全 文 ：三叶海棠(Nalussieboldji)又名山里红、山茶果，为蔷薇
科植物，广布于辽宁以南海拔 2 000 m 下的山区 [1]，临床
试验表明三叶海棠具有较强的抗菌 、抗炎 、抗癌 、降血
压、降血脂、利尿等疗效作用 。 三叶海棠叶既是一种野
生植物资源，也是一种能显著增强人体免疫机能 、具较
高营养价值的保健茶饮料，有良好的开发前景。 三叶虫
茶用三叶海棠叶饲喂米缟螟 （Aglossa dimidiata）幼虫 ，
然后取其排泄物作药用或茶用的一种茶 ，在我国湖南、
广西一带民间已流传数百年之久， 许多学术专著对虫
茶均有记载 [2]。 近年的研究表明三叶虫茶具有治疗溃疡
性结肠炎 [3]、降血压作用 [4]，且在研究三叶虫茶抗溃疡性
结肠炎有效部位实验中发现其含有丰富的白杨素苷 ，
〔收稿日期〕2008－10－23
〔基金项目〕湖南省卫生厅资助项目（206080）。
〔作者简介〕江星明（1980-），男，湖南浏阳人，助教，主要从事中药质量与资源方面的研究。
HPLC法测定三叶海棠叶中白杨素苷含量
〔摘要〕 目的 建立三叶海棠叶中白杨素苷含量测定方法。 方法 采用高效液相色谱法测定，色谱柱：Gemini
C18 110A 柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈-水(30∶70)，流速：1.0 mL/min，柱温：4O ℃，检测波长：270 nm，
进样量：20 μL。 结果 白杨素苷在 2.0～20.0 μg/mL 范围内具有良好的线性关系（r=0.999 5），三叶海棠叶中白杨素
苷的平均含量为 5.05%，平均回收率为 97.4%，RSD 为 1.2%（n=5）。结论 三叶海棠叶中白杨素苷含量较高，该测定
方法灵敏、结果准确、重现性好。
〔关键词〕 三叶海棠叶；白杨素苷；紫外分光光度法；高效液相色谱法
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕1674－070X（2009）02－0043－03
Determination of Chrysin-7-glucoside
in Leaf of Nalussieboldji with HPLC
JIANG Xing-ming， XIAO Mei-feng, PENG Xin-jun, WEN Li-zhang
（TCM University of Hunan, Changsha, Hunan 410208, China）
〔Abstract〕 Objective To establish a method for the determination of chrysin-7-glucoside
in Nalussieboldji. Method HPLC was used in the determination with Gemini C18 column (150
mm×4.6 mm, 5 μm), mobile phase of acetonitrile-water 30 ∶70, flow rate 1.0 mL/min, column
temperature 40 ℃, detection wavelengh 270 nm and injection volume 20 L. Results Chrysin-7-
glucoside had a linear range in the contents of 2.0~20.0 g/mL （r=0.999 5）and the linear equa-
tion was Y=7.737×104X-6.0×103 in the range of 2.0~20.0 g/mL（r=0.999 5）. The average content
of chrysin-7-glucoside in leaf of Nalussieboldji was 5.05% and the average recovery was 97.4%
with RSD 1.2%（n=5）. Conclusion The method is simple, reliable and accurate for determina-
tion of chrysin-7-glucoside.
