全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2012 年
第 51卷第 4 期
2012年 2月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 51 No.4
Feb．，2012
收稿日期：2011－11－28
基金项目：海南省社会发展专项（2010SF007）；海口市重点科技计划项目（2010－086）
作者简介：卢圣楼（1987－），男，南京人，在读硕士研究生，研究方向为精细有机合成与天然产物分离，（电话）18789289513（电子信箱）
lushengluo＠163．com；通讯作者，刘 红，教授，博士，从事天热产物分离技术研究，（电话）0898－65883398（电子信箱）lhyd123＠sohu．com。
神秘果（Synsepalum dulcificum Daniell）为山榄
科神秘属常绿灌木植物，其果实中含有的神秘果素
（Miraculin）是一种变味蛋白，果肉在嘴中咀嚼后，再
食酸味食物时其味道会转甜 ［1］。 20 世纪 60 年代引
入我国，在海南、云南、广西等热带、亚热带地区小
面积种植。 神秘果可用作食品、医药及化妆品等领
域的增甜剂、助食剂和食用色素等 ［2－7］。随着对神秘
果研究的不断深入，其营养保健作用也日益受到关
注。
近年来， 微波辅助提取法 （Microwave assisted
extraction，MAE） 与超声波提取法 （Ultrasonic ex-
traction，UE）因具有提取效率高、操作简单方便、无
污染、节约能源等优点，在天然产物提取方面得到
了广泛应用［8－12］。 本试验分别采用微波辅助提取法、
超声波提取法从神秘果种子中提取齐墩果酸，根据
齐墩果酸的提取率确定最佳提取方法 ， 并采用
HPLC 法测定齐墩果酸的含量， 旨在为今后神秘果
的开发利用提供相关方法。
1 材料与方法
1．1 材料
神秘果采集于海南省尖峰岭国家森林保护区，
经海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师
鉴定， 神秘果种子经电热恒温鼓风干燥箱烘干后，
粉碎至 60 目备用。
羰基铁粉（Carbonyl iron powder，CIP）购于陕西
兴化化学股份有限公司；齐墩果酸标准品购于四川
维克奇生物科技有限公司；正己烷、无水乙醇、三氯
甲烷和 95％乙醇（V ／ V）等均为分析纯，甲醇为色谱
纯。
1．2 仪器
WR－C微波样品处理系统 （北京盈安科技有限
微波辅助提取－HPLC法测定神秘果种子中齐墩果酸
卢圣楼 1，刘 红 1，江 虹 1，黄巨波 1，王 杰 1，胡成豪 2
（1．海南师范大学化学与化工学院，海口 571158；2．海南南派实业有限公司，海口 571100）
摘要： 通过微波辅助提取法与超声提取法的比较研究与优化， 确定提取神秘果 （Synsepalum dulcificum
Daniell）种子中齐墩果酸的最佳工艺条件，采用 HPLC 法测定神秘果种子中齐墩果酸的含量。结果表明微
波辅助提取法具有操作简单、提取时间短和提取率高等优点。
关键词：神秘果（Synsepalum dulcificum Daniell）；微波辅助提取法；超声提取；高效液相色谱；齐墩果酸
中图分类号：S667；O657．7 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2012）04－0816-04
Determination of Oieanolic Acid in the Seed of Synsepalum dulcificum by Microwave
Assistant Extraction－High Performance Liquid Chromatography
LU Sheng－lou1，LIU Hong1，JIANG Hong1，HUANG Ju－bo1，WANG Jie1，HU Cheng－hao2
（1． College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University， Haikou 571158， China；
2． Hainan South Industrial Co．， LTD．， Haikou 571100， China）
Abstract： The optimized extraction method of oieanolic acid in the seed of Synsepalum dulcificum Daniell was established by
comparison of microwave assisted extraction and ultrasonic extraction， and then detected by HPLC． The results indicated that
microwave assisted extraction was advantage in the yield， timesaving and efficiency．
