk591@126.com。
收稿日期 2009-02-01
  灯台树[ Bothrocaryum controversum(Hemsl.)Pojark]为山茱
萸科山茱萸属植物 ,其果实具有清热利湿 、止血 、驱虫的作
用[ 1] ;在云南民间佤族人用来做止血 、消肿药。灯台树广泛
分布于我国南北各省(区),由于其树形美观 ,部分省区已作
为园林植物加以引种栽培[ 2-3] 。但灯台树现代药用方面的
研究还处于空白 ,因此在民族医药标本整理 、整合调查中发
现灯台树在四川盆周山区野生资源十分丰富 ,已成为次生林
中常见的树种。笔者对灯台树进行不同部位的化学组分定
性实验和有效药用单体的定量分析 ,确定其药用价值 。拟为
山区农户引种选育和充分利用现有资源提供参考 ,也为灯台
树的现代药效学研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药材样品。2007年 8月在峨眉山市黄湾乡采收灯台
树叶 、茎皮 、果实各 0.5 kg。晾干或烘干(温度不超过 50 ℃),
切碎或捣碎 ,用小型粉碎机粉碎 ,过筛备用。
1.1.2 药剂与仪器。药剂:熊果酸(批号:110742-200415中国
药品生物制品检定所提供);乙腈(色谱纯),乙醚 ,石油醚(分
析纯),水为超纯水。仪器:高效液相色谱仪(Waters 2487紫
外检测器 ,Waters 515 HPLC 泵;Epower2色谱工作站)。电子
天平(型号:BS224S , d=0.000 1 g ,北京赛多利斯仪器系统有
限公司);粉碎机(型号:DJZ ,上海淀久中药机械制造有限公
司);超声波提取器(型号:SK8200LH ,上海科导超声仪器有限
公司);超纯水机(型号:AKUP-IV-10 ,振大水处理器材有限公
司)等。
1.2 方法
1.2.1 TLC定性鉴别。分别取样品粗粉各 2 g ,精密称定 ,置
索氏提取器内加乙醚适量 ,加热回流提取 4 h ,提取液回收乙
醚至干。残渣用石油醚(60~ 90 ℃)浸提 2次 ,每次 15 ml(约
2 min),倾去石油醚 ,残渣加适量甲醇微热使溶解 ,作供试品
溶液 。用毛细管吸取等量的供试品和熊果酸对照品溶液分
别点于同一硅胶G薄层板上 ,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶
4∶0.5 , V/V/V)为展开剂展开 ,取出晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇
溶液 ,在 105 ℃加热数分钟 ,置紫外光灯(365 nm)下检视。
1.2.2 HPLC定量分析 。
(1)色谱条件的确定。色谱柱:SymmetrySheildTM RP18 色
谱柱(4.6 mm×250.0 mm ,5 μm);流动相:乙腈∶水∶磷酸(80∶
20∶0.1 , V/V/V),检测波长:206 nm ,流速:1.0 ml/ min;柱温:
30 ℃;理论板数按熊果酸峰计算应不低于 5 000。
(2)对照品溶液的制备。精密称取熊果酸对照品 2.1
mg ,置 10 ml容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,定容 ,即得(每 1
ml含熊果酸 210 μg)。
(3)供试品溶液的制备。分别取样品粗粉各 2 g ,精密称
定 ,置索氏提取器内加乙醚适量 ,加热回流提取 4 h ,提取液
回收乙醚至干 。残渣用石油醚(30 ~ 60 ℃)浸提 2次 ,每次 15
ml(约 2 min),倾去石油醚 ,残渣加适量甲醇微热使溶解 ,定量
转移至 10 ml容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,定容 ,得供试品
溶液 ,备用 。
(4)线性关系考察。精密吸取熊果酸对照品溶液(210
μg/ml)2 、4、6 、8、10、12、14μl注入液相色谱仪 ,测定峰面积。
(5)精密度实验。精密吸取熊果酸对照品溶液(210
μg/ml)10 μl ,重复进样 6次 ,测定峰面积。
(6)稳定性实验。取同一样品溶液 ,于 0、2 、4、6、8 h进样
各 10μl ,测定峰面积。
(7)重现性实验。取同一批样品 ,按供试品溶液制备方
法平行制备供试品溶液 6份 ,每份样品进样 10 μl ,按前法重
复测定。
(8)加样回收率实验 。精密吸取已知熊果酸含量的灯台
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2009 , 37(12):5490-5491                  责任编辑 孙红忠 责任校对 况玲玲
树果实 6份 ,每份 0.05 g ,分别加入熊果酸对照品溶液 ,按样