〔Key words〕 Nalussieboldji; chrysin-7-glucoside; UV; HPLC
2009 年 4 月第 29 卷第 2 期
Apr． 2009 Vol． 29 No． 2
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of TCM Univ． of Hunan
江星明 1，肖美凤 1，彭新君 1，文礼章 2
（1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.湖南农业大学生物安全科学技术学院，湖南 长沙 411007）
43
图 1 三叶海棠叶中白杨素苷 HPLC 图
可能为有效成分之一。 白杨素苷水解后可得到白杨素，
而白杨素因具有抗氧化 、抗病毒 、抗高血压 、抗糖尿病
及抗肿瘤 [5]等多种药理作用而逐渐引起人们的关注。 目
前三叶海棠叶中白杨素苷的研究尚未见报道 。 本文采
用 TLC 法鉴定了三叶海棠叶中的白杨素苷 ，HPLC 法测
定其含量， 为开发三叶海棠这一野生植物资源提供了
化学基础。
1 实验材料
1.1 仪器
岛津 10AT 高效液相色谱仪、N3000 色谱工作站(岛津
公司, 日本)；UV-2450 紫外可见分光光度仪(岛津公司，日
本)；HH 数显恒温水浴锅（金坛市金城国胜实验仪器厂）；
RE-52A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；AB265-S 电
子分析天平 [梅特勒-托利多仪器 （上海） 有限公司 ]；
SK3300H超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。
1.2 样品与试剂
三叶海棠叶 （湖南农业大学生物安全科学技术学院
文礼章博士提供）；聚酰胺（60～100 目，浙江市台州市路桥
四甲生化塑料厂）；硅胶 G（青岛海洋化工厂）；白杨素标准
品(购于湖南省药检所)；白杨素苷对照品（自制，按峰面积
归一化法测定其含量为 99.2%）；乙腈为色谱纯；水为重蒸
水（自制）；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 白杨素苷对照品的制备[6]
取三叶海棠叶 500 g， 加 12 倍量的丙酮超声提取 3
次，每次 1 h，合并提取液，回收丙酮，其提取物混合聚酰
胺后，干法上聚酰胺柱 （50 cm×3 cm），依次用水，10%、
20%、30%、40%、50%、70%、95%乙醇洗脱，以 TLC 跟踪检
测，合并相同的馏分，浓缩部分溶剂，析出结晶，结晶再以
丙酮进行重结晶，得针状浅黄色结晶，即为白杨素苷。 取
该结晶适量用 6％H2SO4加热水解，析晶，丙酮重结晶即得
白杨素苷元。
2.2 白杨素苷的鉴定及纯度检测
2.2.1 TLC 检测 取白杨素苷及白杨素供试品和白杨素
对照品的丙酮液，分别点于硅胶 G 薄层析上，以氯仿-甲
醇（5∶1）为展开剂，用 10%硫酸乙醇液显色，白杨素苷供试
品为单一的黄色斑点，其 Rf=0.30；白杨素供试品与对照品
斑点的颜色和比移值一致，其 Rf=0.71。
2.2.2 UV 光谱 在 200～500 nm 测定白杨素苷的甲醇溶
液，得白杨素苷的最大吸收波长为 267 nm 和 315 nm；与
经 HPLC-PDA 分离检测其三叶海棠叶丙酮提取物中的白
杨素苷的 UV 光谱基本一致。
2.2.3 纯度测定 取分离纯化后的白杨素苷制成约 20 μg/mL
的溶液，按“2.3.2”项下条件以 HPLC 检测其纯度，用峰面
积归一化法测得上述白杨素苷结晶中白杨素苷的含量为
99.2%。
2.3 三叶海棠叶中白杨素苷的含量测定
2.3.1 供试品溶液和对照品溶液的制备 供试品溶液的制
备：精密称取研碎的三叶海棠叶粉末 0.1 g，置 100 mL的具
塞三角瓶中，加 80%丙酮 20 mL，称定质量，置于 65 ℃的恒
温水浴锅中加热回流 1 h，冷却，再称定质量，用 80%丙
酮补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取 0.5 mL，用流动
相（30% 乙腈）定容于 10 mL 量瓶中，过 0.45 μm 微孔滤
膜，即得。对照品溶液的制备：精密称取白杨素苷 10.0 mg
置于 500 mL 的量瓶中，加甲醇制成每毫升含 20.0 μg 白
杨素苷的溶液, 即得。
2.3.2 色谱条件及系统适用性试验 Gemini C18 110A
柱 (150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水 (30 ∶70)；检
测波长：270 nm，柱温：40 ℃，流速：1.0 mL/min，进样量：
20 μL（定量环）。 在选定的色谱条件下，白杨素苷和样品
中的其它组分可基本分离， 与其相邻色谱峰的分离度大
于 1.5，按白杨素苷峰计算，理论塔板数为 2 100。 供试品
和对照品的 HPLC图见图 1。
（a）对照品 （b）供试品
m
V
m
V
t/min t/min
湖南中医药大学学报 2009 年第 29 卷44
2.3.3 标准曲线的测定 分别精密量取 20.0 μg/mL 的