Key words： Synsepalum dulcificum Daniell； microwave assisted extraction； HPLC； ultrasonic extraction； oleanolic acid
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2012.04.051
第 4 期
图 1 UE 提取齐墩果酸的 HPLC 谱图
图 2 MAE 提取齐墩果酸的 HPLC 谱图
125
100
75
50
25
0
响
应
值
//m
V
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
时间//min
公司），RE－52 型旋转蒸发器 （上海亚荣生化仪器
厂），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），高
效液相色谱仪 （日本岛津公司），DHG－9246A 型电
热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），
TCL－16G 型电动离心机 （上海安亭科学仪器厂），
UV－2450型紫外分光光度计（日本岛津公司）。
1．3 提取方法
1．3．1 超声提取法 精确称取神秘果种子粉 5．0 g
于锥形瓶中，加入 50．0 mL 正己烷溶解，并置于超声
波仪中提取 4 h，蒸馏回收正己烷，所得浸膏状物质
先后用水和氯仿洗涤，合并洗涤液，弃水层，氯仿层
再用水洗涤 6 次，弃水层，挥发氯仿，残余物用甲醇
溶解，并定容至 10 mL，待用。
1．3．2 微波辅助提取法 精确称取神秘果种子粉
2．0 g于烧杯中， 用 1 g CIP与之充分混合后转入微
波提取罐内，并添加 15 mL 正己烷，盖上压力盖、密
封、放入微波样品处理系统中升温，于 120 ℃下保持
12 min 后，将提取液全部转移并用少量正己烷清洗
内罐，合并清洗液和提取液，4 000 r ／ min 离心 5 min
后，挥干上层清液，用甲醇溶解残余物，定容至 10
mL，待用。
1．4 色谱条件
色谱柱为 ODS Hyper2SIL C18 （4．0 mm × 200
mm × 5 μm），流动相（甲醇∶水＝90∶10，V/V），检测波
长为 215 nm，柱温为 25 ℃，流速为 1．0 mL ／ min。
1．5 齐墩果酸标准溶液的配置
精确称取齐墩果酸标准品 3．00 mg， 定容至 10
mL，并逐级稀释得标准系列溶液。 按照上述色谱条
件，进样 20 μL，以峰面积定量。 以齐墩果酸标准品
浓度（mg ／ mL）为横坐标，峰面积（mV*s）为纵坐标绘
制工作曲线， 得回归方程 y＝1 771．67x＋12 809 600，
相关系数 0．999 8，SD＝186．560 4，P＜0．000 1。 结果表
明齐墩果酸在 0．01～0．05 mg ／ mL 范围内与峰面积呈
良好的线性关系。
2 结果与分析
2．1 微波辅助提取法与超声提取法的比较
采用微波辅助提取法与超声提取法对神秘果
种子中齐墩果酸的提取效果进行比较， 其 HPLC 谱
图见图 1、图 2。 由峰面积计算不同方法提取的齐墩
果酸含量，结果如表 1所示。
从图 1、图 2 及表 1 可以看出，微波辅助提取神
秘果种子中齐墩果酸的效果较好，故后续研究主要
表 1 不同提取方法测定齐墩果酸的含量
提取方法
超声提取法
微波辅助提取法
峰面积//mV·s
79 269.7
1 231 142.6
保留时间//min
5.92
5.97
齐墩果酸的含量//%
1.21
1.90
125
100
75
50
25
0
响
应
值
//m
V
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0
时间//min
齐
墩
果
酸
齐
墩
果
酸
卢圣楼等：微波辅助提取－HPLC 法测定神秘果种子中齐墩果酸 817
湖 北 农 业 科 学 2012 年
分析了微波辅助提取神秘果种子中齐墩果酸的提
取条件。
2．2 微波辅助提取法单因素试验
2．2．1 提取溶剂对提取率的影响 分别以正己烷、
95％乙醇（V ／ V）及两者的混合溶液（1∶1，V ／ V）为提
取剂进行微波辅助提取实验，研究不同溶剂对神秘
果种子中齐墩果酸提取率的影响。
采用上述色谱条件测得提取不同溶剂获得的
齐墩果酸含量，结果见表 2。 由表 2 可知，正己烷的
提取率最高，其次是二者的混合溶液，乙醇的提取
效率最低。 这表明齐墩果酸在非极性溶剂中有较好
的溶解性，故本研究选择正己烷作为提取溶剂。
2．2．2 提取时间对提取率的影响 精确称取 2 g 神
秘果种子粉，加入 20 mL 正己烷，按 8、10、12、14、16
min 等 5 个时间梯度进行微波辅助提取实验， 考察
不同提取时间对齐墩果酸提取效率的影响。
结果表明，提取时间短，则提取率低，随着提取
时间的延长，提取率逐渐增加，但到 12 min 后，增加
趋于平缓。 另一方面，提取时间的延长也会造成杂
质的干扰，所以最终确定 12 min为最佳提取时间。
2．2．3 提取温度对提取率的影响 精确称取 2 g神