品测定方法测定 。按公式:回收率=(测出总量-熊果酸含
量)/熊果酸加入量×100%计算回收率。
(9)样品含量测定 。精密吸取对照品溶液与供试品溶液
各 10μl ,分别注入液相色谱仪中 ,依上述色谱条件测定峰面
积 ,按外标法计算含量。
2 结果与分析
2.1 TLC定性鉴别结果 灯台树果实 4个斑点 ,叶 10个斑
点 ,茎皮 11个斑点 ,在与熊果酸对照品相同的位置处 ,三者
均显示与熊果酸颜色一致的不同大小斑点 ,说明均不同程度
含有熊果酸 。
2.2 线性关系考察结果 峰面积测定结果依次为:255 645、
523 790、808 307、105 446、1 366 734、1 616 744 、1 894 117 。以对
照品进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,得熊果酸的标准曲
线方程:Y =651 597X -20 852 , r =0.999 8。表明熊果酸在
0.42~ 2.94mg范围内线性关系良好。
2.3 精密度实验结果 峰面积测定结果依次为:654 416 、
655 281 、673 760、686 172、676 323、668 118 ,平均值为 669 01 。
RSD为 1.80%。精密度良好。
2.4 稳定性实验结果 峰面积测定结果依次为:1 212 195 、
2 236 492、1 257 436、1 260 083、1 263 649 ,平均值为 1 245 971 ,
RSD为 1.74%。样品在 8 h内稳定。
2.5 重现性实验结果  峰面积测定依次为:1 094 814 、
1 118 145、1 120 351、1 139 066 、1 140 984、1 137 361 ,平均值为
1 125 120。RSD为 1.58%。重现性良好。
2.6 加样回收率实验结果 测定结果见表 1 ,回收率符合要求。
表1 熊果酸加样回收率实验结果
Table 1 The recovery results of ursolic acid
样品重量∥g
Sample weight
含熊果酸量∥mg
Content of ursolic acid
加入量∥mg
Addition amount
测出总量∥mg
Total amount
回收率∥%
Recovery
平均回收率∥%
Average recovery
RSD
%
0.109 0.248 0.210 0.447 95.19 96.96 1.52
0.118 0.268 0.210 0.469 95.62
0.106 0.241 0.210 0.446 97.95
0.111 0.252 0.210 0.456 96.90
0.114 0.259 0.210 0.466 98.80
0.112 0.254 0.210 0.453 95.24
2.7 样品含量测定结果 灯台树茎皮 、叶和果实的熊果酸
含量分别为 1.768%、1.710%和 0.227%。
3 结论与讨论
(1)灯台树不同部位经化学定性实验分析均含有三萜类
皂苷 、鞣质等。TLC定性分析表明 ,在同一条件下 ,叶 、茎皮
所含化学组分比果实更丰富 ,且与熊果酸相关的组分多而明
显 ,有进一步研究的价值。
(2)佤族人用灯台树做止血 、消肿药物与其含有丰富的
熊果酸有直接关系;止血功效与含有鞣质相关。
(3)灯台树不同部位含熊果酸为:茎皮(1.768%)>叶
(1.710%)>果实(0.227%);茎皮与叶均可作为熊果酸提取
物的资源加以利用 ,尤其是大面积栽培和作为园林植物修剪
枝(茎皮)、叶时应考虑综合利用。
(4)灯台树果实富含油脂[ 4] ,经实验测定 ,其挥发油含量
少 ,其他脂类组分有待于进一步研究。
参考文献
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版社 ,1991:1100.
(上接第 5489页)
有重要的药用价值[ 14] 。笔者通过HPLC检测不同产地红花
中羟基红花黄色素A的含量 , 161团和红旗农场生产的红花
中羟基红花黄色素A含量都高出我国 2005年版《药典》所规
定的标准(1%),研究表明 ,两地红花药材质量均符合《药典》
标准。总之 ,要实现我国中药材红花的国际化 ,必须要严格
控制红花中的重金属含量 ,不断提高药材微量元素含量以及
羟基红花黄色素A含量 ,这样才会有利于新疆红花的 GAP
基地建设和产业化发展 ,才能不断提高我国中药材的质量和
在国际市场的竞争力 。
参考文献
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549137卷 12期                代春初等 灯台树不同部位主要药用组分的研究