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万方数据
1期 林少君，等：浮游植物中叶绿素a提取方法的比较与改进
壁相对来说较为坚硬。细胞壁结构的差异造成反复冻
融过程中各门藻细胞的破壁率不同，不同藻细胞内叶
绿素a含量也不同，因此对同一水体来说叶绿素a的
提取效率受过滤水量的影响。从图l和图2均可以看
到湖水水样过滤50IIlL和100mL所测结果明显高于
过滤500mL和l000mL所测得的值，但平行间的标
准偏差相对来说也较大。在663nm处的吸光值太低
容易造成偏差，太高则会降低浸提的提取效率。根据
本实验的结果，将663nm处的吸光值控制在0．02～
O．10范围内较好。对寡营养水体、中营养水体和富营养
水体，建议较适合的过滤水量分别为500mL～1000Ⅱ1L、
200mL～500mL和50mL～100札。纯藻液由于细
胞间差异小，且破壁率与细胞密度没有明显关系【10，11J，
过滤水量在本实验范围内对结果影响不明显。
研磨法对藻类细胞壁的破坏程度较高，受种类组成
差异的影响小，其结果主要由研磨和转移过程造成叶绿
素a的损耗来决定，与过滤水量的大小没有直接关系。
3讨论
3．1反复冻融一浸提法和已有改进方法的比较
已报道的改进方法主要从提取方式、提取液、提
取温度和提取时间等方面考虑。提取方式的改进采用
直接浸提[68，9】和超声波清洗器振荡处理【2】，提取液采
用90％的乙醇【2，9】和丙酮一乙醇混合液【5J，提取温度采
用50℃的热丙酮溶液【8J和80℃的热乙醇溶液嵋J，通过
提高温度来减少提取时间。
本文提出的反复冻融一浸提法在操作上比上述改
进方法简单，不用水浴升温、超声波振荡，不存在高温
条件下叶绿素a被破坏【2，5】的问题，提取效率的提高主要
通过反复冻融对胞壁的破坏和浸提时间的延长来实现。
提取液仍用90％的丙酮是考虑到与以往数据的可比性，
而且该方法大大减少了操作者与丙酮的接触时问，降低
、了丙酮的毒害作用，同时具有较好的稳定性。
3．2反复冻融一浸提法操作中需注意的问题
由于反复冻融法是利用细胞内冰粒的形成和细
胞液浓度的增高引起溶涨来达到破碎细胞壁的目的，
因此抽滤后的滤膜应保留少许水份。由于滤膜上的水
份含量较少，滤膜的冰冻和融解时间不需太长，一次
冻与融的时间比例大概为20mill／5min，冰冻时间可
以延长，融解时间最好不超过10分钟，滤膜变软即可。
在反复冻融和浸提过程中必需严格避光，可将样
品置于黑色塑料袋。叶绿素a的降解可分为暗降解和光
降解，张武昌研究了光和温度对叶绿素a降解的影
响【l川，结果为一20℃下叶绿素a在黑暗中几乎不降解，
15℃下叶绿素a光降解的速度非常快，而室温下暗降解
的速度则较慢，为O．03d～，相当于23d减半。假设反
复冻融4次，每次融解时间为10111in，可计算出叶绿
素a在融解过程中降解率为0．083％。因此室温下融解
和浸提过程中叶绿素a的降解量可以忽略，但前提必须
是严格避光。在使用分光光度计进行测定过程中，样
品最好置于黑暗环境中以减少叶绿素a的光降解。
还要注意水样在过滤浓缩过程中应加碳酸镁悬浊
液。叶绿素a分子酸化失去镁原子转变成脱镁叶绿素a，
酸化前后的样品在665衄的读数比值约为1．7‘11】。加入
碳酸镁可以防止叶绿素a降解造成结果偏低。
4结论
反复冻融一浸提法跟研磨法比较，具有人为误差
小稳定性好、结果准确且操作简单安全等优点，跟已
报道的改进方法对比，在操作上也具有简单方便的特
点，适合运用到常规的水质监测。采用该方法时过滤
水量的大小对湖水水样的测定结果有一定的影响
(P<0．01)，对于纯藻液影响不明显(P>O．05)。这是
由于湖水水样中的浮游植物种类组成复杂，不同藻的
叶绿素提取效率不一致，在叶绿素较高时，提取效率
有明显的下降。因此，对寡营养水体、中营养水体和
富营养水体，建议较适合的过滤水量分别为500mL～
1 ooOmL、200～500mL和50～100mL。此外，该方
法中采用醋酸纤维滤膜、微孔滤膜和玻璃纤维滤膜对
结果没有显著影响。
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万方数据
浮游植物中叶绿素a提取方法的比较与改进
作者： 林少君， 贺立静， 黄沛生， 韩博平， LIN Shao-Jun， HE Li-Jing， HUNAG Pei-Sheng
， HAN Bo-Ping
作者单位： 暨南大学水生生物研究所,广州,510632
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2005,24(1)
被引用次数： 41次

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