秘果种子粉，加入 20 mL 正己烷，分别采用 5 个不
同提取温度（100、110、120、130、140 ℃）进行微波辅
助提取试验，结果见图 3。 从图 3 可知，提取率随温
度升高而增大，至 120 ℃达到最大值，其后提取率缓
慢降低。 这可能是随着温度的升高，分子热运动加
快，浸出速度也随之加快，但过高温度可能会破坏
齐墩果酸结构， 也可能是温度过高引起乙醇的挥
发， 造成溶剂损失。 根据本试验结果， 最终选择
120℃为最佳提取温度。
2．3 精密度试验
按 1．3．2 方法前处理，连续进样 5 次，每次进样
20 μL，记录峰面积。 结果如表 3所示。 由表可知，其
RSD＝0．626 3％，表明本方法的精密度较好。
2．4 重现性试验
取同批次样品 5 份，按 1．3．2 方法进行前处理，
和色谱分析， 结果如表 4 所示。 由表 4 可知，其
RSD＝0．626 5％，表明本法重现性较好。
2．5 HPLC分析
采用 HPLC测定不同溶剂提取神秘果种子中的
齐墩果酸，利用外标法进行定量，保留时间进行定
性，其色谱图见图 4～7。
3 小结与讨论
通过对神秘果种子中齐墩果酸的提取方法、提
取溶剂、提取时间、提取温度等方面的考察，确定了
微波辅助提取的最佳条件为： 以正己烷为溶剂，液
料比 1∶10，在 120 ℃下，经过 12 min提取。 本试验结
果表明，采用该方法的提取率高，提取时间短，为今
后神秘果的工业化开发及深入研究提供了技术参
考。
参考文献：
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［2］ 李思义．蔬菜生理功能与功能性成分［J］．中国蔬菜，2000（5）：54－
55．图 3 提取温度对齐墩果酸提取率的影响
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
提
取
率
//%
80 90 100 110 120 130 140
提取温度//℃
表 2 不同溶剂提取神秘果中齐墩果酸的含量
提取液
正己烷
正己烷与 95%乙醇
（V/V）混合液
95%乙醇（V/V）
峰面积
mV·s
11 470 284.3
9 506 005.3
7 339 886.0
保留时间
min
5.97
5.98
6.06
齐墩果酸的含量
%
1.79
1.48
1.15
表 3 精密度试验的结果
测定次数
1
2
3
4
5
RSD//％
峰面积//mV·s
7 309 886
7 228 996
7 300 943
7 214 935
7 302 313
0．626 3
表 4 重现性试验的结果
测定次数
1
2
3
4
5
RSD//％
含量//mg/g
0．114 103
0．112 840
0．113 964
0．112 621
0．113 985
0．626 5
818
第 4 期
（下转第 830页）
375
300
225
150
75
0
响
应
值
//m
V
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0
时间//min
图 4 齐墩果酸标准样的 HPLC 图谱
齐
墩
果
酸
500
400
300
200
100
响
应
值
//m
V
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0
时间//min
图 5 正己烷提取样品的 HPLC 图谱
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0
时间//min
图 6 混合溶剂提取样品的 HPLC 图谱
1000
750
500
250
响
应
值
//m
V
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0
时间//min
图 7 乙醇提取样品的 HPLC 图谱
1000
750
500
250
响
应
值
//m
V
齐
墩
果
酸
齐
墩
果
酸
齐
墩
果
酸
卢圣楼等：微波辅助提取－HPLC 法测定神秘果种子中齐墩果酸 819
湖 北 农 业 科 学 2012 年
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（上接第 819页）
（责任编辑 周有祥）
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（责任编辑 田宇曦）
植物愈伤组织诱导产生受多种因素的影响，其
中外植体类型、激素种类与浓度配比是其主要影响
因素。 如果生长素与细胞分裂素的比例适中，对保
持愈伤组织的快速生长是非常有必要的［9］。试验中，
6－BA 对嫩茎段或幼果愈伤组织诱导均有最大影
响，是必不可少的激素。 不添加 6－BA，则未能产生
愈伤组织。 另外，愈伤组织诱导需要 6－BA 和 NAA
同时使用，这与宋英今等 ［10］阐述的使用安祖花嫩茎
诱导时，只有 6－BA 和 NAA 的配合使用才有利于愈
伤组织诱导的报道相一致。
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830