白杨素苷对照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL 于
10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度 ,搖匀，过 0.45 μm 微孔滤
膜，进样 20 μL 入 HPLC 仪，按上述色谱条件测定。 以峰
面积的积分值（Y）为纵坐标，白杨素苷的浓度（X）为横坐
标，绘制标准曲线，回归直线方程为：
Y=7.737×104X－6.0×103（r=0.999 5）
结果表明白杨素苷浓度在 2.0～20.0 μg/mL 范围内线
性关系良好。
2.3.4 精密度试验 精密移取 16.0 μg/mL 对照品溶液
20 μL，重复进样 6 次，测得白杨素苷峰面积积分值（106）
分 别 为 ：1.246、1.250、1.255、1.241、1.262， 其 平 均 值 为
1.251×106，RSD为 0.65%。 结果表明仪器精密度良好。
2.3.5 重复性试验 精密称取研碎的三叶海棠叶粉末
0.1 g，共 5 份，按“2.3.1”项下制备供试品溶液并按“2.3.2”
项下操作， 计算三叶海棠叶中白杨素苷含量为 5.01％，
RSD=1.1％，表明该方法的重复性良好。 结果见表 1。
2.3.6 稳定性试验 取供试品溶液 20 μL，每 2 h 进样 1
次，重复进样 6 次。测得白杨素苷峰面积积分值（105）分别
为 ：9.26、9.05、9.35、9.25、9.46、9.20， 平均值为 9.26×105，
RSD为 1.5%，结果表明样品在 12 h 内测定基本稳定。
2.3.7 加样回收率试验 精密称取研碎的三叶海棠叶粉
末 0.1 g 共 5 份，分别精密加入白杨素苷 5.00 mg，再加
80%丙酮 20 mL，按“2.3.1”项下制备供试品溶液（测定前
稀释 1 倍）并按“2.3.2”项下方法操作，计算回收率，结果
见表 2。
2.3.8 样品含量测定 精密称取研碎的 3 批三叶海棠叶
粉末 0.1 g，每批 3份，按“2.3.1”项下制备供试品溶液并按
“2.3.2”项下操作，计算 3 批三叶海棠叶中白杨素苷的平
均含量为 5.05％，RSD=1.7％，结果见表 3。
3 讨论
本文就三叶海棠叶的有效成分进行了研究， 分离并
鉴定了其中的白杨素苷，运用 HPLC 法测定了其含量。 结
果显示，三叶海棠叶中的白杨素苷含量较高，水解后可得
到白杨素，为白杨素的开发利用提供了新的资源。
本文考察了白杨素苷在 65 ℃的恒温水浴锅中加热
回流 1 h，白杨素苷不发生水解，保证了白杨素苷测定结
果的可靠性。 在 HPLC 法含量测定中，对流动相进行了考
察，结果以乙腈-水（30∶70）为流动相，白杨素苷具有峰形
好、分离完全和保留时间短的优点。 证明本法快速简便，
具有良好的稳定性、重复性和准确度，可用于药材的质量
控制。
参考文献：
[1] 中国科学院植物研究所．中国高等植物学年鉴[M]．北京：中国科学
技术出版社，1975.
[2] 明·李时珍. 茶蛀虫纲·《本草纲目》(下册)[M]. 北京: 人民卫生出
版社,1982：2 306.
[3] 伍菊英. 三叶虫茶治疗溃疡性结肠炎 31 例疗效观察[J].湖南中医
学院学报，1997, 17(3)：27-28.
[4] 陈晓阳，文礼章，李 晟，等.三叶虫茶对肾性高血压大鼠神经免
疫调节作用的实验研究[J]. 湖南中医学院学报,2006,26(2):4-6.
[5] 王 宇，周秀田，曹建国 .白杨素的抗肿瘤作用[J].长冶医学院学
报，2007，21(1)：77-80.
[6] 许光明，彭新君，肖美凤，等.三叶虫茶中白杨素苷的鉴定及定量
分析[J]. 中国实验方剂学杂志，2008，14(7)：12-14.
表 1 三叶海棠叶中白杨素苷重复性试验测定结果
取样量
（g）
0.100 2
0.099 9
0.100 5
0.100 4
0.099 9
峰面积积
分值（105）
9.65
9.56
9.80
9.76
9.49
含量
（%）
5.02
4.97
5.07
5.04
4.94
平均值±标准差(%)
（x±s）
5.01±0.05
RSD
（%）
1.1
表 2 白杨素苷加样回收试验结果
取样量
（g）
0.100 2
0.100 5
0.099 8
0.099 9
0.100 1
样品中含
量（mg）
5.04
5.06
5.02
5.02
5.04
加入量
（mg）
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
测得总
量（mg）
9.82
9.95
9.92
9.96
9.89
回收率
（%）
95.6
97.8
98.0
98.8
97.0
平均回收
率（%）
97.4
RSD
（%）
1.2
表 3 三叶海棠叶中白杨素苷含量测定结果
峰面积积分值（105）
9.65，9.80，9.85
9.50，9.52，9.51
9.81，9.87，9.84
含量（%）
5.02，5.09，5.12
4.94，4.95，4.95
5.09，5.13，5.11
批内平均
含量(%)
5.08
4.95
5.11
3 批平均
含量(%)
5.05
（本文编辑 徐爱良）
江星明，等 HPLC 法测定三叶海棠叶中白杨素苷含量第 2 期 45